在临床与基础间纵横——2004年中华医学科技奖一等奖简介

http://www.100md.com 2005年1月18日 《中国医药报》2005.01.18

     Alport综合征从临床到基因诊断的系列研究

    该项目是1993年1月15日～2003年6月30日，由北京大学第一医院丁洁等11位科教人员共同完成。

    Alport综合征(AS)是一种以血尿、感音神经性耳聋及进行性肾功能减退为临床特点的预后严重的遗传性肾脏疾病。研究人员进行了系列的诊断研究。

    ◆临床诊断

    1997年将在国外所建的抗Ⅳ型胶原α5链的单克隆抗体应用于AS的临床诊断，以简单易行的皮肤活检组织进行Ⅳ型胶原α5链的免疫荧光学检查，经与肾活检电镜检查的“金标准”对照，可用于诊断X连锁型AS患者，也可助于筛查基因携带者。用该方法先后为全国各地(包括香港医生推荐的病例)的630余位患者进行了检测，确诊了89个AS家系共199位AS患者，其中包括年仅1岁的AS患儿。还用此方法确诊并报道了1例AS伴神经纤维瘤的患者。

    1999年结合肾小球基底膜Ⅳ型胶原α链的检测，报道了我国常染色体隐性遗传型AS患者。

    对1978年～1999年的20年间，国内所报道的AS家系88个及近10年用上述方法确诊的89个AS家系共199位AS患者的临床特征进行了较全面细致的分析和总结，提出了我国AS的临床特征。

    ◆基因诊断

    用皮肤成纤维细胞的信使核糖核酸(mRNA)检测COL4A5基因突变，进行AS基因诊断。

    通过操作简单、损伤小的皮肤活检获得标本并进行皮肤成纤维细胞的培养和传代，提取mR鄄NA(约6.5kb大)，通过逆转录、5次聚合酶链反应(PCR)扩增即可获得Ⅳ型胶原α5链全部mRNA序列，直接以凝胶电泳检测出大片断缺失或插入，直接测序分析，检测出小的点突变。并与基因组DNA检测结果比较，结果显示该检测方法不但较传统的方法快捷，而且对突变检出率高达90.6%。

    从mRNA水平分析AS基因型，可以发现并证实一些在基因组DNA水平无法发现和证实的异常(剪接位点突变及剪接位点外的单个碱基突变导致转录后剪接发生错误)，而且由于相对直观地反映了COL4A5基因突变对其转录时的影响，而更有助于理解基因型与表型之间的关系，加深了对基因功能的理解。

    通过Ⅳ型胶原α5链mRNA及基因组脱氧核糖核酸(DNA)的检测和分析，发现新的AS基因型。

    确定并报道了18个AS的COL4A5基因新突变，揭示了中国人AS的基因型特征。

    报道了首例中国X连锁型AS男性患者具有正常的皮肤和肾小球基底膜α5(Ⅳ)链检测结果，但α5(Ⅳ)链mRMA和COL4A5基因分析均确定了该患者COL4A5基因有一个新突变(G239R) ......