表皮生长因子受体单克隆抗体抗人结肠癌LST174的作用
1华北大学医学院生理教研室 吉林省吉林市 132001
2北京协和医科大学病理科 北京市 100730
项目负责人 曲娴 华北大学医学院生理教研室 吉林省吉林市 132001
Tel. 0086-432-2452575 Ext.2045
收稿日期 2001-01-06 接受日期 2001-02-11
主题词 受体,表皮生长因子-尿抑胃素/免疫学；抗体，单克隆/治疗应用；结肠肿瘤/药物治疗；结肠肿瘤/免疫学
, http://www.100md.com
曲娴, 陈杰, 刘彤华. 表皮生长因子受体单克隆抗体抗人结肠癌LST174的作用. 世界华人消化杂志，2001；9(7)：841
结肠癌在我国不断增多[1-11]，其晚期治疗仍极困难[12-16]. 我们探讨表皮生长因子受体单克隆抗体(EGFR mAb)抗人结肠癌作用的实验研究，为探索肿瘤治疗提供新途径.
1 材料和方法
LST174在体外用RPMI1640培养液、置50mL·L-1 CO2孵箱，37℃常规培养. ①细胞计数：于24孔板上每孔植入1.6×104个LST174对数生长期细胞，每组分为3个平行组，换成低血清培养基(5mL·L-1胎牛血清的RPMI1640)，实验组EGFR mAb选用3个不同的浓度(0.625，1.25，2.5mL·L-1)，隔日收集细胞计数. ②细胞生长曲线测定：在24孔板上，将各组细胞以1.5×104/孔接种，每组21个孔，设3个平行孔，每组每天分别计数3个平行孔，取平均值共7d. EGFR mAb组(1.25mL·L-1)与对照组对比，绘制成生长曲线. ③细胞增殖能力测定： 采用MTT法，以3×103/孔接种于96孔板，细胞贴壁后加入浓度为(1.25mL·L-1)的EGFR mAb，设对照组，连续培养3d，每组设20个平行孔，在550nm波长测各孔吸光度A值.
, 百拇医药
2 结果
用不同剂量的EGFR mAb处理LST174结肠癌细胞系，均可见一定程度的增殖抑制，这种抑制作用随抗体浓度增高而增加，呈剂量依赖性. 抗-EGFR抗体组较对照组细胞数明显降低(P<0.01). 不同浓度之间比较： 当EGFR mAb为0.625mL·L-1时细胞计数最高，是对照组的61.3%；当EGFR mAb为2.5mL·L-1时细胞计数最低，是对照组的33.8%.EGFR单克隆抗体组细胞生长受到抑制，细胞生长曲线较对照组速度减慢. MTT值显示实验组较对照组细胞增殖能力低，抑制率为42.3%(P<0.01).
3 讨论
表皮生长因子受体具有酪氨酸蛋白激酶活性，其介导的信号途径在细胞生长与分化中有重要作用[17-19]. 研究表明EGFR在人类许多上皮源性恶性肿瘤组织中表达增强[20-26]，过度表达的EGFR不断将表皮生长因子的刺激导入细胞内，引起细胞持续分裂增殖，最终导致肿瘤发生. 我们在以往实验中已证实，LST174结肠癌细胞系有EGFR mRNA表达及生长因子自分泌环的存在[27]. 为此，针对EGFR进行结肠癌分子免疫治疗成为可能，EGFR mAb能特异性地识别EGFR，阻断其介导的信号传导，打断自分泌环路，从而抑制肿瘤生长[28，29]. 本结果显示EGFR mAb可抑制人结肠癌LST174细胞生长，具有一定的抗结肠癌作用.
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4 参考文献
1 于皆平, 董卫国. 大肠癌早期诊断的现状. 世界华人消化杂志, 1999;7:553-554
2 范应方, 黄宗海. 结直肠癌基因治疗研究进展. 世界华人消化杂志，2001;9:427-430
3 郁宝铭, 赵任. 大肠癌分子生物学研究的现状. 世界华人消化杂志, 1999;7:173-175
4 黄宗海, 余文林, 杨力, 宋惠娟, 杨继震. 逆转录病毒介导HSVtk基因转导体外抗结肠癌的作用. 世界华人消化杂志，2001;9:84-86
5 杨权烈, 黄国栋, 李亮. 晚期大肠癌的临床治疗观察. 华人消化杂志, 1998;6(特刊7):413
, 百拇医药
6 卢献平, 李宝金, 陈声乐, 吕斌, 蒋宁一. 化疗及导向化疗治疗大肠癌与癌细胞凋亡研究. 世界华人消化杂志, 1999;7:332-334
7 徐延豪, 宋今丹. 肿瘤相关抗原LEA在大肠癌前病变及早期肠癌诊断中应用的研究. 世界华人消化杂志, 1999;7:992
8 周志宏,沈志祥. 大肠癌肿瘤坏死因子的研究进展. 世界华人消化杂志，2000;8:700-701
9 张亚历, 张振书, 吴保平, 孙正基, 林金容, 周殿元. 大肠癌相关标记物筛检高危人群的评价. 世界华人消化杂志，2000;8:1188-1190
10 许健, 陈君坤, 刘福坤, 吴波, 黄伟, 曹建民, 李成郎. 大肠癌术前化疗疗效的病理组织学对照研究. 华人消化杂志, 1998;6:891-893
, http://www.100md.com
11 刘时才, 白馨, 韦荣干, 黄振录. 半乳糖氧化酶检测大肠癌和癌前病变T抗原. 华人消化杂志, 1998;6:990-991
12 卿三华,蒋会勇,齐德林,周正端,黄祥成,张福明,盛权根. 影响大肠癌淋巴结转移的因素间相关性探讨. 世界华人消化杂志，2000;8:654-657
13 吴金生, 何勇, 王述民. 脂质体包裹EGFR反义寡脱氧核苷酸抑制人大肠癌细胞的增殖. 华人消化杂志, 1998;6:762-764
14 Wang HM, Rajagopal S, Chakrabarty S. Inhibition of human colon cancer malignant cell behavior and growth by antisense
epidermal growth factor receptor expression vector. Anticancer Res, 1998;18:2297-2300
, http://www.100md.com
15 赵任, 郁宝铭, 张国弛, 郑民华, 李东华, 黄梁, 邹鸿志. 手术前后补硒对大肠癌患者的免疫功能及抗氧化功能的影响.
世界华人消化杂志，2000;8:1013-1016
16 谷化平, 倪灿荣, 詹熔洲. 大肠癌CD15, CD44v6和nm23H1的mRNA表达与转移及预后的相关性. 世界华人消化杂志，2000;8:887-891
17 于永利. 生长因子的信号传递异常和恶性肿瘤的发生. 中国免疫学杂志，1999；15：289-290
18 Tong WM, Ellinger A, Sheinin Y, Cross HS. Epidermal growth factor receptor expression in primary cultured human
, http://www.100md.com
colorectal carcinoma cells. Br J Cancer, 1998;77:1792-1798
19 Ruck A, Paulie S. The epidermal growth factor receptors is involved in autocrine growth of human bladder carcinoma cell
lines. Anticancer Res, 1997;17:1925-1931
20 Lopez Guerrero JA, Bolufer Gilabert P, Vera Sempere FJ, Marugan de la Concha I, Barragan Gonzalez E. C-erbB-2 expression
and its relationship with ploidy, p53 abnormalities and epidermal growth factor receptor content in human non-small cell lung
, http://www.100md.com
cancer. Clin Chim Acta, 1999;285:105-120
21 Ioachim E, Kamina S, Demou A, Kontostolis M, Lolis D, Agnantis NJ. Immunohistochemical localization of metallothionein in
human breast cancer in comparison with cathepsin D, stromelysin-1, CD44, extracellular matrix components, p53, Rb,C-erbB-2, EGFR, steroid receptor content and proliferation. Anticancer Res, 1999;19:2133-2139
22 Slesak B, Harlozinska A, Porebska I, Bojarowski T, Lapinska J, Rzeszutko M, Wojnar A. Expression of epidermal growth factor
, 百拇医药
receptor family proteins (EGFR, c-erbB-2 and c-erbB-3) in gastric cancer and chronic gastritis.
Anticancer Res, 1998;18:2727-2732
23 马祥君，王启堂，张永生. 乳腺癌C-erbB-2、表皮生长因子受体基因蛋白表达与预后的关系. 癌症，1998；16：111-113
24 Fan WH, Lu YL, Deng F, Ge XM, Liu S, Tang PH. EGFR antisense RNA blocks expression of the epidermal growth factor receptor
and partially reverse the malignant phenotype of human breast cancer MDA-MB-231 cells. Cell Res,1998;8:63-71
, http://www.100md.com
25 王述民, 吴金生, 要秀, 何泽生, 潘伯荣. TGFα，EGFR反义寡聚核苷酸抑制人大肠癌细胞的增殖. 世界华人消化杂志, 1999;7:522-524
26 王青, 吴金生, 高德明, 赖大年, 马庆久. EGF受体和转化生长因子α mRNA在人大肠癌组织的表达意义.
世界华人消化杂志, 1999;7:590-592
27 曲娴，陈杰，刘彤华，高洁. 人结肠癌中EGFR、EGF及TGFα的基因表达. 中国医学科学院学报，1994；16：259
28 Yang XD, Jia XC, Corvalan JR, Wang P, Davis CG, Jakobovits A. Eradication of established tumors by a fully human
, http://www.100md.com
monoclonal antibody to the epidermal growth factor receptor without concomitant chemotherapy.
Cancer Res, 1999;59:1236-1243
29 Van Gog FB, Brakenhoff RH, Stigter van Walsum M, Snow GB, van Dongen GA. Perspectives of combined radioimmunotherapy
and anti-EGFR antibody therapy for the treatment of residual head and neck cancer. Int J Cancer, 1998;77:13-18, 百拇医药(曲 娴1 陈 杰2 刘彤华2)
2北京协和医科大学病理科 北京市 100730
项目负责人 曲娴 华北大学医学院生理教研室 吉林省吉林市 132001
Tel. 0086-432-2452575 Ext.2045
收稿日期 2001-01-06 接受日期 2001-02-11
主题词 受体,表皮生长因子-尿抑胃素/免疫学；抗体，单克隆/治疗应用；结肠肿瘤/药物治疗；结肠肿瘤/免疫学
, http://www.100md.com
曲娴, 陈杰, 刘彤华. 表皮生长因子受体单克隆抗体抗人结肠癌LST174的作用. 世界华人消化杂志，2001；9(7)：841
结肠癌在我国不断增多[1-11]，其晚期治疗仍极困难[12-16]. 我们探讨表皮生长因子受体单克隆抗体(EGFR mAb)抗人结肠癌作用的实验研究，为探索肿瘤治疗提供新途径.
1 材料和方法
LST174在体外用RPMI1640培养液、置50mL·L-1 CO2孵箱，37℃常规培养. ①细胞计数：于24孔板上每孔植入1.6×104个LST174对数生长期细胞，每组分为3个平行组，换成低血清培养基(5mL·L-1胎牛血清的RPMI1640)，实验组EGFR mAb选用3个不同的浓度(0.625，1.25，2.5mL·L-1)，隔日收集细胞计数. ②细胞生长曲线测定：在24孔板上，将各组细胞以1.5×104/孔接种，每组21个孔，设3个平行孔，每组每天分别计数3个平行孔，取平均值共7d. EGFR mAb组(1.25mL·L-1)与对照组对比，绘制成生长曲线. ③细胞增殖能力测定： 采用MTT法，以3×103/孔接种于96孔板，细胞贴壁后加入浓度为(1.25mL·L-1)的EGFR mAb，设对照组，连续培养3d，每组设20个平行孔，在550nm波长测各孔吸光度A值.
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2 结果
用不同剂量的EGFR mAb处理LST174结肠癌细胞系，均可见一定程度的增殖抑制，这种抑制作用随抗体浓度增高而增加，呈剂量依赖性. 抗-EGFR抗体组较对照组细胞数明显降低(P<0.01). 不同浓度之间比较： 当EGFR mAb为0.625mL·L-1时细胞计数最高，是对照组的61.3%；当EGFR mAb为2.5mL·L-1时细胞计数最低，是对照组的33.8%.EGFR单克隆抗体组细胞生长受到抑制，细胞生长曲线较对照组速度减慢. MTT值显示实验组较对照组细胞增殖能力低，抑制率为42.3%(P<0.01).
3 讨论
表皮生长因子受体具有酪氨酸蛋白激酶活性，其介导的信号途径在细胞生长与分化中有重要作用[17-19]. 研究表明EGFR在人类许多上皮源性恶性肿瘤组织中表达增强[20-26]，过度表达的EGFR不断将表皮生长因子的刺激导入细胞内，引起细胞持续分裂增殖，最终导致肿瘤发生. 我们在以往实验中已证实，LST174结肠癌细胞系有EGFR mRNA表达及生长因子自分泌环的存在[27]. 为此，针对EGFR进行结肠癌分子免疫治疗成为可能，EGFR mAb能特异性地识别EGFR，阻断其介导的信号传导，打断自分泌环路，从而抑制肿瘤生长[28，29]. 本结果显示EGFR mAb可抑制人结肠癌LST174细胞生长，具有一定的抗结肠癌作用.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 于皆平, 董卫国. 大肠癌早期诊断的现状. 世界华人消化杂志, 1999;7:553-554
2 范应方, 黄宗海. 结直肠癌基因治疗研究进展. 世界华人消化杂志，2001;9:427-430
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4 黄宗海, 余文林, 杨力, 宋惠娟, 杨继震. 逆转录病毒介导HSVtk基因转导体外抗结肠癌的作用. 世界华人消化杂志，2001;9:84-86
5 杨权烈, 黄国栋, 李亮. 晚期大肠癌的临床治疗观察. 华人消化杂志, 1998;6(特刊7):413
, 百拇医药
6 卢献平, 李宝金, 陈声乐, 吕斌, 蒋宁一. 化疗及导向化疗治疗大肠癌与癌细胞凋亡研究. 世界华人消化杂志, 1999;7:332-334
7 徐延豪, 宋今丹. 肿瘤相关抗原LEA在大肠癌前病变及早期肠癌诊断中应用的研究. 世界华人消化杂志, 1999;7:992
8 周志宏,沈志祥. 大肠癌肿瘤坏死因子的研究进展. 世界华人消化杂志，2000;8:700-701
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10 许健, 陈君坤, 刘福坤, 吴波, 黄伟, 曹建民, 李成郎. 大肠癌术前化疗疗效的病理组织学对照研究. 华人消化杂志, 1998;6:891-893
, http://www.100md.com
11 刘时才, 白馨, 韦荣干, 黄振录. 半乳糖氧化酶检测大肠癌和癌前病变T抗原. 华人消化杂志, 1998;6:990-991
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, http://www.100md.com
15 赵任, 郁宝铭, 张国弛, 郑民华, 李东华, 黄梁, 邹鸿志. 手术前后补硒对大肠癌患者的免疫功能及抗氧化功能的影响.
世界华人消化杂志，2000;8:1013-1016
16 谷化平, 倪灿荣, 詹熔洲. 大肠癌CD15, CD44v6和nm23H1的mRNA表达与转移及预后的相关性. 世界华人消化杂志，2000;8:887-891
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, http://www.100md.com
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, http://www.100md.com
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21 Ioachim E, Kamina S, Demou A, Kontostolis M, Lolis D, Agnantis NJ. Immunohistochemical localization of metallothionein in
human breast cancer in comparison with cathepsin D, stromelysin-1, CD44, extracellular matrix components, p53, Rb,C-erbB-2, EGFR, steroid receptor content and proliferation. Anticancer Res, 1999;19:2133-2139
22 Slesak B, Harlozinska A, Porebska I, Bojarowski T, Lapinska J, Rzeszutko M, Wojnar A. Expression of epidermal growth factor
, 百拇医药
receptor family proteins (EGFR, c-erbB-2 and c-erbB-3) in gastric cancer and chronic gastritis.
Anticancer Res, 1998;18:2727-2732
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and partially reverse the malignant phenotype of human breast cancer MDA-MB-231 cells. Cell Res,1998;8:63-71
, http://www.100md.com
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, http://www.100md.com
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and anti-EGFR antibody therapy for the treatment of residual head and neck cancer. Int J Cancer, 1998;77:13-18, 百拇医药(曲 娴1 陈 杰2 刘彤华2)