灵芝抗肿瘤和免疫调节作用研究进展(上)
日前，由中国保健品协会、中国药理学会、沈阳药科大学、辽宁万象投资有限公司联合主办的“灵芝及其相关问题国际研讨会”在辽宁召开。来自中国、美国、韩国、日本等国灵芝研发方面的知名专家进行了学术交流。为此，本版专门开设“灵芝国际问题研讨会系列报道”栏目，介绍专家们在灵芝栽培、质量控制、药理作用、生物活性等多方面的研究成果，以飨读者。}l, http://www.100md.com
——编者按}l, http://www.100md.com
北京大学教授、中国药理学会理事长、国际灵芝研究学会主席林志彬在会上介绍了关于灵芝的抗肿瘤作用和免疫调节作用研究进展。}l, http://www.100md.com
灵芝的抗肿瘤作用}l, http://www.100md.com
◆体内抗肿瘤作用}l, http://www.100md.com
灵芝对动物移植性肿瘤具有抑制作用，可使瘤重减轻，生存时间延长，灵芝所含多糖是其抗肿瘤作用的主要有效成分。林志彬教授领导的科研小组观察了灵芝在体内的抗肿瘤作用。结果发现，从灵芝子实体中提取的灵芝多糖肽(GPP)不但可抑制小鼠S-180肉瘤生长，还可显著抑制小鼠Lewis肺癌生长，50毫克/千克时，抑制率为55.5%。给Balb/c小鼠皮下接种S-180肉瘤后，灌胃一定剂量的灵芝提取物(GLE)或灵芝多糖B(GL-B)，均可抑制小鼠S-180肉瘤生长。GL-B还可增强抗肿瘤药环磷酰胺的抗肿瘤作用。研究者还发现，灵芝菌丝体多糖可显著抑制Balb/c小鼠和昆明种小鼠皮下移植的S-180肉瘤生长。}l, http://www.100md.com
林志彬教授还在分子水平研究了GL-B对细胞因子mRNA表达的影响，结果发现，GL-B可显著促进小鼠腹腔巨噬细胞TNFαmRNA和脾细胞IFNγmRNA的表达水平。同样，给小鼠灌胃GLE5、10、20g(生药)/千克，共10日，亦可显著增加小鼠腹腔巨噬细胞TNFαmRNA表达和脾细胞IFNγmRNA表达。}l, http://www.100md.com
◆体外抗肿瘤作用}l, http://www.100md.com
在研究灵芝提取物及其所含多糖在体外对肿瘤细胞是否有直接抑制作用时，研究人员发现，GLE对S-180细胞的增殖无直接抑制作用。同样，GL-B或灵芝菌丝体多糖对HL-60细胞的生长也无直接抑制作用。在采用琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞仪检测法观察灵芝对体外培养的肿瘤细胞凋亡的影响时发现，GLE不能直接诱导S-180细胞凋亡，而GL-B和灵芝菌丝体多糖也不能诱导HL-60细胞凋亡。
研究人员又采用血清药理学实验方法进行了研究。结果发现，将含GLE的小鼠血清加至体外培养的S-180细胞中，可明显抑制S-180细胞生长，并可诱导S-180细胞凋亡。含GL-B血清可显著抑制HL-60细胞增殖，并明显地诱导HL-60细胞凋亡。采用生物法和ELISA法，检测含GLE或GL-B血清中TNFα和IFNγ的含量时发现，灌胃小鼠血清中TNFα活性和IFNγ的含量随GLE或GL-B剂量增加而增强，并呈现明显的剂量依赖关系。因此，含GLE或GL-B血清在体外抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡的作用，至少与其中所含TNFα和IFNγ有关，后二者是在GLE或GL-B作用下，在体内生成的。而IFNγ还可与TNFα协同作用，使后者诱导肿瘤细胞凋亡的作用增强。r7, http://www.100md.com
◆抗肿瘤作用机制r7, http://www.100md.com
最近，研究人员建立了经P815肿瘤细胞裂解物冲击致敏小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)诱导产生的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)模型，并在冲击致敏阶段与不同浓度的灵芝多糖(GL-PS)共同培养。研究结果表明，当DC经P815肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏后，其诱导产生的特异性细胞毒T细胞(CTL)对P815肿瘤细胞具有杀伤作用，GL-PS可增强此作用，表现为释放入培养上清液中的LDH活性显著增强。进一步研究发现，同上浓度的GL-PS可明显增加DC诱导CTL的IFNγmRNA表达，并使培养上清液中IFNγ蛋白含量增加。相同浓度的GL-PS可明显增加DC诱导的CTL的颗粒酶BmRNA及蛋白表达。研究人员认为。灵芝多糖在DC成熟阶段，可增强DC对肿瘤抗原的捕获、处理、提高能力，增强DC诱导的特异性CTL的细胞毒活性。且灵芝多糖可促进活化CTL的IFNγmRNA转录及蛋白表达，使IFNγ生成增加，后者通过其直接和间接作用发挥抑瘤作用。颗粒酶为淋巴细胞丝氨酸蛋白酶类，通常以非活化的酶原形式贮存于CTL和NK细胞胞质内的细胞毒颗粒中，并于脱颗粒时释出，以促进CTL及NK细胞介导的细胞凋亡。颗粒酶家族中，以颗粒酶B功能最强。灵芝多糖促进CTL的颗粒酶BmRNA和蛋白质表达，与其增强CTL的细胞毒活性有关。r7, http://www.100md.com
林志彬教授指出，灵芝及其所含多糖在体内对小鼠移植性肿瘤有抗肿瘤作用，但对体外培养的肿瘤细胞无直接抑制作用，加之灵芝能显著增强机体免疫功能，如增强小鼠迟发型过敏反应、促进淋巴细胞增殖反应、增强细胞毒T细胞功能、增强巨噬细胞吞噬功能、增强NK细胞的细胞毒活性以及促进细胞因子如IL-1、IL-2、IL-6、IL-12的生成等，故推测灵芝的抗肿瘤作用是由机体的免疫系统介导的。r7, http://www.100md.com
(上)(赵莹 )
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北京大学教授、中国药理学会理事长、国际灵芝研究学会主席林志彬在会上介绍了关于灵芝的抗肿瘤作用和免疫调节作用研究进展。}l, http://www.100md.com
灵芝的抗肿瘤作用}l, http://www.100md.com
◆体内抗肿瘤作用}l, http://www.100md.com
灵芝对动物移植性肿瘤具有抑制作用，可使瘤重减轻，生存时间延长，灵芝所含多糖是其抗肿瘤作用的主要有效成分。林志彬教授领导的科研小组观察了灵芝在体内的抗肿瘤作用。结果发现，从灵芝子实体中提取的灵芝多糖肽(GPP)不但可抑制小鼠S-180肉瘤生长，还可显著抑制小鼠Lewis肺癌生长，50毫克/千克时，抑制率为55.5%。给Balb/c小鼠皮下接种S-180肉瘤后，灌胃一定剂量的灵芝提取物(GLE)或灵芝多糖B(GL-B)，均可抑制小鼠S-180肉瘤生长。GL-B还可增强抗肿瘤药环磷酰胺的抗肿瘤作用。研究者还发现，灵芝菌丝体多糖可显著抑制Balb/c小鼠和昆明种小鼠皮下移植的S-180肉瘤生长。}l, http://www.100md.com
林志彬教授还在分子水平研究了GL-B对细胞因子mRNA表达的影响，结果发现，GL-B可显著促进小鼠腹腔巨噬细胞TNFαmRNA和脾细胞IFNγmRNA的表达水平。同样，给小鼠灌胃GLE5、10、20g(生药)/千克，共10日，亦可显著增加小鼠腹腔巨噬细胞TNFαmRNA表达和脾细胞IFNγmRNA表达。}l, http://www.100md.com
◆体外抗肿瘤作用}l, http://www.100md.com
在研究灵芝提取物及其所含多糖在体外对肿瘤细胞是否有直接抑制作用时，研究人员发现，GLE对S-180细胞的增殖无直接抑制作用。同样，GL-B或灵芝菌丝体多糖对HL-60细胞的生长也无直接抑制作用。在采用琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞仪检测法观察灵芝对体外培养的肿瘤细胞凋亡的影响时发现，GLE不能直接诱导S-180细胞凋亡，而GL-B和灵芝菌丝体多糖也不能诱导HL-60细胞凋亡。
研究人员又采用血清药理学实验方法进行了研究。结果发现，将含GLE的小鼠血清加至体外培养的S-180细胞中，可明显抑制S-180细胞生长，并可诱导S-180细胞凋亡。含GL-B血清可显著抑制HL-60细胞增殖，并明显地诱导HL-60细胞凋亡。采用生物法和ELISA法，检测含GLE或GL-B血清中TNFα和IFNγ的含量时发现，灌胃小鼠血清中TNFα活性和IFNγ的含量随GLE或GL-B剂量增加而增强，并呈现明显的剂量依赖关系。因此，含GLE或GL-B血清在体外抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡的作用，至少与其中所含TNFα和IFNγ有关，后二者是在GLE或GL-B作用下，在体内生成的。而IFNγ还可与TNFα协同作用，使后者诱导肿瘤细胞凋亡的作用增强。r7, http://www.100md.com
◆抗肿瘤作用机制r7, http://www.100md.com
最近，研究人员建立了经P815肿瘤细胞裂解物冲击致敏小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)诱导产生的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)模型，并在冲击致敏阶段与不同浓度的灵芝多糖(GL-PS)共同培养。研究结果表明，当DC经P815肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏后，其诱导产生的特异性细胞毒T细胞(CTL)对P815肿瘤细胞具有杀伤作用，GL-PS可增强此作用，表现为释放入培养上清液中的LDH活性显著增强。进一步研究发现，同上浓度的GL-PS可明显增加DC诱导CTL的IFNγmRNA表达，并使培养上清液中IFNγ蛋白含量增加。相同浓度的GL-PS可明显增加DC诱导的CTL的颗粒酶BmRNA及蛋白表达。研究人员认为。灵芝多糖在DC成熟阶段，可增强DC对肿瘤抗原的捕获、处理、提高能力，增强DC诱导的特异性CTL的细胞毒活性。且灵芝多糖可促进活化CTL的IFNγmRNA转录及蛋白表达，使IFNγ生成增加，后者通过其直接和间接作用发挥抑瘤作用。颗粒酶为淋巴细胞丝氨酸蛋白酶类，通常以非活化的酶原形式贮存于CTL和NK细胞胞质内的细胞毒颗粒中，并于脱颗粒时释出，以促进CTL及NK细胞介导的细胞凋亡。颗粒酶家族中，以颗粒酶B功能最强。灵芝多糖促进CTL的颗粒酶BmRNA和蛋白质表达，与其增强CTL的细胞毒活性有关。r7, http://www.100md.com
林志彬教授指出，灵芝及其所含多糖在体内对小鼠移植性肿瘤有抗肿瘤作用，但对体外培养的肿瘤细胞无直接抑制作用，加之灵芝能显著增强机体免疫功能，如增强小鼠迟发型过敏反应、促进淋巴细胞增殖反应、增强细胞毒T细胞功能、增强巨噬细胞吞噬功能、增强NK细胞的细胞毒活性以及促进细胞因子如IL-1、IL-2、IL-6、IL-12的生成等，故推测灵芝的抗肿瘤作用是由机体的免疫系统介导的。r7, http://www.100md.com
(上)(赵莹 )