胆石症患者32例血清及唾液中内源性β-葡糖醛酸酶的变化
1 中国人民解放军沈阳军区总医院肝胆外科 辽宁省沈阳市 110015
2中国人民解放军86521部队卫生科 辽宁省沈阳市 110015
辽宁省自然科学基金资助课题，No. 962252
项目负责人 朱善德中国人民解放军沈阳军区总医院肝胆外科 辽宁省沈阳市 110015
收稿日期 2000-04-17 接收日期 2000-05-01
Subject headings cholelithiasis; serodiagnosis; saliva; glucuronidase; enzym-Linked immunsorbent assay
, http://www.100md.com
主题词 胆结石；血清诊断；唾液；葡糖醛酸酶；酶联免疫吸附测定
朱善德, 杨波, 吕东文, 杜晓炬, 展德廷, 李顺明, 蒲菲菲. 胆石症患者32例血清及唾液中内源性β-葡糖醛酸酶的变化.
世界华人消化杂志，2000；8(8)：948-949
人体组织细胞自身产生的内源性β-葡糖醛酸酶(β-G)的质与量与胆红素结石形成有关[1]. 我们选取不同结石类型的胆石症患者为研究对象，采用ELISA技术方法[2]，同步测定血清及唾液中内源性β-G活性，探讨内源性β-G与不同类型胆结石的关系.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 选取1999年沈阳军区总医院手术切除并经病理证实的胆石症患者分为2组，其中胆红素结石组18例，男12例，女6例，平均年龄40.4岁；胆固醇结石组14例，男6例，女8例，平均年龄38.5岁. 两组间性别、年龄分布比较，差异无显著性(P>0.05). 血清标本: 选取32例胆石症患者术前及术后1wk空腹静脉血4mL ，分离血清，保存在-40℃备用. 为减少误差，取相近日期健康献血员30例血清为健康对照组，同时测定β-G活性. 唾液标本: 选取相同32例胆石症患者术前及术后1wk晨起空腹清水漱口后唾液4mL ，保存在-40℃备用. 另选取20例健康人为对照组，同时测定β-G活性.
1.2 方法 用0.05mol·L-1的碳酸盐缓冲液pH 9.6, 1∶2000缓释多克隆抗人β-G抗体包板，4℃过夜，次日以5g·L-1牛血清清蛋白37℃封闭2h，洗后-20℃保存. 将待测标本稀释成不同浓度，各加100μL，37℃ 1h后，加抗人β-G mAb(1∶1000稀释)100μL，37℃ 1h，HRP-SAM IgG (1∶1000稀释) 100μL，37℃ 1h，加各试剂之间均用5g·L-1吐温20，0.01mol·L-1磷酸盐缓冲液洗3次，每次3min，以邻苯二胺为底物，显色15min，用2mol·L-1 H2SO4终止反应，于酶联仪波长490nm处测吸光度(A)值，参考波长655nm. 计算判断值公式为：样品吸光度值/阴性对照吸光度值≥2为阳性.
, http://www.100md.com
统计学处理 β-G活性单位为nkat·L-1，采用T检验[2].
2 结果
胆红素结石组血清β-G活性术前为(210.04±36.67)nkat·L-1，与胆固醇结石组术前(123.36±20.00)nkat·L-1及对照组(113.36±20.00)nkat·L-1比较，差异有非常显著意义(P<0.01). 胆红素结石组血清β-G活性术后为(198.37±30.00)nkat·L-1，与胆固醇结石组术后(121.69±26.67)nkat·L-1及对照组(113.36±20.00)nkat·L-1比较，差异也有非常显著意义(P<0.01). 而无论术前与术后胆固醇结石组与对照组比较，β-G活性差异均无显著意义(P>0.05).
, 百拇医药
胆红素结石组唾液β-G活性术前为(145.03±18.34)nkat·L-1，与胆固醇结石组术前(71.68±11.67)nkat·L-1，及对照组(76.68±11.67)nkat·L-1比较，差异有非常显著意义(P<0.01). 胆红素结石组唾液β-G活性术后为(141.70±20.00)nkat·L-1，与胆固醇结石组术后(73.35±13.34)nkat·L-1及对照组(76.68±11.67)nkat·L-1比较，差异也有非常显著意义(P<0.01). 而无论术前与术后胆固醇结石组与对照组比较，β-G活性差异均无显著意义(P>0.05).
而胆红素结石组内比较，无论血清和唾液在术前与术后、不同性别、发病病程、结石大小，β-G活性差异均无显著意义(P>0.05)；胆固醇结石组内比较，结果亦无显著差异(P>0.05).
, 百拇医药
3 讨论
β-G具有对结合的葡糖醛酸苷的水解作用. 人体β-G有内源性和外源性之分，其中外源性β-G，即胆道感染细菌繁殖产生的β-G，在胆红素结石形成中所起的作用已得到肯定. 细菌酶解学说认为, 外源性β-G，可将水溶性结合胆红素水解为非水溶性游离胆红素，后者与钙质结合形成胆红素结石. 胆红素结石形成与胆道感染细菌繁殖产生外源性β-G的量，作用的内环境以及其抑制物的量与程度有关. 内源性β-G，是机体自身组织细胞产生，合成并分泌的，所有哺乳类组织均存在，其中肝脏特别丰富. 目前关于内源性β-G质与量与胆红素结石形成是否相关，国内外学者尚无统一认识.
我们应用单克隆及多克隆抗人β-G抗体相结合的酶联免疫吸附试验(ELISA)技术，检测胆石症患者血清及唾液中内源性β-G活性，与既往Fishman法或酚酞法测定β-G活性相比，不仅灵敏度高，特异性强，而且排除了胆道感染细菌繁殖产生的外源性β-G的干扰. 本结果表明：无论术前及术后，胆红素结石组血清及唾液中内源性β-G活性均明显高于胆固醇结石组及健康对照组，有非常显著性差异(P<0.01)；而胆固醇结石组β-G活性在术前及术后与健康对照组均无明显差异(P>0.05). 分别对两组内不同因素条件下β-G活性研究表明：胆红素结石组内及胆固醇结石组内个体间，无论血清和唾液在术前与术后、不同性别、发病病程、结石大小，β-G活性差异均无显著意义(P>0.05).
4 参考文献
1 杨波, 朱善德, 张弘, 李为, 杜晓炬, 于众, 于安民. 胆石症患者肝细胞内源性β-葡萄糖醛酸酶的免疫电镜研究.
世界华人消化杂志, 1999;7:701-702
2 杨波, 张弘, 朱善德, 杜晓炬, 李顺明, 于众, 冯新莉, 蒲菲菲, 康健. 胰腺癌患者血清及组织中β-葡萄糖醛酸酶的活性.
世界华人消化杂志, 1999;7:1067, http://www.100md.com(朱善德1 杨 波1 吕东文2 杜晓炬1 展德廷1 李顺明1 蒲菲菲1 )
2中国人民解放军86521部队卫生科 辽宁省沈阳市 110015
辽宁省自然科学基金资助课题，No. 962252
项目负责人 朱善德中国人民解放军沈阳军区总医院肝胆外科 辽宁省沈阳市 110015
收稿日期 2000-04-17 接收日期 2000-05-01
Subject headings cholelithiasis; serodiagnosis; saliva; glucuronidase; enzym-Linked immunsorbent assay
, http://www.100md.com
主题词 胆结石；血清诊断；唾液；葡糖醛酸酶；酶联免疫吸附测定
朱善德, 杨波, 吕东文, 杜晓炬, 展德廷, 李顺明, 蒲菲菲. 胆石症患者32例血清及唾液中内源性β-葡糖醛酸酶的变化.
世界华人消化杂志，2000；8(8)：948-949
人体组织细胞自身产生的内源性β-葡糖醛酸酶(β-G)的质与量与胆红素结石形成有关[1]. 我们选取不同结石类型的胆石症患者为研究对象，采用ELISA技术方法[2]，同步测定血清及唾液中内源性β-G活性，探讨内源性β-G与不同类型胆结石的关系.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 选取1999年沈阳军区总医院手术切除并经病理证实的胆石症患者分为2组，其中胆红素结石组18例，男12例，女6例，平均年龄40.4岁；胆固醇结石组14例，男6例，女8例，平均年龄38.5岁. 两组间性别、年龄分布比较，差异无显著性(P>0.05). 血清标本: 选取32例胆石症患者术前及术后1wk空腹静脉血4mL ，分离血清，保存在-40℃备用. 为减少误差，取相近日期健康献血员30例血清为健康对照组，同时测定β-G活性. 唾液标本: 选取相同32例胆石症患者术前及术后1wk晨起空腹清水漱口后唾液4mL ，保存在-40℃备用. 另选取20例健康人为对照组，同时测定β-G活性.
1.2 方法 用0.05mol·L-1的碳酸盐缓冲液pH 9.6, 1∶2000缓释多克隆抗人β-G抗体包板，4℃过夜，次日以5g·L-1牛血清清蛋白37℃封闭2h，洗后-20℃保存. 将待测标本稀释成不同浓度，各加100μL，37℃ 1h后，加抗人β-G mAb(1∶1000稀释)100μL，37℃ 1h，HRP-SAM IgG (1∶1000稀释) 100μL，37℃ 1h，加各试剂之间均用5g·L-1吐温20，0.01mol·L-1磷酸盐缓冲液洗3次，每次3min，以邻苯二胺为底物，显色15min，用2mol·L-1 H2SO4终止反应，于酶联仪波长490nm处测吸光度(A)值，参考波长655nm. 计算判断值公式为：样品吸光度值/阴性对照吸光度值≥2为阳性.
, http://www.100md.com
统计学处理 β-G活性单位为nkat·L-1，采用T检验[2].
2 结果
胆红素结石组血清β-G活性术前为(210.04±36.67)nkat·L-1，与胆固醇结石组术前(123.36±20.00)nkat·L-1及对照组(113.36±20.00)nkat·L-1比较，差异有非常显著意义(P<0.01). 胆红素结石组血清β-G活性术后为(198.37±30.00)nkat·L-1，与胆固醇结石组术后(121.69±26.67)nkat·L-1及对照组(113.36±20.00)nkat·L-1比较，差异也有非常显著意义(P<0.01). 而无论术前与术后胆固醇结石组与对照组比较，β-G活性差异均无显著意义(P>0.05).
, 百拇医药
胆红素结石组唾液β-G活性术前为(145.03±18.34)nkat·L-1，与胆固醇结石组术前(71.68±11.67)nkat·L-1，及对照组(76.68±11.67)nkat·L-1比较，差异有非常显著意义(P<0.01). 胆红素结石组唾液β-G活性术后为(141.70±20.00)nkat·L-1，与胆固醇结石组术后(73.35±13.34)nkat·L-1及对照组(76.68±11.67)nkat·L-1比较，差异也有非常显著意义(P<0.01). 而无论术前与术后胆固醇结石组与对照组比较，β-G活性差异均无显著意义(P>0.05).
而胆红素结石组内比较，无论血清和唾液在术前与术后、不同性别、发病病程、结石大小，β-G活性差异均无显著意义(P>0.05)；胆固醇结石组内比较，结果亦无显著差异(P>0.05).
, 百拇医药
3 讨论
β-G具有对结合的葡糖醛酸苷的水解作用. 人体β-G有内源性和外源性之分，其中外源性β-G，即胆道感染细菌繁殖产生的β-G，在胆红素结石形成中所起的作用已得到肯定. 细菌酶解学说认为, 外源性β-G，可将水溶性结合胆红素水解为非水溶性游离胆红素，后者与钙质结合形成胆红素结石. 胆红素结石形成与胆道感染细菌繁殖产生外源性β-G的量，作用的内环境以及其抑制物的量与程度有关. 内源性β-G，是机体自身组织细胞产生，合成并分泌的，所有哺乳类组织均存在，其中肝脏特别丰富. 目前关于内源性β-G质与量与胆红素结石形成是否相关，国内外学者尚无统一认识.
我们应用单克隆及多克隆抗人β-G抗体相结合的酶联免疫吸附试验(ELISA)技术，检测胆石症患者血清及唾液中内源性β-G活性，与既往Fishman法或酚酞法测定β-G活性相比，不仅灵敏度高，特异性强，而且排除了胆道感染细菌繁殖产生的外源性β-G的干扰. 本结果表明：无论术前及术后，胆红素结石组血清及唾液中内源性β-G活性均明显高于胆固醇结石组及健康对照组，有非常显著性差异(P<0.01)；而胆固醇结石组β-G活性在术前及术后与健康对照组均无明显差异(P>0.05). 分别对两组内不同因素条件下β-G活性研究表明：胆红素结石组内及胆固醇结石组内个体间，无论血清和唾液在术前与术后、不同性别、发病病程、结石大小，β-G活性差异均无显著意义(P>0.05).
4 参考文献
1 杨波, 朱善德, 张弘, 李为, 杜晓炬, 于众, 于安民. 胆石症患者肝细胞内源性β-葡萄糖醛酸酶的免疫电镜研究.
世界华人消化杂志, 1999;7:701-702
2 杨波, 张弘, 朱善德, 杜晓炬, 李顺明, 于众, 冯新莉, 蒲菲菲, 康健. 胰腺癌患者血清及组织中β-葡萄糖醛酸酶的活性.
世界华人消化杂志, 1999;7:1067, http://www.100md.com(朱善德1 杨 波1 吕东文2 杜晓炬1 展德廷1 李顺明1 蒲菲菲1 )