国人P53基因CD72 Arg/Pro多态性与贲门腺癌发病相关
李湘洲,潍坊医学院附属潍坊市人民医院病理科 山东潍坊市 261041
管立学,王敬先, 王瑞丽,杜欣莹, 李海波,潍坊医学院附属潍坊市人民医院医学遗传科 山东潍坊市 261041
胡德宏,潍坊医学院附属潍坊市人民医院胸外科 山东潍坊市 261041
高丽,潍坊医学院附属潍坊市人民医院肿瘤内科 山东潍坊市 261041
项目负责人:李湘洲,261041, 山东省潍坊市,潍坊医学院附属潍坊市人民医院病理科.
, http://www.100md.com
电话:0536-8192314
收稿日期:2004-04-22 接受日期:2004-05-13
摘要
目的:探讨P53基因CD72Arg/Pro多态性与潍坊地区汉族人贲门腺癌发病的关系.
方法:应用PCR-RFLP法对67例贲门腺癌患者和138名正常对照组人群P53基因CD72Arg/Pro多态性进行检测.
结果:病例组P53基因Pro等位基因频率(0.672)和Pro/Pro基因型频率(47.8%)都显著高于正常对照组(0.413和13.0%，x2=24.1，P<0.01和x2=29.48，P<0.01); 携带Pro/Pro基因型者患贲门腺癌的风险比携带Arg/Arg基因型者显著升高，P为8.30，95%CI:3.49-19.77(x2=22.49，P<0.01).
, 百拇医药
结论:P53基因Pro/Pro基因型是贲门腺癌的遗传易患因素.
李湘洲,管立学, 高丽,胡德宏, 王敬先,王瑞丽, 杜欣莹,李海波. 国人P53基因CD72Arg/Pro多态性与贲门腺癌发病相关.世界华人消化杂志 2004;12(8):1955-1957
0 引言P53基因作为抑癌基因在恶性肿瘤中的研究最为广泛，但对P53基因多态性的研究处于初步阶段.近年来研究表明，P53基因第72位密码子具有CGT/CCT单核苷酸多态性，使编码的精氨酸(Arg)被脯氨酸(Pro)取代，两种基因编码的P53蛋白均为野生型，但这两种蛋白的转录激活作用、抑制转化细胞生长、诱导细胞凋亡以及对细胞损伤的修复功能有所不同[1-2]. Shepherd et al[3]报道，P53基因CD72Arg/Pro多态性增加胃癌发病的危险，且具有明显的种族差异.我们应用PCR-RFLP法对67例贲门腺癌患者和138名正常对照组人群P53基因CD72多态性进行了检测，旨在探讨P53基因CD72Arg/Pro多态性与潍坊地区汉族人贲门腺癌的易患性.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 2000-12/2003-10我院手术治疗贲门腺癌67例:男56例，女11例，平均年龄58.2±10.8岁;所有病例均经组织病理学确诊.正常对照组138名来自我院健康查体的正常个体，男110名，女28名，平均年龄59.0±11.1岁，并除外各种肿瘤.用于基因分析的DNA:均来源于手术切除的贲门癌旁正常组织或外周血淋巴细胞.
1.2 方法 组织匀浆或外周血白细胞经SDS和蛋白酶K消化，酚/氯仿法提取基因组DNA.P53基因引物序列参照文献[4]设计，由Sangon公司合成.P1: 5’-TTGCCGTCCCAAGCAATGGATGA-3’; P2:5’-TCTGGGAAGGGACAGAAGATGAC-3’. PCR反应体系为25ul，其中包括基因组DNA100 ng，TaqDNA聚合酶(Sangon公司)1U.PTC-100型扩增仪进行扩增.循环参数: 94°C预变性2min，然后94 °C 30 s，60°C 30 s，72°C 30 s共35个循环，最后72°C延伸5min. 限制性内切酶消化及基因型分析:酶切反应体系20ul，其中包括PCR产物5ul，内切酶BstUI 4.0 U (New England Biolabs公司)，混匀后置37°C水浴，消化过夜.120 g/L的中性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳，银染显色分析基因型.
, 百拇医药
统计学处理 基因型频率和等位基因频率比较用x2检验，相对风险度以参与风险的比数比(oddsratio，OR) 表示，95%可信区间(95%CI)计算采用Miettinen法.
2 结果P53基因PCR产物为199bp的片段，经BstU1酶切后产生3种基因型，分别为:Pro/Pro基因型，因突变使酶切位点丢失而只有199bp的扩增片段;Arg/Arg基因型，存在酶切点，产生113bp，86 bp 2条带;Arg/Pro为杂合基因型，同时具有199bp，113 bp和86bp 3条带(图1).两组人群基因型分布符合Hardy-weinberg平衡(正常对照组x2=3.44，P>0.05; 病例组x2=0.97，P>0.05). 病例组P53基因Pro等位基因频率(0.672)和Pro/Pro基因型频率(47.8%)都显著高于正常对照组(0.413和13.0%)(x2=24.1，P<0.01和x2=29.48，P<0.01); 而Pro/Arg基因型频率和Arg/Arg基因型频率低于对照组(x2=5.66，P<0.05; x2=6.98，P<0.01). 携带Pro/Pro基因型者易患贲门腺癌的风险比携带Arg/Arg基因型者显著升高，P为8.30，95%CI:3.49-19.77(x2=22.49，P<0.01); Arg/Pro基因型与贲门腺癌的易患性无关(表1).
, 百拇医药
图1(PDF)P53基因酶切片段12%PAGE电泳结果. 1, 3: Pro/Pro型;2, 7: Arg/Arg型;4, 5, 6: Arg/Pro型;8: PUC19 DNA/Msp I marker.
表1 P53基因型及等位基因频率与贲门腺癌风险的关系
, 百拇医药
3 讨论P53基因是调控细胞周期和保护细胞染色体免受损伤的基因，有3个多态位点与肿瘤有关[5]:(1)位于第4外显子中的CD72Arg/Pro多态;(2)第3内含子区16bp (5’-gacctggagggctggg-3’)的插入/缺失多态;(3)第6内含子的MSPI限制性酶切位点多态.近年来研究发现P53基因CD72Arg/Pro多态与食管鳞癌及人乳头瘤病毒(HPV)感染相关肿瘤的易感性有关联[6-7].Shepherd et al [3]对217例胃癌P53基因外显子4的测序结果表明，突变率为3.2%，发现2个多态性位点，CD36多态较罕见(仅在2例患者中发现)，相反CD72多态频率较高，而且具有种族差异，Arg/Arg基因型频率白种人为64%，而黑种人为24%;认为Arg/Arg基因型白种人易患贲门癌，携带Pro等位基因的黑种人易患胃窦癌，基因型与地理位置、性别和肿瘤组织学类型无统计学差异(P=0.067). 本结果表明，潍坊地区汉族正常人群P53基因CD72Arg/Pro多态以Arg/Pro基因型频率最高，与其他种族人群有明显差异，携带Pro/Pro基因型个体比携带Arg/Arg基因型者患贲门腺癌的风险增加8倍，95%CI:3.49-19.77(P <0.01). 提示Pro/Pro基因型是贲门腺癌的遗传易感因素.
, 百拇医药
4 参考文献1 Dumont P, Leu JI, Della Pietra AC 3rd, George DL, Murphy M. Thecodon 72 polymorphic variants of p53 have markedly
different apoptotic potential. Nat Genet 2003;33:357-365
2 Schneider-Stock R, Mawrin C, Motsch C, Boltze C, Peters B, HartigR, Buhtz P, Giers A, Rohrbeck A, Freigang B,Roessner A. Retention of the arginineallele in codon 72 of the p53 gene correlates with poor apoptosis in headand neck
, 百拇医药
cancer. Am J Pathol 2004;164:1233-1244
3 Shepherd T, Tolbert D, Benedetti J, Macdonald J, Stemmermann G,Wiest J, DeVoe G, Miller MA, Wang J, Noffsinger A,Fenoglio-Preiser C. Alterations in exon 4of the p53 gene in gastric carinoma. Gastroenterology 2000;118:1039-1044
4 张蕾,邢德印, 何祖根,林东昕. p53 基因第72位密码子多态与食管癌风险.中华医学遗传学杂志 2002;19:10-13
5 Wang-Gohrke S, Becher H, Kreienberg R, Runnebaum IB, Chang-ClaudeJ. Intron 3 16bp duplication polymorphism of
, 百拇医药
p53 is associated with an increased riskfor breast cancer by the age of 50 years. Pharmacogenetics 2002;12:269-272
6 Vos M, Adams CH, Victor TC, van Helden PD. Polymorphisms andmutations found in regions flanking exons 5 to 8 of
the TP53 gene in a population at high riskfor esophageal cancer in South Africa. Cancer Genet Cytogenet
2003;140:23-30
7 Saranath D, Khan Z, Tandle AT, Dedhia P, Sharma B, Contractor R,Shrivastava S, Dinshaw K. HPV16/18 prevalence in
cervical lesions/cancers and p53 genotypesin cervical cancer patients from India. Gynecol Oncol 2002;86:157-162, http://www.100md.com( 李湘洲, 管立学, 高 丽, 胡德宏, 王敬先, 王瑞丽, 杜欣莹, 李海波)
管立学,王敬先, 王瑞丽,杜欣莹, 李海波,潍坊医学院附属潍坊市人民医院医学遗传科 山东潍坊市 261041
胡德宏,潍坊医学院附属潍坊市人民医院胸外科 山东潍坊市 261041
高丽,潍坊医学院附属潍坊市人民医院肿瘤内科 山东潍坊市 261041
项目负责人:李湘洲,261041, 山东省潍坊市,潍坊医学院附属潍坊市人民医院病理科.
, http://www.100md.com
电话:0536-8192314
收稿日期:2004-04-22 接受日期:2004-05-13
摘要
目的:探讨P53基因CD72Arg/Pro多态性与潍坊地区汉族人贲门腺癌发病的关系.
方法:应用PCR-RFLP法对67例贲门腺癌患者和138名正常对照组人群P53基因CD72Arg/Pro多态性进行检测.
结果:病例组P53基因Pro等位基因频率(0.672)和Pro/Pro基因型频率(47.8%)都显著高于正常对照组(0.413和13.0%，x2=24.1，P<0.01和x2=29.48，P<0.01); 携带Pro/Pro基因型者患贲门腺癌的风险比携带Arg/Arg基因型者显著升高，P为8.30，95%CI:3.49-19.77(x2=22.49，P<0.01).
, 百拇医药
结论:P53基因Pro/Pro基因型是贲门腺癌的遗传易患因素.
李湘洲,管立学, 高丽,胡德宏, 王敬先,王瑞丽, 杜欣莹,李海波. 国人P53基因CD72Arg/Pro多态性与贲门腺癌发病相关.世界华人消化杂志 2004;12(8):1955-1957
0 引言P53基因作为抑癌基因在恶性肿瘤中的研究最为广泛，但对P53基因多态性的研究处于初步阶段.近年来研究表明，P53基因第72位密码子具有CGT/CCT单核苷酸多态性，使编码的精氨酸(Arg)被脯氨酸(Pro)取代，两种基因编码的P53蛋白均为野生型，但这两种蛋白的转录激活作用、抑制转化细胞生长、诱导细胞凋亡以及对细胞损伤的修复功能有所不同[1-2]. Shepherd et al[3]报道，P53基因CD72Arg/Pro多态性增加胃癌发病的危险，且具有明显的种族差异.我们应用PCR-RFLP法对67例贲门腺癌患者和138名正常对照组人群P53基因CD72多态性进行了检测，旨在探讨P53基因CD72Arg/Pro多态性与潍坊地区汉族人贲门腺癌的易患性.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 2000-12/2003-10我院手术治疗贲门腺癌67例:男56例，女11例，平均年龄58.2±10.8岁;所有病例均经组织病理学确诊.正常对照组138名来自我院健康查体的正常个体，男110名，女28名，平均年龄59.0±11.1岁，并除外各种肿瘤.用于基因分析的DNA:均来源于手术切除的贲门癌旁正常组织或外周血淋巴细胞.
1.2 方法 组织匀浆或外周血白细胞经SDS和蛋白酶K消化，酚/氯仿法提取基因组DNA.P53基因引物序列参照文献[4]设计，由Sangon公司合成.P1: 5’-TTGCCGTCCCAAGCAATGGATGA-3’; P2:5’-TCTGGGAAGGGACAGAAGATGAC-3’. PCR反应体系为25ul，其中包括基因组DNA100 ng，TaqDNA聚合酶(Sangon公司)1U.PTC-100型扩增仪进行扩增.循环参数: 94°C预变性2min，然后94 °C 30 s，60°C 30 s，72°C 30 s共35个循环，最后72°C延伸5min. 限制性内切酶消化及基因型分析:酶切反应体系20ul，其中包括PCR产物5ul，内切酶BstUI 4.0 U (New England Biolabs公司)，混匀后置37°C水浴，消化过夜.120 g/L的中性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳，银染显色分析基因型.
, 百拇医药
统计学处理 基因型频率和等位基因频率比较用x2检验，相对风险度以参与风险的比数比(oddsratio，OR) 表示，95%可信区间(95%CI)计算采用Miettinen法.
2 结果P53基因PCR产物为199bp的片段，经BstU1酶切后产生3种基因型，分别为:Pro/Pro基因型，因突变使酶切位点丢失而只有199bp的扩增片段;Arg/Arg基因型，存在酶切点，产生113bp，86 bp 2条带;Arg/Pro为杂合基因型，同时具有199bp，113 bp和86bp 3条带(图1).两组人群基因型分布符合Hardy-weinberg平衡(正常对照组x2=3.44，P>0.05; 病例组x2=0.97，P>0.05). 病例组P53基因Pro等位基因频率(0.672)和Pro/Pro基因型频率(47.8%)都显著高于正常对照组(0.413和13.0%)(x2=24.1，P<0.01和x2=29.48，P<0.01); 而Pro/Arg基因型频率和Arg/Arg基因型频率低于对照组(x2=5.66，P<0.05; x2=6.98，P<0.01). 携带Pro/Pro基因型者易患贲门腺癌的风险比携带Arg/Arg基因型者显著升高，P为8.30，95%CI:3.49-19.77(x2=22.49，P<0.01); Arg/Pro基因型与贲门腺癌的易患性无关(表1).
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图1(PDF)P53基因酶切片段12%PAGE电泳结果. 1, 3: Pro/Pro型;2, 7: Arg/Arg型;4, 5, 6: Arg/Pro型;8: PUC19 DNA/Msp I marker.
表1 P53基因型及等位基因频率与贲门腺癌风险的关系
| 基因型 | 病例组n (%) | 对照组n (%) | P (95%CI) | P值 |
| Pro/Pro | 32 (47.8) | 18 (13.0) | 8.30 (3.49-19.77) | <0.01 |
| Arg/Pro | 26 (38.8) | 78 (56.5) | 1.56 (0.55-3.63) | >0.05 |
| Arg/Arg | 9 (13.4) | 42 (30.5) | 1.0 |
, 百拇医药
3 讨论P53基因是调控细胞周期和保护细胞染色体免受损伤的基因，有3个多态位点与肿瘤有关[5]:(1)位于第4外显子中的CD72Arg/Pro多态;(2)第3内含子区16bp (5’-gacctggagggctggg-3’)的插入/缺失多态;(3)第6内含子的MSPI限制性酶切位点多态.近年来研究发现P53基因CD72Arg/Pro多态与食管鳞癌及人乳头瘤病毒(HPV)感染相关肿瘤的易感性有关联[6-7].Shepherd et al [3]对217例胃癌P53基因外显子4的测序结果表明，突变率为3.2%，发现2个多态性位点，CD36多态较罕见(仅在2例患者中发现)，相反CD72多态频率较高，而且具有种族差异，Arg/Arg基因型频率白种人为64%，而黑种人为24%;认为Arg/Arg基因型白种人易患贲门癌，携带Pro等位基因的黑种人易患胃窦癌，基因型与地理位置、性别和肿瘤组织学类型无统计学差异(P=0.067). 本结果表明，潍坊地区汉族正常人群P53基因CD72Arg/Pro多态以Arg/Pro基因型频率最高，与其他种族人群有明显差异，携带Pro/Pro基因型个体比携带Arg/Arg基因型者患贲门腺癌的风险增加8倍，95%CI:3.49-19.77(P <0.01). 提示Pro/Pro基因型是贲门腺癌的遗传易感因素.
, 百拇医药
4 参考文献1 Dumont P, Leu JI, Della Pietra AC 3rd, George DL, Murphy M. Thecodon 72 polymorphic variants of p53 have markedly
different apoptotic potential. Nat Genet 2003;33:357-365
2 Schneider-Stock R, Mawrin C, Motsch C, Boltze C, Peters B, HartigR, Buhtz P, Giers A, Rohrbeck A, Freigang B,Roessner A. Retention of the arginineallele in codon 72 of the p53 gene correlates with poor apoptosis in headand neck
, 百拇医药
cancer. Am J Pathol 2004;164:1233-1244
3 Shepherd T, Tolbert D, Benedetti J, Macdonald J, Stemmermann G,Wiest J, DeVoe G, Miller MA, Wang J, Noffsinger A,Fenoglio-Preiser C. Alterations in exon 4of the p53 gene in gastric carinoma. Gastroenterology 2000;118:1039-1044
4 张蕾,邢德印, 何祖根,林东昕. p53 基因第72位密码子多态与食管癌风险.中华医学遗传学杂志 2002;19:10-13
5 Wang-Gohrke S, Becher H, Kreienberg R, Runnebaum IB, Chang-ClaudeJ. Intron 3 16bp duplication polymorphism of
, 百拇医药
p53 is associated with an increased riskfor breast cancer by the age of 50 years. Pharmacogenetics 2002;12:269-272
6 Vos M, Adams CH, Victor TC, van Helden PD. Polymorphisms andmutations found in regions flanking exons 5 to 8 of
the TP53 gene in a population at high riskfor esophageal cancer in South Africa. Cancer Genet Cytogenet
2003;140:23-30
7 Saranath D, Khan Z, Tandle AT, Dedhia P, Sharma B, Contractor R,Shrivastava S, Dinshaw K. HPV16/18 prevalence in
cervical lesions/cancers and p53 genotypesin cervical cancer patients from India. Gynecol Oncol 2002;86:157-162, http://www.100md.com( 李湘洲, 管立学, 高 丽, 胡德宏, 王敬先, 王瑞丽, 杜欣莹, 李海波)
