陈天艳,成军,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,全军病毒性肝炎研究重点实验室 北京市 100039

    张树林,西安交通大学第一医院传染科 陕西省西安市 710061

    项目负责人:成军,100039,北京市,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心. cj@genetherapy.com.cn

    电话:010-66933391 传真:010-63801283

    收稿日期:2002-10-29 接受日期:2002-11-18

    陈天艳,成军,张树林. 酵母双杂交系统的原理及应用. 世界华人消化杂志 2003;11(4):451-455

    0 引言蛋白质和蛋白质的相互作用是很多生命现象的基础. 随着分子生物学技术的发展,特别是人类基因组计划的完成，使人类对基因的结构和功能的认识不断加深,但基因编码的蛋白质的功能研究尚是一个难题. 酵母双杂交 (yeast two hybrid) 技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用，该方法建立以来，经过不断的完善和发展，不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用，更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.

    1 酵母双杂交技术的基本思想酵母双杂交由Fields et al ^[1]在1989年提出. 他的产生是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究. GAL4包括两个彼此分离的但功能必需的结构域. 位于N端1-174位氨基酸残基区段的DNA结合域(DNA binding domain，DNA-BD)和位于C端768-881 位氨基酸残基区段的转录激活域(Activation domain,AD). DNA-BD能够识别位于GAL4效应基因(GAL4-responsive gene)的上游激活序列(Upstream activating sequence,UAS),并与之结合. 而AD则是通过与转录机构(transcription machinery)中的其他成分之间的结合作用，以启动UAS下游的基因进行转录. DNA-BD和AD单独分别作用并不能激活转录反应，但是当二者在空间上充分接近时，则呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子,使启动子下游基因得到转录.

    Fields et al建立了一个双杂交系统，DB与X蛋白融合，AD与Y蛋白融合，如果X、Y之间形成蛋白-蛋白复合物 ......