创伤应激对兔胆汁流量及血浆胃泌素、胰高血糖素含量的影响
李贤珍,罗和生, 陈敏,于皆平,武汉大学人民医院消化内科湖北省武汉市 430060
胡利明,武汉大学人民医院肝胆外科 湖北省武汉市 430060
项目负责人:罗和生,430060, 湖北省武汉市武昌解放路238号,武汉大学人民医院消化内科. loutang@public.wh.hb.cn
电话:027-88041919-2134
收稿日期:2004-08-25 接受日期:2004-09-19
摘要
, http://www.100md.com
目的:研究创伤应激兔胆汁流量、血浆胃泌素和胰高血糖素含量的变化及其关系.
方法:行胆总管插管引流胆汁计量胆汁流量，将兔双下肢钳断制备应激模型，记录创伤应激前后胆汁流量的变化，同时检测血浆胃泌素、胰高血糖素含量的改变.
结果:创伤应激后兔胆汁流量较应激前明显增多(应激前后分别为2.12±0.24mL/20 min，3.01±0.36mL/20 min，P<0.01)，血浆胃泌素(GAS)、胰高血糖素(GL)含量升高(应激前后GAS分别为823.6±58.1ng/L，938.8±50.6ng/L，P <0.01;应激前后GL分别106.3±5.4ng/L，202.0±6.7ng/L，P<0.01)，胆汁流量的变化与激素的改变一致.
, 百拇医药
结论:创伤应激可使兔胆汁流量明显增多，胃肠激素的变化可能是影响胆汁分泌和排出的重要因素.
李贤珍,罗和生, 胡利明,陈敏, 于皆平.创伤应激对兔胆汁流量及血浆胃泌素、胰高血糖素含量的影响.世界华人消化杂志 2004;12(10):2497-2498
0 引言应激性溃疡的发生原因可归结为黏膜防御屏障功能下降和攻击因子作用加强，其具体发病机制尚未清楚[1]，其中胆汁反流可能是其发病的一个原因.各种形式的应激可引起体内多种胃肠激素的改变[2]，而胆汁的分泌和排出主要受激素的调节[3]，为此我们从胆汁排出量及相关激素变化加以探讨，进一步阐明胆汁反流的机制，为应激性溃疡的防治提供理论依据.
, http://www.100md.com 1 材料与方法
1.1 材料 健康雄性日本大耳白兔15只(购自武汉大学实验动物中心)，质量2-2.4kg，采取自身对照，术前在实验室内饲养1wk以适应环境，术前禁食24h，自由饮水，室温下操作，50g/L氯胺酮1 mL/kg耳缘iv麻醉成功后，取仰卧位固定，常规消毒、开腹，在十二指肠后方分离胆总管，用眼科剪在Oddi括约肌上方约1.5cm处胆总管剪开一小口，用一根长约12cm 导管(硬膜外导管)将两端分别插向肝脏及十二指肠方向约0.5-1.0cm，用0号无损伤丝线分别将两端固定，中间剩余部分引向体外在腹壁固定用于引流胆汁[4]，关腹包扎术口，放回笼中饲养，给予正常饮食，术后恢复1wk见状态良好用于实验.采取双下肢股骨钳断法造成急性创伤应激[5]，实验前禁食12h，自由饮水，实验均在同一环境温度下(25°C)上午08:00进行，实验前将外置导管从中剪断，将肝脏方向引流管接5mL注射器内，胆汁直接引流至注射器内计量，在清醒状态下将兔双后肢膝关节以上钳断，不作任何处理，创伤前引流胆汁20min作自身对照，计量后由十二指肠方向导管缓慢注入以保证胆汁酸的肠肝循环[6]，引流结束时由耳缘静脉抽血3mL注入含100g/LEDTA Na 30 mL和抑肽酶20mL的预冷试管中混匀，4 °C离心取血浆放-20°C保存[7]，创伤后即刻开始引流胆汁20min，计量胆汁流量，引流结束时抽血，处理同上.
, 百拇医药
1.2 方法 以放免分析法检测血浆胃泌素、胰高血糖素，其放免试剂盒购自北京华英生物技术研究所，采用GC-911-g-放免计数器(中国科技大学实业总公司生产)，由专职人员严格按说明书操作，质控均符合要求.
统计学处理 所有结果采取mean±SD表示，SPSS11.5统计分析软件
2 结果创伤应激后胆汁流量明显升高，血浆胃泌素、胰高血糖素含量增加，差异具有显著性意义;应激后胆汁流量的变化和激素的升高一致.(P <0.01，表1).
表1创伤应激前后各项指标变化 (mean±SD)
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bP<0.01vs 应激前.
3 讨论胆汁分泌和排出受到多种因素的影响，如环境、温度、进食等外部因素，我们是在同一环境温度下进行并且在实验前均禁食12h，基本排除了环境的变化对胆汁分泌和排除的影响;实验采取胆总管插管同时保证胆汁的肠肝循环及胆汁酸的总量，对其生理功能的影响非常小，同时手术后恢复1wk动物生存状态良好，手术创伤对本实验结果的影响很小;不同形式的应激对机体造成的影响可能不同，我们通过钳断下肢的方法造成急性创伤应激标化了应激条件，排除其他应激因素的干扰.我们观察到创伤应激后胆汁排出量增加，且与激素水平变化一致.
胃泌素是主要调节胆汁分泌的物质之一，他可以通过血液循环直接作用于肝细胞引起胆汁分泌，也可先引起胃酸分泌，由胃酸作用于十二指肠再释放促胰液素而起作用[8]，多种应激方式均可引起胃泌素和胰高血糖素增高，我们实验结果显示，创伤应激后胃泌素和胰高血糖素明显增加，与胆汁流量的增加一致，考虑胃泌素增加促进肝胆汁分泌从而增加胆汁流量.胰高血糖素主要作用肝细胞，其利胆作用是由cAMP介导的[9].分析认为创伤应激时胆汁流量的增加可能与胰高血糖素的增加有关.
, 百拇医药
总之，创伤应激时胆汁流量明显增加，而胆汁流量的变化可能主要受影响胆汁分泌和排出的胃肠激素调控;胆汁流量的增加可能加重胆汁反流，反流到胃中的胆汁破坏黏膜屏障引起胃黏膜损伤促进溃疡的发生[10].为此，临床在预防应激性溃疡的发生过程中可通过减少胆汁排出或早期使用抗胆汁的药物.
4 参考文献1 符建平,许建衡. 应激性溃疡的发病机制和预防.汕头大学医学院学报 2002;15:114-118
2 梁丕霞,杨昭徐, 张绍东,吴建中. 大鼠应激性溃疡与胃泌素、胰高血糖素和生长抑素的相关性研究.首都医学院学报
1995;16:287-289
3 李新平,欧阳克清, 蔡绍皙.胆汁分泌与排出的调节.世界华人消化杂志 2001;9:1066-1070
, http://www.100md.com
4 孙武权,吴嘉容, 沈建雄,郑凤胡. 推拿对家兔胆汁分泌影响的实验研究.按摩与导引 2002;18:19-20
5 刘靖,李兆申, 许国铭.创伤急性期血浆内CCK-8,VIP, SS, GAS含量的变化.上海医学 2000;23:293-295
6 贲卉,朱元根, 龚传美.耳-体穴电针对大鼠胆汁分泌的影响及其体液调节机制的研究.中国针灸 1997;1:39-42
7 翟惠敏,李亚洁, 陈光忠,罗炳德, 赵卫东,尹东. 湿热复合创伤应激对兔血浆胰高血糖素含量的影响.南方护理学报
2002;9:62-64
8 朱元根,贲卉, 王昕,张仲前. 耳-体穴电针对大鼠十二指肠组织中胃泌素含量的影响及其促进胆汁分泌的作用.针刺研究
, http://www.100md.com
2000;25:272-274
9 Gradilone SA, Garcia F, Huebert RC, Tietz PS, Larocca MC, KierbelA, Carreras FI, Larusso NF, Marinellu RA. Glucagon
induces the plasma membrane insertion offunctional aquaporin-8 water channels in isolated rat hepatocytes.
Hepatology 2003;37:1435-1441
10 杨鸿,侯家玉. 胆汁反流致慢性萎缩性胃炎的实验研究.北京中医药大学学报 2001;24:26-29, 百拇医药( 李贤珍, 罗和生, 胡利明, 陈 敏, 于皆平)
胡利明,武汉大学人民医院肝胆外科 湖北省武汉市 430060
项目负责人:罗和生,430060, 湖北省武汉市武昌解放路238号,武汉大学人民医院消化内科. loutang@public.wh.hb.cn
电话:027-88041919-2134
收稿日期:2004-08-25 接受日期:2004-09-19
摘要
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目的:研究创伤应激兔胆汁流量、血浆胃泌素和胰高血糖素含量的变化及其关系.
方法:行胆总管插管引流胆汁计量胆汁流量，将兔双下肢钳断制备应激模型，记录创伤应激前后胆汁流量的变化，同时检测血浆胃泌素、胰高血糖素含量的改变.
结果:创伤应激后兔胆汁流量较应激前明显增多(应激前后分别为2.12±0.24mL/20 min，3.01±0.36mL/20 min，P<0.01)，血浆胃泌素(GAS)、胰高血糖素(GL)含量升高(应激前后GAS分别为823.6±58.1ng/L，938.8±50.6ng/L，P <0.01;应激前后GL分别106.3±5.4ng/L，202.0±6.7ng/L，P<0.01)，胆汁流量的变化与激素的改变一致.
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结论:创伤应激可使兔胆汁流量明显增多，胃肠激素的变化可能是影响胆汁分泌和排出的重要因素.
李贤珍,罗和生, 胡利明,陈敏, 于皆平.创伤应激对兔胆汁流量及血浆胃泌素、胰高血糖素含量的影响.世界华人消化杂志 2004;12(10):2497-2498
0 引言应激性溃疡的发生原因可归结为黏膜防御屏障功能下降和攻击因子作用加强，其具体发病机制尚未清楚[1]，其中胆汁反流可能是其发病的一个原因.各种形式的应激可引起体内多种胃肠激素的改变[2]，而胆汁的分泌和排出主要受激素的调节[3]，为此我们从胆汁排出量及相关激素变化加以探讨，进一步阐明胆汁反流的机制，为应激性溃疡的防治提供理论依据.
, http://www.100md.com 1 材料与方法
1.1 材料 健康雄性日本大耳白兔15只(购自武汉大学实验动物中心)，质量2-2.4kg，采取自身对照，术前在实验室内饲养1wk以适应环境，术前禁食24h，自由饮水，室温下操作，50g/L氯胺酮1 mL/kg耳缘iv麻醉成功后，取仰卧位固定，常规消毒、开腹，在十二指肠后方分离胆总管，用眼科剪在Oddi括约肌上方约1.5cm处胆总管剪开一小口，用一根长约12cm 导管(硬膜外导管)将两端分别插向肝脏及十二指肠方向约0.5-1.0cm，用0号无损伤丝线分别将两端固定，中间剩余部分引向体外在腹壁固定用于引流胆汁[4]，关腹包扎术口，放回笼中饲养，给予正常饮食，术后恢复1wk见状态良好用于实验.采取双下肢股骨钳断法造成急性创伤应激[5]，实验前禁食12h，自由饮水，实验均在同一环境温度下(25°C)上午08:00进行，实验前将外置导管从中剪断，将肝脏方向引流管接5mL注射器内，胆汁直接引流至注射器内计量，在清醒状态下将兔双后肢膝关节以上钳断，不作任何处理，创伤前引流胆汁20min作自身对照，计量后由十二指肠方向导管缓慢注入以保证胆汁酸的肠肝循环[6]，引流结束时由耳缘静脉抽血3mL注入含100g/LEDTA Na 30 mL和抑肽酶20mL的预冷试管中混匀，4 °C离心取血浆放-20°C保存[7]，创伤后即刻开始引流胆汁20min，计量胆汁流量，引流结束时抽血，处理同上.
, 百拇医药
1.2 方法 以放免分析法检测血浆胃泌素、胰高血糖素，其放免试剂盒购自北京华英生物技术研究所，采用GC-911-g-放免计数器(中国科技大学实业总公司生产)，由专职人员严格按说明书操作，质控均符合要求.
统计学处理 所有结果采取mean±SD表示，SPSS11.5统计分析软件
2 结果创伤应激后胆汁流量明显升高，血浆胃泌素、胰高血糖素含量增加，差异具有显著性意义;应激后胆汁流量的变化和激素的升高一致.(P <0.01，表1).
表1创伤应激前后各项指标变化 (mean±SD)
| 指标 | 应激前 | 应激后 |
| 胆汁流量(ml/20min) | 2.12±0.24 | 3.01±0.36b |
| 胃泌素(ng/L) | 823.6±58.1 | 938.8±50.6b |
| 胰高血糖素(ng/L) | 106.3±5.4 | 202.0±6.71b |
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bP<0.01vs 应激前.
3 讨论胆汁分泌和排出受到多种因素的影响，如环境、温度、进食等外部因素，我们是在同一环境温度下进行并且在实验前均禁食12h，基本排除了环境的变化对胆汁分泌和排除的影响;实验采取胆总管插管同时保证胆汁的肠肝循环及胆汁酸的总量，对其生理功能的影响非常小，同时手术后恢复1wk动物生存状态良好，手术创伤对本实验结果的影响很小;不同形式的应激对机体造成的影响可能不同，我们通过钳断下肢的方法造成急性创伤应激标化了应激条件，排除其他应激因素的干扰.我们观察到创伤应激后胆汁排出量增加，且与激素水平变化一致.
胃泌素是主要调节胆汁分泌的物质之一，他可以通过血液循环直接作用于肝细胞引起胆汁分泌，也可先引起胃酸分泌，由胃酸作用于十二指肠再释放促胰液素而起作用[8]，多种应激方式均可引起胃泌素和胰高血糖素增高，我们实验结果显示，创伤应激后胃泌素和胰高血糖素明显增加，与胆汁流量的增加一致，考虑胃泌素增加促进肝胆汁分泌从而增加胆汁流量.胰高血糖素主要作用肝细胞，其利胆作用是由cAMP介导的[9].分析认为创伤应激时胆汁流量的增加可能与胰高血糖素的增加有关.
, 百拇医药
总之，创伤应激时胆汁流量明显增加，而胆汁流量的变化可能主要受影响胆汁分泌和排出的胃肠激素调控;胆汁流量的增加可能加重胆汁反流，反流到胃中的胆汁破坏黏膜屏障引起胃黏膜损伤促进溃疡的发生[10].为此，临床在预防应激性溃疡的发生过程中可通过减少胆汁排出或早期使用抗胆汁的药物.
4 参考文献1 符建平,许建衡. 应激性溃疡的发病机制和预防.汕头大学医学院学报 2002;15:114-118
2 梁丕霞,杨昭徐, 张绍东,吴建中. 大鼠应激性溃疡与胃泌素、胰高血糖素和生长抑素的相关性研究.首都医学院学报
1995;16:287-289
3 李新平,欧阳克清, 蔡绍皙.胆汁分泌与排出的调节.世界华人消化杂志 2001;9:1066-1070
, http://www.100md.com
4 孙武权,吴嘉容, 沈建雄,郑凤胡. 推拿对家兔胆汁分泌影响的实验研究.按摩与导引 2002;18:19-20
5 刘靖,李兆申, 许国铭.创伤急性期血浆内CCK-8,VIP, SS, GAS含量的变化.上海医学 2000;23:293-295
6 贲卉,朱元根, 龚传美.耳-体穴电针对大鼠胆汁分泌的影响及其体液调节机制的研究.中国针灸 1997;1:39-42
7 翟惠敏,李亚洁, 陈光忠,罗炳德, 赵卫东,尹东. 湿热复合创伤应激对兔血浆胰高血糖素含量的影响.南方护理学报
2002;9:62-64
8 朱元根,贲卉, 王昕,张仲前. 耳-体穴电针对大鼠十二指肠组织中胃泌素含量的影响及其促进胆汁分泌的作用.针刺研究
, http://www.100md.com
2000;25:272-274
9 Gradilone SA, Garcia F, Huebert RC, Tietz PS, Larocca MC, KierbelA, Carreras FI, Larusso NF, Marinellu RA. Glucagon
induces the plasma membrane insertion offunctional aquaporin-8 water channels in isolated rat hepatocytes.
Hepatology 2003;37:1435-1441
10 杨鸿,侯家玉. 胆汁反流致慢性萎缩性胃炎的实验研究.北京中医药大学学报 2001;24:26-29, 百拇医药( 李贤珍, 罗和生, 胡利明, 陈 敏, 于皆平)
