王琳,成军,中国人民解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心,全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039

    国家自然科学基金攻关项目,No. C03011402, No. C30070689

    军队“九、五”科技公关项目,No. 98D063

    军队回国留学人员启动基金项目,No. 98H038

    军队“十、五”科技面上项目,No. 01MB135

    项目负责人:成军, 100039, 北京市西四环中路100号,北京市中国人民解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心. cj@genetherapy.com.cn

    电话:010-66933392 传真:010-63801283

    收稿日期:2004-05-28 接受日期:2004-09-30

    摘要

    目的:应用基因芯片技术研究未知功能基因NS5ATP11的表达对于肝细胞基因表达谱的影响.

    方法:从HepG2细胞RNA中用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)扩增出NS5ATP11编码区DNA，常规分子生物学技术构建NS5ATP11的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP11，利用脂质体转染技术转染HepG2细胞，NS5ATP11的表达以Western blot杂交技术证实.从转染和非转染细胞HepG2种提取总mRNA，逆转录为cDNA，并进行基因芯片技术分析.

    结果:证实构建pcDNA3.1(-)-NS5ATP11在HepG2细胞中表达正确.NS5ATP11重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达改变进行分析.结果表明，8种基因的表达水平上调，10种基因的表达水平下调.

    结论:NS5ATP11对于肝细胞基因表达谱存在一定影响;基因芯片技术是分析蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径，有助于了解NS5ATP11对肝细胞和其他生物学功能的调节作用.

    王琳,成军. 基因表达谱芯片技术筛选NS5ATP11反式调节基因.世界华人消化杂志 2004;12(11):2749-2752

    0 引言在嗜肝病毒中丙型肝炎病毒(HCV)被认为是有引起人类肝脏疾病的主要因素，感染全世界约2%的人口^[1-2].HCV编码的非结构蛋白5A是一种具有隐性反式激活作用的磷蛋白 ......