马兜铃酸检测方法概述
目前申请注册的含马兜铃酸中药研究资料中，马兜铃酸的检测方法不一，相同方法的参数也各不相同。从提供的申报资料来看，同一种药材及制剂采用不同的含量测定方法或同一方法选择不同的参数进行检查，所得到的结果有很大差别，例如对同一种药材进行检查时，有的方法检出了马兜铃酸，而有的方法却未能检出，所以马兜铃酸含量测定方法的选择显得尤为重要。l(xn, 百拇医药
药品注册申报资料中马兜铃酸的检测方法目前主要有以下两种：(1)HPLC法。该方法灵敏度较高，准确、快速，是应用最多的方法。色谱柱大多为ODS，C-18柱；填料粒度为5μm或10μm不等；柱直径均为4.6mm；长度有150mm和250mm两种；柱温一般采用室温。检测器大都选择紫外检测器，检测波长有250nm和317nm两个波长，从提供的样品色谱图来看，250nm波长下给出的色谱峰信息要比317nm多，故建议选择250nm作为检测波长。流动相大多是甲醇-酸水溶液和乙腈-酸水溶液，酸的加入可提高马兜铃酸类成分的分离度，但酸的浓度过高又容易损坏色谱柱。常见的流动相有甲醇-1%醋酸(70：30)、甲醇-3.3%醋酸(61：39)、甲醇-水-醋酸(63：36：1)、0.05mol/L磷酸二氢钠(含磷酸1ml/L)-乙腈(62：38)等，流速大都选择1ml/min，对照品为马兜铃酸Ⅰ。供试品制备多采用甲醇或乙醇为溶剂，采用索氏提取、超声提取等方法，从提供的资料看，甲醇索氏提取比较完全。目前几个不同品种中l(xn, 百拇医药
HPLC法测定马兜铃酸的检测限度为2.48×10-4μg(信躁比2：1)、2.5×10-3μg(信躁比4：1)、8.25×10-4μg(信躁比3：1)，有的资料未提供最低检测限度。在对马兜铃酸的含量测定方法进行考察时，最低检测限是一个重要的指标。(2)TLC法。有定性和定量两种，其中薄层定性检测方法的操作相对简便，样品与对照品共薄层展开并显色后，对样品与对照品的斑点进行比较即可。薄层定量方法是采用双波长薄层扫描法测定马兜铃酸的含量，此方法早期应用较多。TLC方法的检出限较高，有的可达2.5μg，灵敏度和仪器误差也较大。除上述两种方法外，文献报道的还有LC-MS法和极谱法。其中LC-MS法是目前马兜铃酸含测最灵敏的方法，最低检测限可以达到0.25ng，但由于仪器价格昂贵，短时间内难以推广。极谱法专属性相对较差，应用的最少。l(xn, 百拇医药
从上述方法的简单比较可见，HPLC法是目前比较好的检测方法。但在实际应用时建议申报单位关注以下问题：(1)检测限是HPLC法方法学考察的重要内容，应尽量降低检测限。一般以信躁比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限，如果检测限过高，则应对检测方法或条件进行调整。(2)药材中所含成分较多，不同植物种所含成分也各不相同，相关中成药中的成分则更复杂，因此进行方法学研究时，应关注方法的专属性。(3)含测用样品的制备也会对测定结果产生很大影响，当供试样品的浓度较低时，会影响马兜铃酸的检出，建议尽量提高供试样品的浓度。(4)马兜铃酸类成分有多种，目前申报的资料中只是对马兜逅幄窠辛撕坎舛ǎ睦瓯ǖノ挥刑跫倍云渌穆矶盗逅崂喑?br>分或对总酸类成分进行研究。l(xn, 百拇医药
综上所述，建议申报单位采用HPLC法进行马兜铃酸的含量测定或限量检查，并进行系统的方法学研究，重点关注方法的最低检出限等内容，以客观、真实地反映药材及制剂中马兜铃酸的含量状况，为安全性评价提供参考。l(xn, 百拇医药
国家食品药品监督管理局药品审评中心审评一部 陆金才(陆金才 )
药品注册申报资料中马兜铃酸的检测方法目前主要有以下两种：(1)HPLC法。该方法灵敏度较高，准确、快速，是应用最多的方法。色谱柱大多为ODS，C-18柱；填料粒度为5μm或10μm不等；柱直径均为4.6mm；长度有150mm和250mm两种；柱温一般采用室温。检测器大都选择紫外检测器，检测波长有250nm和317nm两个波长，从提供的样品色谱图来看，250nm波长下给出的色谱峰信息要比317nm多，故建议选择250nm作为检测波长。流动相大多是甲醇-酸水溶液和乙腈-酸水溶液，酸的加入可提高马兜铃酸类成分的分离度，但酸的浓度过高又容易损坏色谱柱。常见的流动相有甲醇-1%醋酸(70：30)、甲醇-3.3%醋酸(61：39)、甲醇-水-醋酸(63：36：1)、0.05mol/L磷酸二氢钠(含磷酸1ml/L)-乙腈(62：38)等，流速大都选择1ml/min，对照品为马兜铃酸Ⅰ。供试品制备多采用甲醇或乙醇为溶剂，采用索氏提取、超声提取等方法，从提供的资料看，甲醇索氏提取比较完全。目前几个不同品种中l(xn, 百拇医药
HPLC法测定马兜铃酸的检测限度为2.48×10-4μg(信躁比2：1)、2.5×10-3μg(信躁比4：1)、8.25×10-4μg(信躁比3：1)，有的资料未提供最低检测限度。在对马兜铃酸的含量测定方法进行考察时，最低检测限是一个重要的指标。(2)TLC法。有定性和定量两种，其中薄层定性检测方法的操作相对简便，样品与对照品共薄层展开并显色后，对样品与对照品的斑点进行比较即可。薄层定量方法是采用双波长薄层扫描法测定马兜铃酸的含量，此方法早期应用较多。TLC方法的检出限较高，有的可达2.5μg，灵敏度和仪器误差也较大。除上述两种方法外，文献报道的还有LC-MS法和极谱法。其中LC-MS法是目前马兜铃酸含测最灵敏的方法，最低检测限可以达到0.25ng，但由于仪器价格昂贵，短时间内难以推广。极谱法专属性相对较差，应用的最少。l(xn, 百拇医药
从上述方法的简单比较可见，HPLC法是目前比较好的检测方法。但在实际应用时建议申报单位关注以下问题：(1)检测限是HPLC法方法学考察的重要内容，应尽量降低检测限。一般以信躁比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限，如果检测限过高，则应对检测方法或条件进行调整。(2)药材中所含成分较多，不同植物种所含成分也各不相同，相关中成药中的成分则更复杂，因此进行方法学研究时，应关注方法的专属性。(3)含测用样品的制备也会对测定结果产生很大影响，当供试样品的浓度较低时，会影响马兜铃酸的检出，建议尽量提高供试样品的浓度。(4)马兜铃酸类成分有多种，目前申报的资料中只是对马兜逅幄窠辛撕坎舛ǎ睦瓯ǖノ挥刑跫倍云渌穆矶盗逅崂喑?br>分或对总酸类成分进行研究。l(xn, 百拇医药
综上所述，建议申报单位采用HPLC法进行马兜铃酸的含量测定或限量检查，并进行系统的方法学研究，重点关注方法的最低检出限等内容，以客观、真实地反映药材及制剂中马兜铃酸的含量状况，为安全性评价提供参考。l(xn, 百拇医药
国家食品药品监督管理局药品审评中心审评一部 陆金才(陆金才 )