免疫亲和层析法纯化重组人促红细胞生成素的实验研究

http://www.100md.com 邓瑞春 张明伟 白云秀 汪劲松 毛宁 章金刚 周勇

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     邓瑞春；张明伟；白云秀；汪劲松；毛宁；章金刚；周勇 军事医学科学院毒物药物研究所生化药理室；北京瑞得生物技术研究所；军事医学科学院野战输血研究所；北京中医药大学中西医结合研究所 北京100850 细胞与分子免疫学杂志 2002 4

    关键词：重组人红细胞生成素；单克隆抗体；免疫亲和层析；酶联免疫吸附试验

    目的 以免疫亲和层析方法纯化重组人促红细胞生成素 (rhEPO)。方法 以rhEPO作为抗原 ,免疫Balb/C小鼠 ,制备抗rhEPO单克隆抗体 (mAb)。以纯化的抗rhEPOmAb 2F12与预活化的Sepharose 4B偶联 ,制成抗体亲和层析柱 ,纯化rhEPO。结果 经筛选共获得 4株可分泌抗rhEPOmAb的杂交瘤细胞株 ,分别为 :1A8、2F12、3D4和 3F10。亲和层析纯化的rhEPO经SDS PAGE显示单一条带 ;2g凝胶制备的层析柱一次层析可获得 1.5mg高纯度的rhEPO。利用纯化的mAb建立的ELISA法 ,用于检测rhEPO的蛋白含量可达ng水平。结论 免疫亲和层析法纯化rhEPO的效率高、纯度好 ,用纯化的mAb...

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