¹南京医科大学第一附属医院普外科 江苏省南京市 210029

    ²中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 上海市 200031

    本研究获南京医科大学创新基金资助，No：Cx9905

    项目负责人 沈历宗，210029，江苏省南京市广州路300号，南京医 科大学第一附属医院普外科.shenlz@163.com

    Telephone: 025-3718836-6863

    收稿日期 2001-07-19 接受日期 2001-08-01

    摘 要目的 建立人γ-干扰素(IFN-γ)基因修饰的结肠癌细胞株.

    方法 用逆转录病毒质粒pL(IFN-γ)SN将人IFN-γ基因转导入人结 肠癌细胞株Lovo中，用G418 进行筛选.

    结果 筛选得到抗性克隆Lovo/IFN-γ，能在0.6 g.L^-1G41 8中稳定生长；Lovo/IFN-γ生长曲线与野生型Lovo无异；RT-PCR证实IFN-γ基因在Lo vo/IFN-γ中表达；Lovo/IFN-γ能分泌人IFN-γ，细胞内水平为3.0fg.d^-1.

    结论 成功建立了人IFN-γ基因修饰的结肠癌细胞株，为进一步研究 奠定了基础.

    主题词 结肠肿瘤/病理学；肿瘤细胞，培养的；干扰素Ⅱ型/ 遗传学；基因表达调控

    沈历宗，吴文溪，丁强，许德华，郑仲承，刘新垣，华一兵.人γ-干扰 素基因修饰的结肠癌细胞株的建立.

    世界华人消化杂志，2001；9(11)：1310-1312

    0 引言γ-干扰素(IFN-γ)具有多方面的抗肿瘤效应，尤以激发或增强宿主抗肿瘤免疫应答最 为重要.利用基因工程技术将细胞因子基因修饰的肿瘤细胞作为肿瘤疫苗，已经逐渐肿瘤生 物治疗中的重要手段.我们用含人全长IFN-γ的逆转录病毒质粒pL(IFN-γ)SN将人IFN-γ 基因转导至人结肠癌细胞株Lovo细胞中，经新霉素(G418)筛选得到抗性克隆，并进行了鉴 定，为进一步研究奠定了基础.

    1 材料和方法

    1.1 材料 筛选用新霉素G418、抽提RNA用TRIzol及细胞培养用 小牛血清(NCS)均为Gibco公司产品.转染用LipofectAMINE购自Life Technologies公司. 人IFN-γ检测用试剂盒购自深圳晶美公司.逆转录RT试剂盒及PCR用pfu DNA聚合酶购自上海 Sangon公司.野生型人结肠癌细胞株Lovo由本室传代保存.含人全长INF-γ序列质粒pL(IFN -γ)SN由本室构建保存.人IFN-γ引物序列上游：5’-CTGCCAGGACCCATATGTACA-3’ ......