趋化因子SDF-1β在大肠杆菌中的表达及其纯化
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郑红 ,Stephen C Peiper 朱锡华
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第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所；重庆400038；JamesGrahamBrownCancerCenter；UniversityofLouisville；KY；40202USA 郑红；StephenCPeiper；朱锡华
关键词：趋化因子；趋化因子受体；SDF1β；CXCR4；表达；纯化
摘要：目的 重组人SDF 1β在大肠杆菌中表达并获得纯化的有生物学活性的SDF 1β蛋白。方法 以pET32a(+) SDF 1为人SDF 1β克隆基因的表达载体,以大肠杆菌AD494(DE3)pLysS为表达菌,在IPTG诱导下表达出一个由230个氨基酸残基组成的硫氧还蛋白(thioredoxin) SDF 1β的融合蛋白(26×103)。经细菌裂解、金属离子螯合亲和层析、肠激酶消化以游离SDF 1β、阳离子交换层析和逆向高效液相层析等步骤纯化目的蛋白。以蛋白印迹、纯化产物的N端氨基酸测序及配体结合试验、微生理监测术鉴定纯化产物的生化性质及生物学活性。结果 在经诱导的发酵菌中融合蛋白占总菌体蛋白的10%～15%。从1L发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约400μg。蛋白印迹实验及N端氨基酸测序皆证实纯化终产物为SDF 1β(由71个氨基酸残基组成,7.8×103)。配体结合试验及Cytosensor表明,该产物能与CXCR4结合[Kd=(12.20±2.99)nmok L]并引起CXCR4表达细胞的信号传导。结论 采用本方法可获得高表达的,高纯度的具有与天然SDF 1β相似活性的重组人SDF 1β。
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