抗线粒体抗体测定对诊断原发性胆汁性肝硬化的临床意义
谭立明, 吕娇凤, 刘宁, 李华, 秦和昌, 江西医学院第二附属医院检验科 江西省南昌市 330006
董叶, 叶如美, 江西医学院第二附属医院消化内科 江西省南昌市 330006
通讯作者:谭立明, 330006, 江西省南昌市民德路1号, 江西医学院第二附属医院检验科. yuuje@126.com
电话: 0791-2867799
收稿日期: 2005-01-28 接受日期: 2005-02-26
摘要
目的:探讨抗线粒体抗体(AMA)测定对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床意义.
, 百拇医药
方法:41例PBC及51例非原发性胆汁性肝硬化(自身免疫性肝炎9例，乙型肝炎21例，丙型肝炎11例，戊型肝炎10例)患者，采用间接免疫荧光法检测抗线粒体抗体，并对结果进行回顾性分析.
结果:原发性胆汁性肝硬化阳性率90.24%(37/41)，自身免疫性肝炎阳性率44.44%(4/9)，乙型肝炎阳性率23.81%(5/21)，丙型肝炎阳性率27.27%(3/11)，戊型肝炎阳性率80%(8/10)，40例对照组3例阳性.PBC、戊型肝炎与正常组血清AMA检测比较有非常显著性差异(P<0.01);AIH与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);乙型肝炎组、丙型肝炎组与正常对照组比较无显著性差异;乙型肝炎组、丙型肝炎组分别与戊型肝炎组比较均有显著性差异(P<0.01、P<0.05);乙型肝炎组与丙型肝炎组比较无显著性差异.PBC组与非PBC组血清AMA的阳性率分别为90.24%和39.22%，两组比较有非常显著性差异(P<0.01).
, 百拇医药
结论:血清抗AMA抗体检测对诊断原发性胆汁性肝硬化患者有着重要临床意义.
谭立明, 董叶, 吕娇凤, 刘宁, 李华, 秦和昌, 叶如美. 抗线粒体抗体测定对诊断原发性胆汁性肝硬化的临床意义. 世界华人消化杂志 2005;13(7):924-926
http://www.wjgnet.com/1009-3079/13/924.asp
0 引言抗线粒体抗体(antimitochondrial antibodies，AMA)在国外已作为原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)的诊断指标之一应用于临床.PBC一种慢性进展性疾病，其特点是肝内小胆管进行性破坏及门静脉炎症，最终导致纤维化和肝硬化[1].目前国内对此项指标的研究及应用报道较少，我们用以鼠肾、Hep-2细胞为基质核材细胞的免疫荧光法分别对PBC患者、自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)、乙型肝炎、丙型肝炎及戊型肝炎等患者进行了抗线粒体抗体检测，并初步探讨了抗线粒体抗体在肝病患者中的诊断价值，现将结果分析报告如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 41例PBC及51例非PBC患者均为江西医学院第二附属医院2000-07/2004-12门诊、住院确诊病例，均符合2000年美国肝病学会(AASLD)诊断建议[2]，其中51例非原发性胆汁性肝硬化分别为自身免疫性肝炎9例，乙型肝炎21例，丙型肝炎11例，戊型肝炎10例;男性49例，女性43例，年龄为21-58岁，平均年龄为39±10.8岁，对照组40名，均为健康献血员，男性20名，女性20名，年龄为23-52岁，平均年龄为37±8.3岁.
1.2 方法 抗线粒体抗体试剂采用欧蒙医学实验诊断有限公司产生的免疫荧光试剂，用间接免疫荧光法检测.检测方法为检查加样板，生物载片恢复至室温，稀释血清，设阴、阳性对照、质控对照，加25 mL稀释后血清，至加样板的每一反应区.再将生物薄片盖于加样板的凹槽里，室温孵育30 min，冲洗，加荧光素20 mL.室温孵育30 min，再冲洗，封片镜检.
, 百拇医药
统计学处理 数据分析均采用SPSS 11.5软件进行统计分析.
2 结果
2.1 PBC及非PBC患者检测AMA抗体结果为PBC阳性率最高为90.24%;HEV阳性率次之，为80.00%，HBV阳性率最低，为23.81%，对照组阳性结果则为7.5%(表1).
2.2 41例PBC与51例非PBC检测AMA检出率的比较，经c2检验差异有非常显著性意义(P<0.01)(表2).
表1 PBC及非PBC患者检测AMA抗体结果
aP<0.05vs对照组;cP<0.05 vs对照组;eP<0.05vs HEV组;gP<0.05vs HEV组.
表2 PBC与非PBC检出率的比较
bP<0.01vs非PBC.
3 讨论
线粒体存在于各种组织细胞，线粒体抗原位于线粒体的内膜和外膜.AMA作为一种自身抗体可进入细胞，并直接与线粒体抗原作用，导致组织细胞的免疫损伤[2].以目前研究表明，许多肝病如PBC、HCV、HEV等与自身免疫反应密切相关，但其发生机制仍未完全明了.Covini et al[3]认为病毒可能参与激活自身免疫性疾病及自身抗体的产生.目前为止，发现线粒体膜上存在9种自身抗原(M1-9)，与PBC关系最大的是M2.有人认为M2伴M4、M8阳性多见于PBC的严重类型，M2伴M9阳性多见于PBC轻型患者以及PBC患者的亲属;M4、M7、M8阳性与自身免疫性肝炎有关[4-8].
, 百拇医药
AMA是PBC的血清学标志，其中M2AMA对PBC有高度的敏感性和特异性.M2抗体的靶抗原是丙酮酸脱氢酶复合物E2成分、2-氧戊二酸脱氢酶复合体、支链2-氧酸脱氨酶复合体.PBC是一种可能与自身免疫有关的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病，主要发生于中年女性，病理学表现为非脓性肝内胆管慢性炎症阻塞和汇管区淋巴细胞浸润，从而导致胆汁淤积，发生肝纤维化及肝硬化.血清抗线粒体抗体诊断PBC的特异性比较高，为本病最突出的免疫学指标异常，也是最重要的诊断手段.笔者检测41例PBC结果阳性37例，阳性率达90.24%，与非PBC组比较差异有非常显著性意义(P<0.01)，与文献[9-10]报道基本一致.一般认为PBC是免疫调节紊乱引起的自身免疫性疾病，伴随细胞免疫功能低下，同时有体液免疫功能显著增强，血液中可检测到多种自身抗体[11-12]，特别是AMA对PBC具有重要的早期诊断价值.因此对于长期梗阻性黄疸的患者，尤其是女性患者，在排除肝外梗阻原因后，应及早进行AMA的检测，以便早期明确诊断，减少误诊误治.
, 百拇医药
自身免疫性肝炎多发于中青年女性，其基本病理改变为肝小叶周围区有碎屑坏死，亦可伴有桥样坏死，其间有明显的淋巴细胞和单核细胞浸润，但肝内小胆管无损伤的征象.肝细胞可呈水肿变性和气球样变.随着病情的进展，汇管区纤维组织增生，肝小叶扭曲，最终导致肝硬化.从病理组织学来看，自身免疫性肝炎与病毒性肝炎不易区别，但前者无病毒性肝炎的标记物.自身免疫性肝炎无特异性的临床表现，患者常有乏力、食欲减退、腹胀、肝区隐痛等症状，部分患者可有低热或黄疸，肝、脾可能增大[13-14].我们检测9例AIH患者其结果阳性4例，阳性率为44.44%，结果显示AMA抗体同AIH疾病是有一定的关系，但由于检测的例数太少，还有待进一步研究.
我们对肝病患者进行AMA抗体的检测，结果阳性率均高于对照组.有关HBV、HCV的结果提示，HBV患者也可以检出自身免疫抗体，HCV患者可以诱导产生自身免疫抗体的结论相符[15-16].而10例HEV患者中有8例阳性，阳性率为80%，提示自身免疫反应有可能参与了HEV的发病，或是与线粒体抗体具有共同抗原成分.总之，血清抗AMA抗体检测对诊断原发性胆汁性肝硬化有着重要的临床意义.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Neuberger J. Primary biliary cirrhosis. Lancet 1997;350:875-879
2 卢建溪, 邓练贤,李刚,姚春斓,姚集鲁. 肝病患者血清抗线粒体抗体的检测及临床意义.
中华肝脏病杂志 2002;10:220-221
3 Covini G, von Mhlen CA, Pacchetti S, Colombo M, Chan EK, Tan EM. Diversity of antinuclear antibody responses in
hepatocellular carcinorna. J Hepatol 1997;26:1255-1265
, 百拇医药
4 Joplin RE, Neuberger JM. Immunopathology of primary biliary cirrhosis. Eur J Gastroenterol Hepatol 1999;10:587-593
5 Nakajima M, Shimizu H, Miyazaki A, Watanabe S, Kitami N, Sato N. Detection of IgA, IgM, and IgG subclasses of
anti-M2 antibody by immunoblotting in autoimmune cholangitis:is autoimmune cholangitis and early stage of primary
biliary cirrhosis. J Gastroenterol 1999;34:607-612
, http://www.100md.com
6 Heathcote EJ. Management of primary biliary cirrhosis:the American Association for the study of liver diseases
practice guidelines. Hepatology 2000;31:1005-1013
7 Klein R, Huizenga JR, Gips CH, Berg PA. Antimitochondrial antibody profiles in patients with primary biliary cirrhosis
before orthotopic liver transplantation and titres of antimitochondrial antibody-subtypes after transplantation.
, 百拇医药
J Hepatol 1994;20:181-189
8 马东来, 张少静,文夫瑞德·斯特克.自身抗体及其免疫荧光模式.第一版. 北京:北京科学技术出版社,2000:58-60
9 娄永新. 自身抗体的检测与临床应用. 辽宁医学杂志 1995;9:169-171
10 Bassendine MF, Yeaman SJ. Serological markers in primary biliarycirrhosis:diagnosis, prognosis and subsets.
Hepatology 1992;15:545-548
11 黄春容. 原发性胆汁性肝硬化. 余保平,王伟岩.消化系疾病免疫学. 第1版. 北京:科学出版社, 2000:409
, 百拇医药
12 Czaja AJ, Carpenter HA, Santrach PJ, Moore SB. Autoimmunecholangitis within the spectrum of autoimmune
liver disease. Hepatology 2000;31:1231-1238
13 蒋明. 自身抗体测定对诊断自身免疫性肝病的临床意义. 中国实用内科杂志 2002;22:48-51
14 Leung PS, Coppel RL, Ansari A, Munoz S, Gershwin ME. Antimitochondrial antibodies in primary biliary cirrhosis.
Semin Liver Dis 1997;17:61-69
15 McMurray RW, Elbourne K. Hepatitis C virus infection and autoimmunity. Semin Arthritis Rheum 1997;26:689-701
16 Manns MP. Hepatotropic viruses and autoimmunity. J Viral Hepat 1997;4(Suppl 1):7-10
编辑 张海宁, http://www.100md.com( 谭立明,董 叶,吕娇凤, 刘 宁, 李 华, 秦和昌,叶如美)
董叶, 叶如美, 江西医学院第二附属医院消化内科 江西省南昌市 330006
通讯作者:谭立明, 330006, 江西省南昌市民德路1号, 江西医学院第二附属医院检验科. yuuje@126.com
电话: 0791-2867799
收稿日期: 2005-01-28 接受日期: 2005-02-26
摘要
目的:探讨抗线粒体抗体(AMA)测定对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床意义.
, 百拇医药
方法:41例PBC及51例非原发性胆汁性肝硬化(自身免疫性肝炎9例，乙型肝炎21例，丙型肝炎11例，戊型肝炎10例)患者，采用间接免疫荧光法检测抗线粒体抗体，并对结果进行回顾性分析.
结果:原发性胆汁性肝硬化阳性率90.24%(37/41)，自身免疫性肝炎阳性率44.44%(4/9)，乙型肝炎阳性率23.81%(5/21)，丙型肝炎阳性率27.27%(3/11)，戊型肝炎阳性率80%(8/10)，40例对照组3例阳性.PBC、戊型肝炎与正常组血清AMA检测比较有非常显著性差异(P<0.01);AIH与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);乙型肝炎组、丙型肝炎组与正常对照组比较无显著性差异;乙型肝炎组、丙型肝炎组分别与戊型肝炎组比较均有显著性差异(P<0.01、P<0.05);乙型肝炎组与丙型肝炎组比较无显著性差异.PBC组与非PBC组血清AMA的阳性率分别为90.24%和39.22%，两组比较有非常显著性差异(P<0.01).
, 百拇医药
结论:血清抗AMA抗体检测对诊断原发性胆汁性肝硬化患者有着重要临床意义.
谭立明, 董叶, 吕娇凤, 刘宁, 李华, 秦和昌, 叶如美. 抗线粒体抗体测定对诊断原发性胆汁性肝硬化的临床意义. 世界华人消化杂志 2005;13(7):924-926
http://www.wjgnet.com/1009-3079/13/924.asp
0 引言抗线粒体抗体(antimitochondrial antibodies，AMA)在国外已作为原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)的诊断指标之一应用于临床.PBC一种慢性进展性疾病，其特点是肝内小胆管进行性破坏及门静脉炎症，最终导致纤维化和肝硬化[1].目前国内对此项指标的研究及应用报道较少，我们用以鼠肾、Hep-2细胞为基质核材细胞的免疫荧光法分别对PBC患者、自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)、乙型肝炎、丙型肝炎及戊型肝炎等患者进行了抗线粒体抗体检测，并初步探讨了抗线粒体抗体在肝病患者中的诊断价值，现将结果分析报告如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 41例PBC及51例非PBC患者均为江西医学院第二附属医院2000-07/2004-12门诊、住院确诊病例，均符合2000年美国肝病学会(AASLD)诊断建议[2]，其中51例非原发性胆汁性肝硬化分别为自身免疫性肝炎9例，乙型肝炎21例，丙型肝炎11例，戊型肝炎10例;男性49例，女性43例，年龄为21-58岁，平均年龄为39±10.8岁，对照组40名，均为健康献血员，男性20名，女性20名，年龄为23-52岁，平均年龄为37±8.3岁.
1.2 方法 抗线粒体抗体试剂采用欧蒙医学实验诊断有限公司产生的免疫荧光试剂，用间接免疫荧光法检测.检测方法为检查加样板，生物载片恢复至室温，稀释血清，设阴、阳性对照、质控对照，加25 mL稀释后血清，至加样板的每一反应区.再将生物薄片盖于加样板的凹槽里，室温孵育30 min，冲洗，加荧光素20 mL.室温孵育30 min，再冲洗，封片镜检.
, 百拇医药
统计学处理 数据分析均采用SPSS 11.5软件进行统计分析.
2 结果
2.1 PBC及非PBC患者检测AMA抗体结果为PBC阳性率最高为90.24%;HEV阳性率次之，为80.00%，HBV阳性率最低，为23.81%，对照组阳性结果则为7.5%(表1).
2.2 41例PBC与51例非PBC检测AMA检出率的比较，经c2检验差异有非常显著性意义(P<0.01)(表2).
表1 PBC及非PBC患者检测AMA抗体结果
, 百拇医药 疾病 | n | AMA抗体 | |
阳性(n) | 阳性率(%) | ||
PBC | 41 | 37c | 90.24 |
AIH | 9 | , 百拇医药 4a | 44.44 |
HBV | 21 | 5e | 23.81 |
HCV | 11 | 3g | 27.27 |
HEV | , 百拇医药 10 | 8c | 80.00 |
对照组 | 40 | 3 | 7.50 |
aP<0.05vs对照组;cP<0.05 vs对照组;eP<0.05vs HEV组;gP<0.05vs HEV组.
表2 PBC与非PBC检出率的比较
, 百拇医药 疾病 | n | AMA抗体 | |
阳性(n) | 阳性率(%) | ||
PBC | 41 | 37 | 90.24b |
非PBC | 51 | , http://www.100md.com 20 | 39.22 |
合计 | 92 | 57 | 61.96 |
bP<0.01vs非PBC.
3 讨论
线粒体存在于各种组织细胞，线粒体抗原位于线粒体的内膜和外膜.AMA作为一种自身抗体可进入细胞，并直接与线粒体抗原作用，导致组织细胞的免疫损伤[2].以目前研究表明，许多肝病如PBC、HCV、HEV等与自身免疫反应密切相关，但其发生机制仍未完全明了.Covini et al[3]认为病毒可能参与激活自身免疫性疾病及自身抗体的产生.目前为止，发现线粒体膜上存在9种自身抗原(M1-9)，与PBC关系最大的是M2.有人认为M2伴M4、M8阳性多见于PBC的严重类型，M2伴M9阳性多见于PBC轻型患者以及PBC患者的亲属;M4、M7、M8阳性与自身免疫性肝炎有关[4-8].
, 百拇医药
AMA是PBC的血清学标志，其中M2AMA对PBC有高度的敏感性和特异性.M2抗体的靶抗原是丙酮酸脱氢酶复合物E2成分、2-氧戊二酸脱氢酶复合体、支链2-氧酸脱氨酶复合体.PBC是一种可能与自身免疫有关的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病，主要发生于中年女性，病理学表现为非脓性肝内胆管慢性炎症阻塞和汇管区淋巴细胞浸润，从而导致胆汁淤积，发生肝纤维化及肝硬化.血清抗线粒体抗体诊断PBC的特异性比较高，为本病最突出的免疫学指标异常，也是最重要的诊断手段.笔者检测41例PBC结果阳性37例，阳性率达90.24%，与非PBC组比较差异有非常显著性意义(P<0.01)，与文献[9-10]报道基本一致.一般认为PBC是免疫调节紊乱引起的自身免疫性疾病，伴随细胞免疫功能低下，同时有体液免疫功能显著增强，血液中可检测到多种自身抗体[11-12]，特别是AMA对PBC具有重要的早期诊断价值.因此对于长期梗阻性黄疸的患者，尤其是女性患者，在排除肝外梗阻原因后，应及早进行AMA的检测，以便早期明确诊断，减少误诊误治.
, 百拇医药
自身免疫性肝炎多发于中青年女性，其基本病理改变为肝小叶周围区有碎屑坏死，亦可伴有桥样坏死，其间有明显的淋巴细胞和单核细胞浸润，但肝内小胆管无损伤的征象.肝细胞可呈水肿变性和气球样变.随着病情的进展，汇管区纤维组织增生，肝小叶扭曲，最终导致肝硬化.从病理组织学来看，自身免疫性肝炎与病毒性肝炎不易区别，但前者无病毒性肝炎的标记物.自身免疫性肝炎无特异性的临床表现，患者常有乏力、食欲减退、腹胀、肝区隐痛等症状，部分患者可有低热或黄疸，肝、脾可能增大[13-14].我们检测9例AIH患者其结果阳性4例，阳性率为44.44%，结果显示AMA抗体同AIH疾病是有一定的关系，但由于检测的例数太少，还有待进一步研究.
我们对肝病患者进行AMA抗体的检测，结果阳性率均高于对照组.有关HBV、HCV的结果提示，HBV患者也可以检出自身免疫抗体，HCV患者可以诱导产生自身免疫抗体的结论相符[15-16].而10例HEV患者中有8例阳性，阳性率为80%，提示自身免疫反应有可能参与了HEV的发病，或是与线粒体抗体具有共同抗原成分.总之，血清抗AMA抗体检测对诊断原发性胆汁性肝硬化有着重要的临床意义.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Neuberger J. Primary biliary cirrhosis. Lancet 1997;350:875-879
2 卢建溪, 邓练贤,李刚,姚春斓,姚集鲁. 肝病患者血清抗线粒体抗体的检测及临床意义.
中华肝脏病杂志 2002;10:220-221
3 Covini G, von Mhlen CA, Pacchetti S, Colombo M, Chan EK, Tan EM. Diversity of antinuclear antibody responses in
hepatocellular carcinorna. J Hepatol 1997;26:1255-1265
, 百拇医药
4 Joplin RE, Neuberger JM. Immunopathology of primary biliary cirrhosis. Eur J Gastroenterol Hepatol 1999;10:587-593
5 Nakajima M, Shimizu H, Miyazaki A, Watanabe S, Kitami N, Sato N. Detection of IgA, IgM, and IgG subclasses of
anti-M2 antibody by immunoblotting in autoimmune cholangitis:is autoimmune cholangitis and early stage of primary
biliary cirrhosis. J Gastroenterol 1999;34:607-612
, http://www.100md.com
6 Heathcote EJ. Management of primary biliary cirrhosis:the American Association for the study of liver diseases
practice guidelines. Hepatology 2000;31:1005-1013
7 Klein R, Huizenga JR, Gips CH, Berg PA. Antimitochondrial antibody profiles in patients with primary biliary cirrhosis
before orthotopic liver transplantation and titres of antimitochondrial antibody-subtypes after transplantation.
, 百拇医药
J Hepatol 1994;20:181-189
8 马东来, 张少静,文夫瑞德·斯特克.自身抗体及其免疫荧光模式.第一版. 北京:北京科学技术出版社,2000:58-60
9 娄永新. 自身抗体的检测与临床应用. 辽宁医学杂志 1995;9:169-171
10 Bassendine MF, Yeaman SJ. Serological markers in primary biliarycirrhosis:diagnosis, prognosis and subsets.
Hepatology 1992;15:545-548
11 黄春容. 原发性胆汁性肝硬化. 余保平,王伟岩.消化系疾病免疫学. 第1版. 北京:科学出版社, 2000:409
, 百拇医药
12 Czaja AJ, Carpenter HA, Santrach PJ, Moore SB. Autoimmunecholangitis within the spectrum of autoimmune
liver disease. Hepatology 2000;31:1231-1238
13 蒋明. 自身抗体测定对诊断自身免疫性肝病的临床意义. 中国实用内科杂志 2002;22:48-51
14 Leung PS, Coppel RL, Ansari A, Munoz S, Gershwin ME. Antimitochondrial antibodies in primary biliary cirrhosis.
Semin Liver Dis 1997;17:61-69
15 McMurray RW, Elbourne K. Hepatitis C virus infection and autoimmunity. Semin Arthritis Rheum 1997;26:689-701
16 Manns MP. Hepatotropic viruses and autoimmunity. J Viral Hepat 1997;4(Suppl 1):7-10
编辑 张海宁, http://www.100md.com( 谭立明,董 叶,吕娇凤, 刘 宁, 李 华, 秦和昌,叶如美)
