人胰腺癌组织中Th2类细胞因子的优势表达及其临床意义
张圣林,邱法波, 吴力群,卢云,青岛大学医学院附属医院肝胆血管外科 山东省青岛市 266003
项目负责人:邱法波,266003, 山东省青岛市江苏路16号,青岛大学医学院附属医院肝胆血管外科. phulin@sohu.com
电话:0532-2911369
收稿日期:2004-09-13 接受日期:2004-10-20
摘要
目的:观察Th1/Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达模式及临床意义.
, 百拇医药
方法:以IFN-g和IL-2代表Th1类细胞因子，IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子.收集45例胰腺癌患者的手术切除组织蜡块，以免疫组织化学PV-9000通用型二步法染色，DAB显色试剂盒显色，检测胰腺癌组织中Th1/Th2类细胞因子的表达.
结果:IFN-g和IL-2在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异(P> 0.05)，说明Th1类细胞因子在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异;IL-4和IL-10在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织(P= 0.022 <0.05; P = 0.023 <0.05)，说明Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织.
结论:胰腺癌组织中Th2类细胞因子呈优势表达状态，这可能是肿瘤免疫逃逸的机制.
, 百拇医药
张圣林,邱法波, 吴力群,卢云. 人胰腺癌组织中Th2类细胞因子的优势表达及其临床意义.世界华人消化杂志 2004;12(12):2862-2864
0 引言自Th1和Th2的概念提出以来，人们对其在机体免疫应答中的作用进行了大量的体内外实验研究，但未见有胰腺癌组织中Th1/Th2偏移的研究报道.我们以IFN-g和IL-2代表Th1类细胞因子，IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子，以免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中Th1/Th2类细胞因子的表达，阐明Th1/Th2类细胞因子在胰腺癌中的表达特征，这对于明确胰腺癌的发病机制及指导临床有重要意义.
1 材料和方法
1.1 材料 收集青岛大学医学院附属医院肝胆血管外科1998-2004年间的45例胰腺癌患者病例资料及切除组织的蜡块标本，男31例，女14例，年龄44-80岁，平均年龄63.8岁.其中胰头癌33例，胰体尾癌10例，钩突癌2例.病理类型: 高分化腺癌5例，中分化腺癌25例，低分化腺癌15例.对照组10例正常胰腺组织标本取自非正常死亡的健康成人尸体.
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 免疫组化染色 胰腺癌组织蜡块预冷后4mm连续切片，二甲苯与梯度酒精脱蜡至水化，30mL/L过氧化氢10min以消除内源性过氧化物酶.置入0.01 mol/L枸橼酸缓冲液(pH= 6.0)，微波修复抗原.一抗为兔抗人IFN-g，IL-2，IL-4和IL-10(武汉博士德生物工程有限公司)，IFN-g，IL-2和IL-4以1∶200稀释后使用，IL-10以1∶50稀释.PV-9000通用型二步法染色，PV-9000试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，流程参考说明书.DAB显色试剂盒显色，苏木素复染，10mL/L 盐酸酒精分化，1mL/L氨水返蓝，梯度酒精脱水，干燥后中性树胶封片.用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照.
1.2.2 结果判断 胞质内含棕黄色颗粒为阳性，并按表达情况和强度分为:(-)为阴性，(+)每张切片有<25%细胞表达，(++)25-50%细胞表达，(+++)>50%的细胞表达.
, http://www.100md.com
统计学处理 采用SPSS11.5软件进行分析，P<0.05认为有统计学意义.
2 结果胰腺癌组织中四种细胞因子的表达情况(表1).IFN-g在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异(P= 0.596 >0.05，图1);IL-2在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达也无明显差异(P= 0.146 >0.05，图2);IL-4在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织(P= 0.022 <0.05，图3);IL-10在胰腺癌组织中的表达也明显高于正常胰腺组织(P= 0.023 <0.05，图4).
以IFN-g和IL-2代表Th1类细胞因子，在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异;以IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子，在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织.这与国内外的有关报道基本相符合，说明胰腺癌作为恶性肿瘤中的一种也是处于Th1/Th2类细胞因子偏移状态，Th2类细胞因子呈优势表达.
, 百拇医药
不同病理类型的胰腺癌组织中Th2类细胞因子的表达情况(表2).IL-4，IL-10的表达情况与胰腺癌的恶性程度呈明显的正相关(P= 0.013 <0.05; P = 0.029 <0.05).
图1 IFN-g在胰腺癌中的表达(×400).
图2 IL-2在胰腺癌中的表达(×400).
图3 IL-4在胰腺癌中的表达(×400).
图4 IL-10在胰腺癌中的表达(×400).
表1 细胞因子在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达
, 百拇医药
aP<0.05vs正常胰腺组;cP<0.05vs正常胰腺组.
表2 Th2类细胞因子在不同病理类型胰腺癌中的表达
3 讨论根据CD4+Th细胞所分泌的细胞因子不同，将其分为Th0、Th1、Th2三种亚型.Th1类细胞分泌IFN-g、IL-2、IL-18和IL-12等，主要介导细胞免疫应答;Th2类细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等，主要介导体液免疫应答.正常机体的Th1/Th2类细胞因子处于动态平衡，当这个平衡失调并向Th1或Th2转化时，称为Th1/Th2的偏移.Th1/Th2的偏移与许多疾病的发生、发展、治疗和转归有密切的关系.近年来研究发现，非小细胞肺癌、直肠癌、卵巢癌、绒癌、黑色素瘤、胃癌、骨肉瘤、淋巴瘤及鼻咽癌等多种肿瘤患者体内Th2类细胞因子占优势，且Th1/Th2的偏移与肿瘤的恶性程度呈正相关[1].Bellone et al [2]也发现胰腺癌组织中Th2类细胞因子的表达明显高于正常胰腺组织，而其未对Th1类细胞因子和Th1/Th2的偏移做相关研究.我们的结果显示，45例胰腺癌组织中Th1类细胞因子的表达与正常胰腺组织无明显差异，Th2类细胞因子的表达明显高于正常胰腺组织，提示Th2类细胞因子分泌量增多，呈优势表达状态.这不但与Bellone的结论基本符合而且还进一步阐述了胰腺癌患者的免疫状态.
, 百拇医药
机体的抗肿瘤免疫效应机制包括细胞免疫和体液免疫两个方面，细胞免疫是主力，在抗肿瘤免疫过程中发挥着重要作用[3].恶性肿瘤患者Th2优势表达可降低机体的抗肿瘤免疫能力，致肿瘤细胞逃避细胞免疫应答，使癌细胞在宿主体内得以长期的存活和发展[4]，另外Th2类细胞还可直接阻滞Th1类细胞介导的免疫应答[5]，并且随肿瘤分化程度的降低和病情的进展这种趋势会更加明显[6]，这可能是导致肿瘤免疫逃逸的机制.
检测胰腺癌患者的Th1/Th2类细胞因子，既有助于疾病的诊断，又可对疾病的发生发展进行监测，还能以调整Th1/Th2的平衡为目的设计出相应的治疗方案[7].因此，对恶性肿瘤患者，检测机体的Th1/Th2类细胞因子水平有着重要的临床意义.
4 参考文献1 Kharkevitch DD, Seito D, Balch GC, Maeda T, Balch CM, Itoh K.Characterization of autologous tumor-specific T-helper 2
, 百拇医药
cells in tumor-infiltrating lymphocytesfrom a patient with metastatic melanoma. Int J Cancer 1994;58:317-323
2 Bellone G, Turletti A, Artusio E, Mareschi K, Carbone A, Tibaudi D,Robecchi A, Emanuelli G, Rodeck U. Tumor-
associated transforming growth factor-betaand interleukin-10 contribute to a systemic Th2 immune phenotype in
pancreatic carcinoma patients. Am J Pathol 1999;155:537-547
, http://www.100md.com
3 Reome JB, Hylind JC, Dutton RW, Dobrzanski MJ. Type 1 and type 2tumor infiltrating effector cell subpopulations in
progressive breast cancer. Clin Immunol 2004;111:69-81
4 Cua DJ, Hinton DR, Stohlman SA. Self-antigen-induced Th2 responsesin experimental allergic encephalomyelitis (EAE)
-resistant mice. Th2-mediated suppressionof autoimmune disease. J Immunol 1995;155:4052-4059
, http://www.100md.com
5 Ruzek MC, Mathur A. Specific decrease of Th1-like activity in micewith plasma cell tumors. Int Immunol
1995;7:1029-1035
6 Spachacz R, Kasprzak A, Stefanska K, Trejster E, Seidel J, Zabel M.Tissue expression of cytokines (IL-1alpha, IL-2, IL-6,IL-12, TNF-alpha) in B-cell lymphomas inchildren. Folia Morphol 2003;62:483-484
7 Loskog A, Dzojic H, Vikman S, Ninalga C, Essand M, Korsgren O,Totterman TH. Adenovirus CD40 ligand gene therapy
counteracts immune escape mechanisms in thetumor Microenvironment. J Immunol 2004;172:7200-7205, 百拇医药( 张圣林, 邱法波, 吴力群, 卢 云)
项目负责人:邱法波,266003, 山东省青岛市江苏路16号,青岛大学医学院附属医院肝胆血管外科. phulin@sohu.com
电话:0532-2911369
收稿日期:2004-09-13 接受日期:2004-10-20
摘要
目的:观察Th1/Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达模式及临床意义.
, 百拇医药
方法:以IFN-g和IL-2代表Th1类细胞因子，IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子.收集45例胰腺癌患者的手术切除组织蜡块，以免疫组织化学PV-9000通用型二步法染色，DAB显色试剂盒显色，检测胰腺癌组织中Th1/Th2类细胞因子的表达.
结果:IFN-g和IL-2在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异(P> 0.05)，说明Th1类细胞因子在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异;IL-4和IL-10在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织(P= 0.022 <0.05; P = 0.023 <0.05)，说明Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织.
结论:胰腺癌组织中Th2类细胞因子呈优势表达状态，这可能是肿瘤免疫逃逸的机制.
, 百拇医药
张圣林,邱法波, 吴力群,卢云. 人胰腺癌组织中Th2类细胞因子的优势表达及其临床意义.世界华人消化杂志 2004;12(12):2862-2864
0 引言自Th1和Th2的概念提出以来，人们对其在机体免疫应答中的作用进行了大量的体内外实验研究，但未见有胰腺癌组织中Th1/Th2偏移的研究报道.我们以IFN-g和IL-2代表Th1类细胞因子，IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子，以免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中Th1/Th2类细胞因子的表达，阐明Th1/Th2类细胞因子在胰腺癌中的表达特征，这对于明确胰腺癌的发病机制及指导临床有重要意义.
1 材料和方法
1.1 材料 收集青岛大学医学院附属医院肝胆血管外科1998-2004年间的45例胰腺癌患者病例资料及切除组织的蜡块标本，男31例，女14例，年龄44-80岁，平均年龄63.8岁.其中胰头癌33例，胰体尾癌10例，钩突癌2例.病理类型: 高分化腺癌5例，中分化腺癌25例，低分化腺癌15例.对照组10例正常胰腺组织标本取自非正常死亡的健康成人尸体.
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 免疫组化染色 胰腺癌组织蜡块预冷后4mm连续切片，二甲苯与梯度酒精脱蜡至水化，30mL/L过氧化氢10min以消除内源性过氧化物酶.置入0.01 mol/L枸橼酸缓冲液(pH= 6.0)，微波修复抗原.一抗为兔抗人IFN-g，IL-2，IL-4和IL-10(武汉博士德生物工程有限公司)，IFN-g，IL-2和IL-4以1∶200稀释后使用，IL-10以1∶50稀释.PV-9000通用型二步法染色，PV-9000试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，流程参考说明书.DAB显色试剂盒显色，苏木素复染，10mL/L 盐酸酒精分化，1mL/L氨水返蓝，梯度酒精脱水，干燥后中性树胶封片.用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照.
1.2.2 结果判断 胞质内含棕黄色颗粒为阳性，并按表达情况和强度分为:(-)为阴性，(+)每张切片有<25%细胞表达，(++)25-50%细胞表达，(+++)>50%的细胞表达.
, http://www.100md.com
统计学处理 采用SPSS11.5软件进行分析，P<0.05认为有统计学意义.
2 结果胰腺癌组织中四种细胞因子的表达情况(表1).IFN-g在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异(P= 0.596 >0.05，图1);IL-2在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达也无明显差异(P= 0.146 >0.05，图2);IL-4在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织(P= 0.022 <0.05，图3);IL-10在胰腺癌组织中的表达也明显高于正常胰腺组织(P= 0.023 <0.05，图4).
以IFN-g和IL-2代表Th1类细胞因子，在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异;以IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子，在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织.这与国内外的有关报道基本相符合，说明胰腺癌作为恶性肿瘤中的一种也是处于Th1/Th2类细胞因子偏移状态，Th2类细胞因子呈优势表达.
, 百拇医药
不同病理类型的胰腺癌组织中Th2类细胞因子的表达情况(表2).IL-4，IL-10的表达情况与胰腺癌的恶性程度呈明显的正相关(P= 0.013 <0.05; P = 0.029 <0.05).
图1 IFN-g在胰腺癌中的表达(×400).
图2 IL-2在胰腺癌中的表达(×400).
图3 IL-4在胰腺癌中的表达(×400).
图4 IL-10在胰腺癌中的表达(×400).
表1 细胞因子在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达
| 组别 | IFN-g | IL-2 | IL-4 | IL-10 | ||||||||||||
| - | + | ++ | +++ | - | + | ++ | +++ | - | + | ++ | +++ | - | + | ++ | +++ | |
| 胰腺癌 | 4 | 13 | 22 | 6 | 7 | 12 | 21 | 5 | 15a | 21a | 9a | 0a | 19c | 20c | 6c | 0c |
| 正常胰腺 | 0 | 2 | 7 | 1 | 2 | 6 | 2 | 0 | 8a | 2a | 0a | 0a | 9c | 1c | 0c | 0c |
, 百拇医药
aP<0.05vs正常胰腺组;cP<0.05vs正常胰腺组.
表2 Th2类细胞因子在不同病理类型胰腺癌中的表达
| 病理类型 | IL-4 | IL-10 | ||||
| - | + | ++ | - | + | ++ | |
| 高分化 | 4 | 1 | 0 | 3 | 2 | 0 |
| 中分化 | 6 | 12 | 7 | 5 | 12 | 8 |
| 低分化 | 2 | 4 | 9 | 2 | 3 | 10 |
3 讨论根据CD4+Th细胞所分泌的细胞因子不同，将其分为Th0、Th1、Th2三种亚型.Th1类细胞分泌IFN-g、IL-2、IL-18和IL-12等，主要介导细胞免疫应答;Th2类细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等，主要介导体液免疫应答.正常机体的Th1/Th2类细胞因子处于动态平衡，当这个平衡失调并向Th1或Th2转化时，称为Th1/Th2的偏移.Th1/Th2的偏移与许多疾病的发生、发展、治疗和转归有密切的关系.近年来研究发现，非小细胞肺癌、直肠癌、卵巢癌、绒癌、黑色素瘤、胃癌、骨肉瘤、淋巴瘤及鼻咽癌等多种肿瘤患者体内Th2类细胞因子占优势，且Th1/Th2的偏移与肿瘤的恶性程度呈正相关[1].Bellone et al [2]也发现胰腺癌组织中Th2类细胞因子的表达明显高于正常胰腺组织，而其未对Th1类细胞因子和Th1/Th2的偏移做相关研究.我们的结果显示，45例胰腺癌组织中Th1类细胞因子的表达与正常胰腺组织无明显差异，Th2类细胞因子的表达明显高于正常胰腺组织，提示Th2类细胞因子分泌量增多，呈优势表达状态.这不但与Bellone的结论基本符合而且还进一步阐述了胰腺癌患者的免疫状态.
, 百拇医药
机体的抗肿瘤免疫效应机制包括细胞免疫和体液免疫两个方面，细胞免疫是主力，在抗肿瘤免疫过程中发挥着重要作用[3].恶性肿瘤患者Th2优势表达可降低机体的抗肿瘤免疫能力，致肿瘤细胞逃避细胞免疫应答，使癌细胞在宿主体内得以长期的存活和发展[4]，另外Th2类细胞还可直接阻滞Th1类细胞介导的免疫应答[5]，并且随肿瘤分化程度的降低和病情的进展这种趋势会更加明显[6]，这可能是导致肿瘤免疫逃逸的机制.
检测胰腺癌患者的Th1/Th2类细胞因子，既有助于疾病的诊断，又可对疾病的发生发展进行监测，还能以调整Th1/Th2的平衡为目的设计出相应的治疗方案[7].因此，对恶性肿瘤患者，检测机体的Th1/Th2类细胞因子水平有着重要的临床意义.
4 参考文献1 Kharkevitch DD, Seito D, Balch GC, Maeda T, Balch CM, Itoh K.Characterization of autologous tumor-specific T-helper 2
, 百拇医药
cells in tumor-infiltrating lymphocytesfrom a patient with metastatic melanoma. Int J Cancer 1994;58:317-323
2 Bellone G, Turletti A, Artusio E, Mareschi K, Carbone A, Tibaudi D,Robecchi A, Emanuelli G, Rodeck U. Tumor-
associated transforming growth factor-betaand interleukin-10 contribute to a systemic Th2 immune phenotype in
pancreatic carcinoma patients. Am J Pathol 1999;155:537-547
, http://www.100md.com
3 Reome JB, Hylind JC, Dutton RW, Dobrzanski MJ. Type 1 and type 2tumor infiltrating effector cell subpopulations in
progressive breast cancer. Clin Immunol 2004;111:69-81
4 Cua DJ, Hinton DR, Stohlman SA. Self-antigen-induced Th2 responsesin experimental allergic encephalomyelitis (EAE)
-resistant mice. Th2-mediated suppressionof autoimmune disease. J Immunol 1995;155:4052-4059
, http://www.100md.com
5 Ruzek MC, Mathur A. Specific decrease of Th1-like activity in micewith plasma cell tumors. Int Immunol
1995;7:1029-1035
6 Spachacz R, Kasprzak A, Stefanska K, Trejster E, Seidel J, Zabel M.Tissue expression of cytokines (IL-1alpha, IL-2, IL-6,IL-12, TNF-alpha) in B-cell lymphomas inchildren. Folia Morphol 2003;62:483-484
7 Loskog A, Dzojic H, Vikman S, Ninalga C, Essand M, Korsgren O,Totterman TH. Adenovirus CD40 ligand gene therapy
counteracts immune escape mechanisms in thetumor Microenvironment. J Immunol 2004;172:7200-7205, 百拇医药( 张圣林, 邱法波, 吴力群, 卢 云)
