原发性肝癌钙粘素E和基质金属蛋白酶检测及临床意义
天津市第三中心医院肝胆疾病研究所 天津市 300170
项目负责人 朱争艳天津市第三中心医院肝胆疾病研究所 天津市 300170
收稿日期 2001-03-12 接受日期 2001-03-20
主题词 肝肿瘤/病理学；预后；金属蛋白酶类/分析；钙粘着糖蛋白酶类/分析
朱争艳, 杜智, 王毅军, 张文, 孙保存. 原发性肝癌钙粘素E和基质金属蛋白酶检测及临床意义. 世界华人消化杂志，2001；9(7)：839-840
肝癌的侵袭转移是导致肝癌复发和死亡的重要原因[1-7]，已有研究提示E-cadherin与肝癌的肝内播散有关[8]；基质金属蛋白酶可以降解胶原，参与包括基膜在内的细胞外基质降解过程，与肿瘤的浸润和转移密切相关. 检测这些指标可为临床预后提供有价值的参考指标[9-11]. 我们收集了1998-12/2001-02原发性肝细胞癌手术标本68例，利用免疫组化技术检测E-cadherin，MMP-2和MMP-9，结果如下.
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1 材料和方法
1.1 材料 外科切除肝癌标本68例，男50例，女18例，年龄37岁～75岁. 参考临床病理指标将病例分为侵袭转移倾向高危组和低危组，凡符合下列条件之一者归为侵袭转移倾向高危组：①肝门淋巴结转移；②门静脉有癌栓；③同一肝叶内主癌灶周围肿瘤数目≥2个或有多个小卫星结节或伴有包膜浸润破坏. 在68例标本中高危组病例33例，低危组35例. 经40g·L-1甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，厚5μL，HE染色. 肝细胞癌恶性程度分级按Edmondson标准，Ⅱ级16例，Ⅲ级38例，Ⅳ级14例. 癌旁组织68例，其中肝硬变50例，慢性肝炎18例.
1.2 方法 免疫组化染色采用LSAB法. 用微波炉进行抗原修复，每次实验均设阳性对照和阴性对照.
统计学处理 应用统计软件SPSS行χ2检验.
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2 结果
癌旁组织中E-cadherin全部表达；MMP-2有10例、MMP-9有18例在紧靠癌组织部位有表达. 癌组织中表达见表1.
表1 肝癌组织中E-cadherin MMP-2, MMP-9的表达(%)
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aP<0.05 vs高危组;bP<0.01 vs HCCⅡ.
3 讨论
钙粘素(cadherin)家族是一类依赖钙的跨膜单链糖蛋白. 可介导细胞间的粘附反应，参与构建细胞间粘合连接. 已证明多种肿瘤细胞有钙粘素的表达量减少或结构异常，导致肿瘤细胞间的粘附作用减弱或丧失. 而基因转染实验也证实钙粘素可限制或逆转肿瘤的转移行为[12,13]. 本结果显示，E-cadherin在癌组织中较少表达，即使有表达亦多为残缺不全的膜表达；其表达量在高危组中显著低于低危组，提示与肝癌的侵袭转移倾向密切相关；我们还发现，E-cadherin的表达与HCC的包膜是否完整，癌细胞分化程度高低密切相关. 因此我们认为E-cadherin的表达缺失与HCC的侵袭转移密切相关，并参与肝癌细胞的分化调节，影响患者的预后.
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基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs)家族是一族Zn2+依赖性蛋白酶，大量研究表明，肝癌细胞分泌的MMPs在降解细胞外基质，促进肿瘤的生长、浸润和转移中起关键作用[14-18]. 我们的研究发现MMP-2尤其是MMP-9均表达肿瘤浸润前缘，提示MMP-9在肝癌的侵袭转移中起重要作用；另外在高低侵袭转移能力组之间MMP-9表达水平的差异说明MMP-9表达水平与HCC侵袭转移能力密切相关，可通过检测癌及癌旁组织MMP-2和MMP-9的表达水平推断肝癌复发、转移风险. 我们的研究提示，检测E-cadherin，MMP-2，MMP-9，联合应用其他能反映肝癌侵袭、转移潜能的临床、病理因素及其他生物学因素，将有助于筛选复发、转移的高危对象并采取及时合理的综合措施以控制肝癌的复发转移，提高其生存率[19-32].
, 百拇医药
4 参考文献
1 汤钊猷. 中国肝癌临床研究进展. 华人消化杂志, 1998;6:1013-1016
2 Tang ZY. Clinical research of hepatocellular carcinoma in the 21st century. China Natl J New Gastroenterol, 1995;1:2-3
3 Tang ZY. Advances in clinical research of hepatocellular carcinoma in China. World J Gastroenterol, 1998;4(Suppl 2):4-7
4 周信达. 肝癌复发转移防治的研究进展. 世界华人消化杂志, 1999;7:260-261
, 百拇医药
5 何兴祥, 王家马龙. 肝癌基因治疗的现状与展望. 华人消化杂志, 1998;6:158-159
6 顾公望, 周汉高. 肝癌病理与预后的关系. 华人消化杂志, 1998;6:632-633
7 刘为纹. 肝细胞性肝癌病因学研究. 世界华人消化杂志, 1999;7:93-95
8 Osada T, Sakamoto M, Ino Y, Iwamatsu A, Matsuno Y, Muto T, Hirohashi S. E-cadherin is involved in the intrahepatic metastasis
of hepatocellular carcinoma. Hepatology, 1996;24:1460-1467
, 百拇医药
9 曲增强, 吴孟超, 陈汉, 钱其军, 方石岗. Ⅳ型胶原酶的表达与肝癌侵袭转移的关系. 新消化病学杂志, 1997;5:575-576
10 蒋泽生, 高毅. 基质金属蛋白酶的生物学特性及其在肝癌浸润转移中的作用. 世界华人消化杂志，2000;8:1403-1404
11 Endo K, Ueda T, Ueyama J, Ohta T, Terada T. Immunoreactive E-cadherin, Alpha-catenin, beta-catenin, and gamma-catenin
proteins in hepatocellular carcinoma: relationships with tumor grade, clinicopathologic parameters, and patients survival.
, 百拇医药
Hum Pathol, 2000;31:558-565
12 刘丽华, 肖文华. 5-脱氧杂氮胞苷诱导肝癌细胞E-Cadher in表达增强. 世界华人消化杂志，2000;8(特刊8):91
13 贺建宇，姚昊，周信达，刘银坤，汤钊猷. 上皮钙粘蛋白与癌细胞粘附性质的研究. 中华肝脏病杂志，2001；9：107
14 Maatta M, Soini Y, Liakka A, Autio-Harmainen H. Differential expression of matrix metalloproteinase (MMP-2), MMP-9, and
membrane type 1-MMP in hepatocellular and pancreatic adenocarcinoma: implications for tumor progression and clinical
, 百拇医药
prognosis. Clin Cancer Res, 2000;6:2726-2734
15 洪照友, 俞金龙, 张云生, 高毅. 基质金属蛋白酶-9，CD34的表达与肝癌侵袭转移的关系. 世界华人消化杂志，2001;9:170-174
16 陈华江. 基质金属蛋白酶及其抑制物与肿瘤侵袭转移的关系. 国外医学肿瘤学分册，2001；28：23-25
17 Sakamoto Y, Mafune K, Mori M, Shiraishi T, Imamura H, Mori M, Takayama T, Makuuchi M. Overexpression of MMP-9 correlates
with growth of small hepatocellular carcinoma. Int J Oncol， 2000;17:237-243
, 百拇医药
18 Harada T, Arii S, Mise M, Imamura T, Higashitsuji H, Furutani M, Niwano M, Ishigami S, Fukumoto M, Seiki M, Sato H, Imamura
M. Membrane-type matrix metalloproteinase-1 (MT1-MTP) gene is overexpressed in highly invasive hepatocellular carcinomas.
J Hepatol, 1998;28:23123-23129
19 Niu Q, Tang ZY, Ma ZC, Qin LX, Zhang LH. Serum vascular endothelial growth factor is a potential biomarker of metastatic
, http://www.100md.com
recurrence after curative resection of hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol, 2000;6:565-568
20 Lin GY, Chen ZL, Lu CM, Li Y, Ping XJ, Huang R. Immunohistochemical study on p53, H-rasp21, c-erbB-2 protein and PCNA
expression in HCC tissues of Han and minority ethnic patients. World J Gastroenterol, 2000;6:234-238
21 Yang DH, Zhang MQ, Du J, Xu C, Liang QM, Mao JF, Qin HR, Fan ZR. Inhibitory effect of IGF-Ⅱ antisense RNA on
, 百拇医药
malignant phenotype of hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol, 2000;6:266-267
22 Mei MH, Xu J, Shi QF, Yang JH, Chen Q, Qin LL. Clinical significance of serum intercellular adhesion molecule-1 detection in
patients with hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol, 2000;6:408-410
23 Jiang YF, Yang ZH, Hu JQ. Recurrence or metastasis of HCC: predictors, early detection and experimental antiangiogenic
, http://www.100md.com
therapy. World J Gastroenterol, 2000;6:61-65
24 郑世曦, 陈汉琴, 杨军, 阮幼冰, 武忠弼. 层粘蛋白在人原发性肝细胞癌转移中的意义. 华人消化杂志, 1998;6:507-509
25 张明, 倪灿荣, 戴益民, 范淼, 陈晓东, 张松平. HCC中nm23H1mRNA、蛋白产物的表达与预后指标的相关性研究.
世界华人消化杂志, 1999;7:342
26 黄宇琦, 高毅, 杨继震, 方石岗, 王宇. 大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶及其抑制因子的表达. 世界华人消化杂志, 1999;7:795-796
27 李楠, 徐采朴, 宋波, 刘为纹, 王鑫, 张朝山, 徐元基, 冯东晓. 金属蛋白酶抑制剂TIMP-2基因转染对胃癌细胞体内外生长侵袭与细胞外
, http://www.100md.com
基质的相关性. 华人消化杂志, 1998;6:663-666
28 王影, 杨素琼, 王在国, 蒲晓东, 孙维纲, 刘光中. 原发性肝细胞癌组织中P16蛋白表达的意义. 华人消化杂志, 1998;6:412-414
29 彭晓谋, 彭文伟, 陈青, 姚集鲁. 肝细胞癌P53，Bcl-2蛋白的表达和细胞凋亡. 华人消化杂志, 1998;6:834-836
30 叶晟, 冯懿正, 刘友富, 袁政洪. P53，P21，nm23和PCNA在原发性肝癌中的表达与预后的关系. 世界华人消化杂志, 1999;7:160
31 王影, 杨素琼, 王在国, 覃胜, 孙维纲, 刘光中. 原发性肝细胞癌中ras P21，C-erbB-2和P16蛋白的表达意义.
世界华人消化杂志, 1999;7:808-809
32 郑世曦, 刘丽江, 邵永胜, 郑清平, 阮幼冰, 武忠弼. 原发性肝癌转移与ras p53基因及其蛋白表达的关系.
华人消化杂志, 1998;6:104-105, 百拇医药(朱争艳 杜 智 王毅军 张 文 孙保存)
项目负责人 朱争艳天津市第三中心医院肝胆疾病研究所 天津市 300170
收稿日期 2001-03-12 接受日期 2001-03-20
主题词 肝肿瘤/病理学；预后；金属蛋白酶类/分析；钙粘着糖蛋白酶类/分析
朱争艳, 杜智, 王毅军, 张文, 孙保存. 原发性肝癌钙粘素E和基质金属蛋白酶检测及临床意义. 世界华人消化杂志，2001；9(7)：839-840
肝癌的侵袭转移是导致肝癌复发和死亡的重要原因[1-7]，已有研究提示E-cadherin与肝癌的肝内播散有关[8]；基质金属蛋白酶可以降解胶原，参与包括基膜在内的细胞外基质降解过程，与肿瘤的浸润和转移密切相关. 检测这些指标可为临床预后提供有价值的参考指标[9-11]. 我们收集了1998-12/2001-02原发性肝细胞癌手术标本68例，利用免疫组化技术检测E-cadherin，MMP-2和MMP-9，结果如下.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 外科切除肝癌标本68例，男50例，女18例，年龄37岁～75岁. 参考临床病理指标将病例分为侵袭转移倾向高危组和低危组，凡符合下列条件之一者归为侵袭转移倾向高危组：①肝门淋巴结转移；②门静脉有癌栓；③同一肝叶内主癌灶周围肿瘤数目≥2个或有多个小卫星结节或伴有包膜浸润破坏. 在68例标本中高危组病例33例，低危组35例. 经40g·L-1甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，厚5μL，HE染色. 肝细胞癌恶性程度分级按Edmondson标准，Ⅱ级16例，Ⅲ级38例，Ⅳ级14例. 癌旁组织68例，其中肝硬变50例，慢性肝炎18例.
1.2 方法 免疫组化染色采用LSAB法. 用微波炉进行抗原修复，每次实验均设阳性对照和阴性对照.
统计学处理 应用统计软件SPSS行χ2检验.
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2 结果
癌旁组织中E-cadherin全部表达；MMP-2有10例、MMP-9有18例在紧靠癌组织部位有表达. 癌组织中表达见表1.
表1 肝癌组织中E-cadherin MMP-2, MMP-9的表达(%)
| 表达物 | 高危组 | 低危组 | HCCⅡ | HCCⅢ | HCCⅣ |
| E-cadherin | 6.1 (2/33) | 28.6(10/35)a | 43.8(7/16) | 13.2 (5/38) | 0 (0/14)b |
| MMP-2 | 42.4(14/33) | 34.3(12/35) | 43.8(7/16) | 34.2(13/38) | 50.0(7/14) |
| MMP-9 | 60.6(20/33) | 34.3(12/35)a | 50.0(7/14) | 42.1(16/38) | 64.3(9/14) |
, http://www.100md.com
aP<0.05 vs高危组;bP<0.01 vs HCCⅡ.
3 讨论
钙粘素(cadherin)家族是一类依赖钙的跨膜单链糖蛋白. 可介导细胞间的粘附反应，参与构建细胞间粘合连接. 已证明多种肿瘤细胞有钙粘素的表达量减少或结构异常，导致肿瘤细胞间的粘附作用减弱或丧失. 而基因转染实验也证实钙粘素可限制或逆转肿瘤的转移行为[12,13]. 本结果显示，E-cadherin在癌组织中较少表达，即使有表达亦多为残缺不全的膜表达；其表达量在高危组中显著低于低危组，提示与肝癌的侵袭转移倾向密切相关；我们还发现，E-cadherin的表达与HCC的包膜是否完整，癌细胞分化程度高低密切相关. 因此我们认为E-cadherin的表达缺失与HCC的侵袭转移密切相关，并参与肝癌细胞的分化调节，影响患者的预后.
, http://www.100md.com
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs)家族是一族Zn2+依赖性蛋白酶，大量研究表明，肝癌细胞分泌的MMPs在降解细胞外基质，促进肿瘤的生长、浸润和转移中起关键作用[14-18]. 我们的研究发现MMP-2尤其是MMP-9均表达肿瘤浸润前缘，提示MMP-9在肝癌的侵袭转移中起重要作用；另外在高低侵袭转移能力组之间MMP-9表达水平的差异说明MMP-9表达水平与HCC侵袭转移能力密切相关，可通过检测癌及癌旁组织MMP-2和MMP-9的表达水平推断肝癌复发、转移风险. 我们的研究提示，检测E-cadherin，MMP-2，MMP-9，联合应用其他能反映肝癌侵袭、转移潜能的临床、病理因素及其他生物学因素，将有助于筛选复发、转移的高危对象并采取及时合理的综合措施以控制肝癌的复发转移，提高其生存率[19-32].
, 百拇医药
4 参考文献
1 汤钊猷. 中国肝癌临床研究进展. 华人消化杂志, 1998;6:1013-1016
2 Tang ZY. Clinical research of hepatocellular carcinoma in the 21st century. China Natl J New Gastroenterol, 1995;1:2-3
3 Tang ZY. Advances in clinical research of hepatocellular carcinoma in China. World J Gastroenterol, 1998;4(Suppl 2):4-7
4 周信达. 肝癌复发转移防治的研究进展. 世界华人消化杂志, 1999;7:260-261
, 百拇医药
5 何兴祥, 王家马龙. 肝癌基因治疗的现状与展望. 华人消化杂志, 1998;6:158-159
6 顾公望, 周汉高. 肝癌病理与预后的关系. 华人消化杂志, 1998;6:632-633
7 刘为纹. 肝细胞性肝癌病因学研究. 世界华人消化杂志, 1999;7:93-95
8 Osada T, Sakamoto M, Ino Y, Iwamatsu A, Matsuno Y, Muto T, Hirohashi S. E-cadherin is involved in the intrahepatic metastasis
of hepatocellular carcinoma. Hepatology, 1996;24:1460-1467
, 百拇医药
9 曲增强, 吴孟超, 陈汉, 钱其军, 方石岗. Ⅳ型胶原酶的表达与肝癌侵袭转移的关系. 新消化病学杂志, 1997;5:575-576
10 蒋泽生, 高毅. 基质金属蛋白酶的生物学特性及其在肝癌浸润转移中的作用. 世界华人消化杂志，2000;8:1403-1404
11 Endo K, Ueda T, Ueyama J, Ohta T, Terada T. Immunoreactive E-cadherin, Alpha-catenin, beta-catenin, and gamma-catenin
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, 百拇医药
Hum Pathol, 2000;31:558-565
12 刘丽华, 肖文华. 5-脱氧杂氮胞苷诱导肝癌细胞E-Cadher in表达增强. 世界华人消化杂志，2000;8(特刊8):91
13 贺建宇，姚昊，周信达，刘银坤，汤钊猷. 上皮钙粘蛋白与癌细胞粘附性质的研究. 中华肝脏病杂志，2001；9：107
14 Maatta M, Soini Y, Liakka A, Autio-Harmainen H. Differential expression of matrix metalloproteinase (MMP-2), MMP-9, and
membrane type 1-MMP in hepatocellular and pancreatic adenocarcinoma: implications for tumor progression and clinical
, 百拇医药
prognosis. Clin Cancer Res, 2000;6:2726-2734
15 洪照友, 俞金龙, 张云生, 高毅. 基质金属蛋白酶-9，CD34的表达与肝癌侵袭转移的关系. 世界华人消化杂志，2001;9:170-174
16 陈华江. 基质金属蛋白酶及其抑制物与肿瘤侵袭转移的关系. 国外医学肿瘤学分册，2001；28：23-25
17 Sakamoto Y, Mafune K, Mori M, Shiraishi T, Imamura H, Mori M, Takayama T, Makuuchi M. Overexpression of MMP-9 correlates
with growth of small hepatocellular carcinoma. Int J Oncol， 2000;17:237-243
, 百拇医药
18 Harada T, Arii S, Mise M, Imamura T, Higashitsuji H, Furutani M, Niwano M, Ishigami S, Fukumoto M, Seiki M, Sato H, Imamura
M. Membrane-type matrix metalloproteinase-1 (MT1-MTP) gene is overexpressed in highly invasive hepatocellular carcinomas.
J Hepatol, 1998;28:23123-23129
19 Niu Q, Tang ZY, Ma ZC, Qin LX, Zhang LH. Serum vascular endothelial growth factor is a potential biomarker of metastatic
, http://www.100md.com
recurrence after curative resection of hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol, 2000;6:565-568
20 Lin GY, Chen ZL, Lu CM, Li Y, Ping XJ, Huang R. Immunohistochemical study on p53, H-rasp21, c-erbB-2 protein and PCNA
expression in HCC tissues of Han and minority ethnic patients. World J Gastroenterol, 2000;6:234-238
21 Yang DH, Zhang MQ, Du J, Xu C, Liang QM, Mao JF, Qin HR, Fan ZR. Inhibitory effect of IGF-Ⅱ antisense RNA on
, 百拇医药
malignant phenotype of hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol, 2000;6:266-267
22 Mei MH, Xu J, Shi QF, Yang JH, Chen Q, Qin LL. Clinical significance of serum intercellular adhesion molecule-1 detection in
patients with hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol, 2000;6:408-410
23 Jiang YF, Yang ZH, Hu JQ. Recurrence or metastasis of HCC: predictors, early detection and experimental antiangiogenic
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24 郑世曦, 陈汉琴, 杨军, 阮幼冰, 武忠弼. 层粘蛋白在人原发性肝细胞癌转移中的意义. 华人消化杂志, 1998;6:507-509
25 张明, 倪灿荣, 戴益民, 范淼, 陈晓东, 张松平. HCC中nm23H1mRNA、蛋白产物的表达与预后指标的相关性研究.
世界华人消化杂志, 1999;7:342
26 黄宇琦, 高毅, 杨继震, 方石岗, 王宇. 大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶及其抑制因子的表达. 世界华人消化杂志, 1999;7:795-796
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基质的相关性. 华人消化杂志, 1998;6:663-666
28 王影, 杨素琼, 王在国, 蒲晓东, 孙维纲, 刘光中. 原发性肝细胞癌组织中P16蛋白表达的意义. 华人消化杂志, 1998;6:412-414
29 彭晓谋, 彭文伟, 陈青, 姚集鲁. 肝细胞癌P53，Bcl-2蛋白的表达和细胞凋亡. 华人消化杂志, 1998;6:834-836
30 叶晟, 冯懿正, 刘友富, 袁政洪. P53，P21，nm23和PCNA在原发性肝癌中的表达与预后的关系. 世界华人消化杂志, 1999;7:160
31 王影, 杨素琼, 王在国, 覃胜, 孙维纲, 刘光中. 原发性肝细胞癌中ras P21，C-erbB-2和P16蛋白的表达意义.
世界华人消化杂志, 1999;7:808-809
32 郑世曦, 刘丽江, 邵永胜, 郑清平, 阮幼冰, 武忠弼. 原发性肝癌转移与ras p53基因及其蛋白表达的关系.
华人消化杂志, 1998;6:104-105, 百拇医药(朱争艳 杜 智 王毅军 张 文 孙保存)