西安地区TTV毒株结构呈环形
输血传播病毒;聚合酶链反应;环状结构;基因表达;基因组;血清诊断,项目负责人,主题词,1材料和方法,1.1材料,表,1用于TTVDNA环状结构研究的引物序列,1.2方法,2结果,图,1,3讨论,4参考文献
中国人民解放军第四军医大学唐都医院 1呼吸内科 2感染病诊疗中心 陕西省西安市 710038项目负责人 傅恩清 中国人民解放军第四军医大学唐都医院呼吸内科 陕西省西安市 710038
Tel. 0086-29-3577541
Email. Fueqing@tdwww.fmmu.edu.cn
收稿日期 2000-09-21 接收日期 2000-09-28
主题词 输血传播病毒；聚合酶链反应；环状结构；基因表达；基因组；血清诊断
傅恩清, 白雪帆, 王平忠, 潘蕾, 李光玉, 杨为松, 周永兴. 西安地区TTV毒株结构呈环形. 世界华人消化杂志，2001；9(1)：95-97
自TTV1997年被发现后[1],我国各地已在不同人群中发现TTV感染[2-11];国外学者[12-18]对TTV分子结构的研究发现,TTV存在线性与环形两种基因组结构形式,目前Genebank中可检索到大于3000nt以上的较为完整的TTV毒株共有7株,其中,3株为环状,4株为线状;我国上海地区有同样的TTV环形结构研究报告[19],但其他地区包括西北地区至今未见报道. 也未见报道任何关于西安地区TTV毒株特征性基因序列,包括全序列或部分序列,我们就西安地区TTV基因组结构是否环形,做了初步研究,以期了解西安地区TTV毒株部分特点,现报道如下.
1 材料和方法
1.1 材料 用我们检测引物[1]检测不明原因肝炎患者血清,其甲-庚型肝炎病毒血清标志物均为阴性,其血清转氨酶升高(>40u/L),取其血清约2ml置于玻璃试管中，离心(转速3000r·min-1)分离血清，取20μL于高压灭菌的1.5mL Ependdorf管中，加等量裂解液煮沸10min，再以12000r·min-1高速离心10min备用. 用参照文献[1]设计的检测引物(TTV01～04)检测,再将检测引物检测的TTV DNA阳性血清用新设计的用于环形结构的套式引物,进行套式PCR扩增. 用PC-Gene软件,对Genekank检索到的BDH1株、SANBAN株、TA278株、TUS01株等四株TTV基因组序列,3＇端及5＇端1200nt分别做同源性比较,以同源性最高处设计引物,其中,3＇端设计两条上游引物(TTVa与TTVc),5＇端设计两下游引物(TTVb与TTVd),引物序列(表1),预计内引物扩增片段长度为182bp. 设计序列由美联公司合成. Taq DNA聚合酶、dNTPs、低熔点琼脂糖、各型肝炎系列检测试剂盒均由华美公司生产. PCR仪为美国PE公司生产的2400型全自动PCR仪. ......
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