二硫键稳定的抗肝癌人源化scFv-hTNFα突变体融合基因在大肠杆菌中表达

http://www.100md.com 孙志伟 俞炜源 孙岩 吴涛 林建波 刘彦仿

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     孙志伟；俞炜源；孙岩；吴涛；林建波；刘彦仿 北京生物工程研究所 北京100071；第四军医大学病理教研室 陕西西安710032 细胞与分子免疫学杂志 2002 3

    关键词：肝细胞肝癌；单链抗体；TNFα；突变体；靶向细胞因子；可溶性表达

    目的 提高抗肝癌抗体靶向人肿瘤坏死因子(hscFv2 5-hTNFα)的稳定性和杀伤活性 ,并探讨该新型靶向细胞因子在大肠杆菌中的可溶性表达。方法 以引物PCR法和重叠延伸PCR法 ,对人源化抗肝癌hscFv2 5及hTNFα基因进行定点突变 ,构建重组表达载体 pGEX -hFvT ,并以IPTG在大肠杆菌中诱导表达。用免疫组化染色和MTT比色法 ,分别检测重组蛋白的抗体和hTNFα突变体的双重活性。结果 重组基因在大肠杆菌中获得高效可溶性表达。表达产物具有抗体和hTNFα突变体的双重活性 ,重组蛋白的稳定性得到大幅度提高 ,抗体活性于 4℃放置 3个月活性无明显下降 ,抗肿瘤活性...

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