肾移植受者血中PBMCs的基因表达谱分析
肾移植,肾脏,移植,基因芯片,基因表达谱,1材料和方法,1.1材料,1.1.1试剂,1.1.2芯片,1.1.3主要仪器,1.2方法,1.2.1标本采集,1.2.2细胞分离,1.2.3总RNA,1.2.4探针制备,1.2.5杂交和结果分析,1.2.6生物信息学分析,2结果,2.1总RNA抽提结果,2.2芯片杂
【摘要】 目的 研究和探索与肾脏移植相关的差异表达基因。方法 选择肾移植患者30例。分术前当日和术后4周采新鲜外周血液10ml，血标本按术前(对照)和术后归类分组。用Ficoll技术，获取外周血单个核细胞。标本均置于液氮罐保存。采用一步法提取总RNA，同组RNA标本同量混合，用荧光染料Cy3-dUTP标记对照组总RNA，用Cy5-dUTP标记术后组总RNA。逆转录标记cDNA探针。采用高通量基因表达谱芯片(16，920点基因)进行芯片杂交，并用ScanArray4000扫描仪扫描芯片，得到Cy3/Cy5图像文件，通过划格确定杂交点范围，过滤背景噪声，提取基因表达的荧光信号强度值。ArrayPro Analyzer4.0分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值。结果 术后组和对照组存在差异表达的基因，其中重复2次差异表达的基因有433条(2.56%)。显示上调基因26条，其中已知基因11条，未知基因15条;下调基因407条，其中已知基因252条，未知基因155条。结论 运用高通量、大规模基因表达谱芯片分析和研究患者基因表达谱系，能够有效筛选有关移植免疫方面的相关基因。关键词 肾脏 移植 基因芯片 基因表达谱
Guo Yifeng，Zheng Junhua，Tan Jianming，et al.
Department of Urology，Changzheng Hospital，Second Military Medical University，Shanghai200003.
【Abstract】 Objective To explore and discover the relative genes with transplant immunity.Methods By virtue of gene microarray to analyze the differential expression of the genes in the PBMCs of the patients having acceptˉed renal transplantation.The30patients having accepted renal transplantation(4weeks after operation)were collectˉed fresh blood according to preoperation(as control group)and postoperation4weeks(as postoperation group).By Fiˉcoll method ......
您现在查看是摘要页，全文长 12499 字符。