IN VITRO HUMAN EPIDERMAL CELL CULTURE

    郭文平 冯德华 李牧尧

    赵荣枝 韩秀英

    (内容摘要)我院从1990年5月起开展了人表皮细胞的体外培养，在培养过程中对四种培养方法作了比较，根据我院条件饲养层法最适宜。同时对使用CO2孵箱和普通温箱培养作了对照，结果是两种温箱培养表皮细胞长成膜片的时间无明显差别。

    关键词：人表皮细胞体外培养饲养层

    以少量的自体皮肤及时覆盖大面积创面已成为烧伤研究的重要课题，近年来，由于表皮细胞培养技术的发展，已能从小块皮肤经体外培养增殖成能够覆盖大面积III度创面的人表皮细胞膜片，以解决大面积深度烧伤病人自体皮源不足的问题。这项技术有着广阔的应用前景，受到国内外同行的普遍重视。我们参考了国内外的文献后，结合我院现有条件，对人表皮细胞的体外培养进行了探索，并培养成功，现报告如下：

    材料

    3个年龄组(幼年组、成人组和人胚)的健康人皮片；GH12A细胞系(自建)；培养液(含10%新生牦牛血清的RPMll640，每升RPMll640中含青霉素10万u，链霉素10万u，胰岛素20矿，氢化考的松400ug，表皮生长因子(EGF)10ug，pH6.8～7)；胰酶消化液，每升D—Hanks液中含胰酶堆， EDTA2Nal00mg。

    方法

    1.人表皮细胞的准备

    将手术中剩余的皮片放人合双抗的D—Hanks液中(青霉素1000u/ml、链霉素 ling/ml)，储放在4℃冰箱内，一般放置2小时左右。接种前先依次在三个装有含双抗的D—Hanks液的平皿中漂洗。如果是全厚皮要将皮下脂肪除去，然后将皮片剪成2cm2的小片放入胰酶消化液中，37℃消化30～60分钟(视皮片的厚薄而定，必要时还可二次消化)。将消化后的皮片的表皮层与真皮层分开。

    2.接种：

    以四种不同的方法接种

    1)组织块法：将表皮层剪成lmm2大小的碎块，点种在25ml小方瓶的底面，排列密度要大。然后将瓶翻转，加入培养液(我们使用RPMll640，中含抗生素、胰岛素、氢化考的松 ......