人重组TNF-α突变体471蛋白的初步纯化及生物学活性

http://www.100md.com 李瑶琛 孔令洪 王一理 尚宁宽 耿宜萍 司履生

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     李瑶琛；孔令洪；王一理；尚宁宽；耿宜萍；司履生 西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所 陕西西安710061 细胞与分子免疫学杂志 2003 4

    关键词：人突变体471 TNF-α；蛋白纯化；MTT比色法；生物学活性

    目的:在利用原核表达系统表达重组人突变体4 71TNF α蛋白的基础上,对该蛋白进行初步纯化及生物学活性检测。方法:利用最佳发酵和表达条件,诱导基因重组的人突变体4 71TNF α工程菌表达目的蛋白。收集菌体,经超声破碎,分离人突变体4 71TNF α的包涵体,并观察变性剂及蛋白浓度对蛋白折叠的影响。采用MTT比色法检测并比较人野生型及突变体4 71TNF α的生物学活性。结果:在适当的变性与复性条件下,已成功地将突变体4 71TNF α折叠并聚合形成具有生物学活性的三聚体。突变体4 71TNF α对L92 9的细胞毒活性高于野生型TNF α的15倍。结论:原核表达系统中表达.

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