p16、cerbB-2蛋白在胃肿瘤中的表达及意义 蒋艳霞, 赵明彦,耿明, 曹永成,王兴友
蒋艳霞, 耿明, 曹永成,王兴友, 济南军区总医院病理科 山东省济南市 250031
赵明彦, 济阳县中医院 山东省济南市 251400
项目负责人 蒋艳霞，250031，山东省济南市,济南军区总医院病理科，济南市师范路25号.
收稿日期 2002-05-31 接受日期 2002-07-05
摘要
目的: 探讨p16、cerbB-2蛋白在胃肿瘤中的表达及发生中的作用.
, 百拇医药
方法: 应用免疫组化S-P法检测胃正常黏膜、腺瘤及腺癌中p16、cerbB-2蛋白的表达.
结果: p16蛋白在腺癌和腺瘤中表达明显低于正常黏膜(P<0.001, P<0.001)；腺瘤组与腺癌组之间无显著性差异(P>0.05); 低分化腺癌组、有淋巴结转移组p16蛋白表达明显低于高分化腺癌组、无淋巴结转移组(P<0.05,P<0.001)， 5a死亡组明显低于存活组(P<0.01). cerbB-2蛋白在腺癌、腺瘤中表达明显高于正常黏膜(P<0.001, P<0.001). 腺癌中p16蛋白低表达与CerbB-2蛋白高表达呈负相关性 (rs =-0.4984, P<0.001).
结论: p16、cerbB-2基因的缺失和蛋白的异常表达在胃腺癌的发生、发展中起着重要的作用，对判断其预后具有重要的价值.
, 百拇医药
蒋艳霞, 赵明彦, 耿明, 曹永成, 王兴友.p16、cerbB-2蛋白在胃肿瘤中的表达及意义.世界华人消化杂志 2002;10(9):1050-1051
0 引言p16是近几年发现的一种新的抑癌基因，其定位于人类染色体9P21位置，是细胞周期有效调控者，又是抑制肿瘤细胞生长的关键因子.此基因缺失与很多肿瘤的形成和发生有关，且在不同肿瘤组织中的表达各不相同[1].癌基因CerbB-2激活亦与多种肿瘤的发生有关.胃肿瘤的发生发展是一个复杂过程，并与多种癌基因和抑癌基因异常表达有关，我们采用免疫组化法检测p16、CerbB-2在胃肿瘤中的表达，以探讨二者与胃肿瘤发生、发展之间的关系及二者的可能协同作用.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 收集济南军区总医院病理科1994-1996年手术及胃镜活检的部分标本，胃腺癌均为进展期胃癌，共84例，其中高分化11例，中分化25例，低分化48例；有淋巴结转移者54例，无转移者30 例；腺瘤伴不典型增生37例，管状腺瘤26例，管状绒毛状腺瘤8例，绒毛状腺瘤3例；24例正常胃黏膜作为对照.术后随访72例，存活超过5a 19例，占26.39%.所有患者术前均未做化疗、放疗及免疫治疗.
1.2 方法 标本均用10%甲醛液固定，石蜡包埋，常规切片，分别做HE及免疫组化染色.免疫组化采用S-P法，兔抗人p16多克隆抗体，鼠抗人CerbB-2单克隆抗体(福州迈新公司提供)，用已知阳性标本和PBS分别做阳性、阴性对照.
1.3 结果判断 免疫组化阳性反应为棕黄色颗粒，p16阳性反应主要定位于细胞核；CerbB-2阳性反应主要定位于细胞膜和细胞质.显微镜检查25%以上细胞呈清晰棕黄色，判断为阳性.
, 百拇医药
统计学处理 采用 c2检验.
2 结果2.1 p16、CerbB-2蛋白的表达 p16、CerbB-2蛋白的阳性表达率在腺瘤中为40.54%，54.05%，腺癌中47.62%，65.48%，正常黏膜p16蛋白阳性率87.50%，CerbB-2均为阴性.p16在腺瘤、腺癌中阳性表达明显低于正常黏膜，具有显著性差异(P<0.001，P<0.001)；CerbB-2在腺瘤、腺癌中表达明显高于正常黏膜，具有显著性差异 (P<0.001，P<0.001).二者阳性表达与胃腺瘤和腺癌的关系见表1；与胃腺癌的分化程度、有无淋巴结转移及5a存活之间的关系见表2.
表1 胃腺瘤、腺癌及正常黏膜p16、CerbB-2阳性表达
, 百拇医药
aP < 0.001vs 正常组比较, bP <0.001 vs 正常组比较.
2.2 胃肿瘤中p16、CerbB-2表达的相关性 p16、CerbB-2蛋白在胃腺瘤中表达无明显相关性(rs=-0.0119,*P=0.79,)，而在胃腺癌中二者均阳性11例(11/84)，均阴性为10例(10/84) ；p16蛋白阴性，CerbB-2阳性者共34例(34/84)，p16蛋白阳性，CerbB-2阴性者共29例(29/84)；应用配对资料c2检验显示，二者具有明显的相关性，呈负相关(rs=-0.4984,bP=0.0000).表3
表2 p16、cerbB-2阳性表达与胃腺癌的关系
, 百拇医药
aP <0.05 vs高分化组比较,bP <0.001vs 高分化组比较dP <0.001 vs有转移组比较fP <0.001vs 存活组比较,gP <0.01 vs 存活组比较.
表3 胃腺瘤及腺癌中p16和cerbB-2表达之间的关系
, 百拇医药
rs =-0.0119,aP =0.79, rs =-0.4984,bP =0.0000
3 讨论细胞周期的调控依赖于一系列正向和负向周期蛋白的精密调节，使细胞处于增生和抑制的动态平衡之中.p16抑癌基因是细胞周期调控者，又是抑制肿瘤细胞生长的关键因子，p16基因蛋白与CD1竞争结合CDK4，抑制CDK4周期蛋白D复合物的催化活性，从而抑制细胞增生和恶性转化[2].p16基因一旦缺失和异常表达，其抑制细胞增生的功能降低，细胞会出现无限制生长，可能导致肿瘤的发生.本研究发现，p16蛋白在正常胃黏膜上皮中呈高表达，腺瘤伴有不典型增生时有明显下降，胃腺癌组织中有所回升，表明p16蛋白缺失主要发生于腺瘤伴重度不典型增生，可能是腺瘤-癌序列的晚期事件，即胃癌发生的早期事件[3].分析p16蛋白表达与84例胃腺癌的关系发现，腺癌阳性表达率明显低于正常黏膜，两者具有显著性差异(P<0.001)，尤以低分化腺癌组表达明显下降(20.83%)，与高分化组之间具有显著性差异(P<0.05)；有淋巴结转移组p16蛋白阳性表达率明显低于无淋巴结转移组，两者具有显著性差异(P<0.001)；p16蛋白与生存期间具有明显的相关性，随访72例术后者，5a存活组明显高于死亡组，两者具有显著性差异(P<0.01).p16蛋白异常表达与胃腺癌分化程度、淋巴结转移及5a存活率有关，对胃癌早期诊断及判断预后具有重要价值.
, 百拇医药
CerbB-2癌基因与表皮生长因子具有同源性，参与细胞生长、繁殖、分裂的调控及控制肿瘤的生长.Diez et al [4]研究表明，CerbB-2在腺癌中为过表达.本研究结果显示：CerbB-2在低分化腺癌中有较高的表达，与胃腺癌分化程度、淋巴结转移呈正相关，与生存时间呈负相关，预后差.提示CerbB-2基因参与了胃腺癌的浸润、转移机制，对胃腺癌的预后有一定意义.
Vegelstein[5]在肿瘤发生的多阶段性研究中证实，至少两个不同的肿瘤相关基因同时突变，才可导致细胞恶性转化，并认识到抑癌基因和癌基因在肿瘤中的协同作用,胃腺癌发生中多基因改变比单一基因的改变更有意义.本研究结果显示，胃腺癌中，p16蛋白阳性表达明显下降，CerbB-2蛋白阳性表达明显升高，二者呈负相关性，提示p16和CerbB-2在胃腺癌的发生、发展中沿着各自的方向起不同的作用，同时存在某种负向调节作用，二者参与胃肿瘤的发展过程，与胃腺癌的生物学行为有密切的关系，可以作为判断胃腺癌恶性程度、预后的重要指标，为临床的合理治疗提供理论依据.
, 百拇医药
4 参考文献1 曾益新主编.肿瘤学.第一版.北京：人民卫生出版社,1999:63-64
2 Dreyling MH,Bullinger L,Ott G,Stilgenbauer S,Muller-Hermelink HK,Bentz M,Hiddemann W,Dohner H. Alterations of the
cyclinD1/p16-pRb pathway in mantle cell lymphoma. Cancer Res 1997;57:4608-4612
3 吕有勇,高崇峰,崔建涛,孙梅,程金泉.胃癌中MTSI/P16基因缺失及表达异常研究.中华肿瘤杂志 1996;18:189-191
4 Diez M,Pollan M,Mhestro M,Torres A,Ortega D,Gomez A,Hernando F,Balibrea JL.Prediction of recurrence by quantification
of p185neu protein in non-small-cell lung cance tissue. Br J Cancer 1997;75:684-689
5 曾益新主编.肿瘤学.第一版.北京：人民卫生出版社，1999:30, http://www.100md.com(p16、cerbB-2蛋白在胃肿瘤中的表达及意义 蒋艳霞, 赵明彦,耿明, 曹永成,王兴友)
赵明彦, 济阳县中医院 山东省济南市 251400
项目负责人 蒋艳霞，250031，山东省济南市,济南军区总医院病理科，济南市师范路25号.
收稿日期 2002-05-31 接受日期 2002-07-05
摘要
目的: 探讨p16、cerbB-2蛋白在胃肿瘤中的表达及发生中的作用.
, 百拇医药
方法: 应用免疫组化S-P法检测胃正常黏膜、腺瘤及腺癌中p16、cerbB-2蛋白的表达.
结果: p16蛋白在腺癌和腺瘤中表达明显低于正常黏膜(P<0.001, P<0.001)；腺瘤组与腺癌组之间无显著性差异(P>0.05); 低分化腺癌组、有淋巴结转移组p16蛋白表达明显低于高分化腺癌组、无淋巴结转移组(P<0.05,P<0.001)， 5a死亡组明显低于存活组(P<0.01). cerbB-2蛋白在腺癌、腺瘤中表达明显高于正常黏膜(P<0.001, P<0.001). 腺癌中p16蛋白低表达与CerbB-2蛋白高表达呈负相关性 (rs =-0.4984, P<0.001).
结论: p16、cerbB-2基因的缺失和蛋白的异常表达在胃腺癌的发生、发展中起着重要的作用，对判断其预后具有重要的价值.
, 百拇医药
蒋艳霞, 赵明彦, 耿明, 曹永成, 王兴友.p16、cerbB-2蛋白在胃肿瘤中的表达及意义.世界华人消化杂志 2002;10(9):1050-1051
0 引言p16是近几年发现的一种新的抑癌基因，其定位于人类染色体9P21位置，是细胞周期有效调控者，又是抑制肿瘤细胞生长的关键因子.此基因缺失与很多肿瘤的形成和发生有关，且在不同肿瘤组织中的表达各不相同[1].癌基因CerbB-2激活亦与多种肿瘤的发生有关.胃肿瘤的发生发展是一个复杂过程，并与多种癌基因和抑癌基因异常表达有关，我们采用免疫组化法检测p16、CerbB-2在胃肿瘤中的表达，以探讨二者与胃肿瘤发生、发展之间的关系及二者的可能协同作用.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 收集济南军区总医院病理科1994-1996年手术及胃镜活检的部分标本，胃腺癌均为进展期胃癌，共84例，其中高分化11例，中分化25例，低分化48例；有淋巴结转移者54例，无转移者30 例；腺瘤伴不典型增生37例，管状腺瘤26例，管状绒毛状腺瘤8例，绒毛状腺瘤3例；24例正常胃黏膜作为对照.术后随访72例，存活超过5a 19例，占26.39%.所有患者术前均未做化疗、放疗及免疫治疗.
1.2 方法 标本均用10%甲醛液固定，石蜡包埋，常规切片，分别做HE及免疫组化染色.免疫组化采用S-P法，兔抗人p16多克隆抗体，鼠抗人CerbB-2单克隆抗体(福州迈新公司提供)，用已知阳性标本和PBS分别做阳性、阴性对照.
1.3 结果判断 免疫组化阳性反应为棕黄色颗粒，p16阳性反应主要定位于细胞核；CerbB-2阳性反应主要定位于细胞膜和细胞质.显微镜检查25%以上细胞呈清晰棕黄色，判断为阳性.
, 百拇医药
统计学处理 采用 c2检验.
2 结果2.1 p16、CerbB-2蛋白的表达 p16、CerbB-2蛋白的阳性表达率在腺瘤中为40.54%，54.05%，腺癌中47.62%，65.48%，正常黏膜p16蛋白阳性率87.50%，CerbB-2均为阴性.p16在腺瘤、腺癌中阳性表达明显低于正常黏膜，具有显著性差异(P<0.001，P<0.001)；CerbB-2在腺瘤、腺癌中表达明显高于正常黏膜，具有显著性差异 (P<0.001，P<0.001).二者阳性表达与胃腺瘤和腺癌的关系见表1；与胃腺癌的分化程度、有无淋巴结转移及5a存活之间的关系见表2.
表1 胃腺瘤、腺癌及正常黏膜p16、CerbB-2阳性表达
| 组别 | n | p16阳性(n) | p16阳性率(%) | cerbB-2阳性 (n) | cerbB-阳性率(%) |
| 正常胃黏膜组 | 24 | 21 | 87.50 | 0 | 0 |
| 腺瘤组 | 37 | 15 | 40.54a | 20 | 54.05b |
| 胃腺癌组 | 84 | 40 | 47.62a | 55 | 65.48b |
, 百拇医药
aP < 0.001vs 正常组比较, bP <0.001 vs 正常组比较.
2.2 胃肿瘤中p16、CerbB-2表达的相关性 p16、CerbB-2蛋白在胃腺瘤中表达无明显相关性(rs=-0.0119,*P=0.79,)，而在胃腺癌中二者均阳性11例(11/84)，均阴性为10例(10/84) ；p16蛋白阴性，CerbB-2阳性者共34例(34/84)，p16蛋白阳性，CerbB-2阴性者共29例(29/84)；应用配对资料c2检验显示，二者具有明显的相关性，呈负相关(rs=-0.4984,bP=0.0000).表3
表2 p16、cerbB-2阳性表达与胃腺癌的关系
| n | p16阳性(n) | p16阳性率(%) | cerbB-2阳性 (n) | cerbB-阳性率(%) | |
| 分化程度 | |||||
| 高分化组 | 11 | 8 | 72.72 | 3 | 27.27 |
| 中分化组 | 25 | 15 | 60.00 | 13 | 52.00 |
| 低分化组 | 48 | 10 | 20.83a | 39 | 81.25b |
| 淋巴结转移 | |||||
| 有转移组 | 54 | 18 | 33.33 | 40 | 74.07 |
| 无转移组 | 30 | 22 | 73.33d | 6 | 20.00d |
| 5a存活 | |||||
| 存活组 | 19 | 15 | 78.95 | 6 | 31.58 |
| 死亡组 | 53 | 19 | 35.85g | 46 | 86.79f |
, 百拇医药
aP <0.05 vs高分化组比较,bP <0.001vs 高分化组比较dP <0.001 vs有转移组比较fP <0.001vs 存活组比较,gP <0.01 vs 存活组比较.
表3 胃腺瘤及腺癌中p16和cerbB-2表达之间的关系
| p16 | 腺瘤cerbB-2 | n | 腺癌 cerbB-2 | n | ||
| + | - | + | - | |||
| + | 8a | 7 | 15 | 11b | 29 | 40 |
| - | 12 | 10 | 22 | 34 | 10 | 44 |
| 合计 | 20 | 17 | 37 | 45 | 39 | 84 |
, 百拇医药
rs =-0.0119,aP =0.79, rs =-0.4984,bP =0.0000
3 讨论细胞周期的调控依赖于一系列正向和负向周期蛋白的精密调节，使细胞处于增生和抑制的动态平衡之中.p16抑癌基因是细胞周期调控者，又是抑制肿瘤细胞生长的关键因子，p16基因蛋白与CD1竞争结合CDK4，抑制CDK4周期蛋白D复合物的催化活性，从而抑制细胞增生和恶性转化[2].p16基因一旦缺失和异常表达，其抑制细胞增生的功能降低，细胞会出现无限制生长，可能导致肿瘤的发生.本研究发现，p16蛋白在正常胃黏膜上皮中呈高表达，腺瘤伴有不典型增生时有明显下降，胃腺癌组织中有所回升，表明p16蛋白缺失主要发生于腺瘤伴重度不典型增生，可能是腺瘤-癌序列的晚期事件，即胃癌发生的早期事件[3].分析p16蛋白表达与84例胃腺癌的关系发现，腺癌阳性表达率明显低于正常黏膜，两者具有显著性差异(P<0.001)，尤以低分化腺癌组表达明显下降(20.83%)，与高分化组之间具有显著性差异(P<0.05)；有淋巴结转移组p16蛋白阳性表达率明显低于无淋巴结转移组，两者具有显著性差异(P<0.001)；p16蛋白与生存期间具有明显的相关性，随访72例术后者，5a存活组明显高于死亡组，两者具有显著性差异(P<0.01).p16蛋白异常表达与胃腺癌分化程度、淋巴结转移及5a存活率有关，对胃癌早期诊断及判断预后具有重要价值.
, 百拇医药
CerbB-2癌基因与表皮生长因子具有同源性，参与细胞生长、繁殖、分裂的调控及控制肿瘤的生长.Diez et al [4]研究表明，CerbB-2在腺癌中为过表达.本研究结果显示：CerbB-2在低分化腺癌中有较高的表达，与胃腺癌分化程度、淋巴结转移呈正相关，与生存时间呈负相关，预后差.提示CerbB-2基因参与了胃腺癌的浸润、转移机制，对胃腺癌的预后有一定意义.
Vegelstein[5]在肿瘤发生的多阶段性研究中证实，至少两个不同的肿瘤相关基因同时突变，才可导致细胞恶性转化，并认识到抑癌基因和癌基因在肿瘤中的协同作用,胃腺癌发生中多基因改变比单一基因的改变更有意义.本研究结果显示，胃腺癌中，p16蛋白阳性表达明显下降，CerbB-2蛋白阳性表达明显升高，二者呈负相关性，提示p16和CerbB-2在胃腺癌的发生、发展中沿着各自的方向起不同的作用，同时存在某种负向调节作用，二者参与胃肿瘤的发展过程，与胃腺癌的生物学行为有密切的关系，可以作为判断胃腺癌恶性程度、预后的重要指标，为临床的合理治疗提供理论依据.
, 百拇医药
4 参考文献1 曾益新主编.肿瘤学.第一版.北京：人民卫生出版社,1999:63-64
2 Dreyling MH,Bullinger L,Ott G,Stilgenbauer S,Muller-Hermelink HK,Bentz M,Hiddemann W,Dohner H. Alterations of the
cyclinD1/p16-pRb pathway in mantle cell lymphoma. Cancer Res 1997;57:4608-4612
3 吕有勇,高崇峰,崔建涛,孙梅,程金泉.胃癌中MTSI/P16基因缺失及表达异常研究.中华肿瘤杂志 1996;18:189-191
4 Diez M,Pollan M,Mhestro M,Torres A,Ortega D,Gomez A,Hernando F,Balibrea JL.Prediction of recurrence by quantification
of p185neu protein in non-small-cell lung cance tissue. Br J Cancer 1997;75:684-689
5 曾益新主编.肿瘤学.第一版.北京：人民卫生出版社，1999:30, http://www.100md.com(p16、cerbB-2蛋白在胃肿瘤中的表达及意义 蒋艳霞, 赵明彦,耿明, 曹永成,王兴友)
