孕妇血浆NOET与妊娠高血压疾病关系的研究
【摘要】 目的 研究妊高征患者母儿血浆NO、ET及NO/ET的变化，探讨孕妇血浆NO/ET与妊娠高血压疾病的关系。方法 对50例妊娠高血压疾病患者(实验组)和30例正常晚孕妇女(对照组)，采用硝酸还原法和放射免疫法分别测定各研究对象静脉血及新生儿脐血中NO代谢产物NO 2- /NO 3- 和ET水平。结果 妊娠高血压疾病组母血NO、ET、NO/ET与其新生儿脐血中相应指标变化有一致性。病情越重，NO/ET值越低，妊娠高血压疾病组与对照组相比差异有显著性(P<0.05)，子痫前期组及子痫组显著低于妊娠高血压组(P<0.05，P<0.01)，子痫前期组与子痫组差异有显著性(P<0.05)。结论 母血NO/ET比值可准确反应妊娠高血压疾病病情程度。
Huang Hongling，Huang Bo，Zhou Li，et al.
Department of Obstetrics and Gynecology，Central Hospital of Nanhui District，Shanghai201300.
【Abstract】 Objective To study the relationship between plasma NO/ET level of maternal and HDCP(hypertenˉsive disorder complicating pregnancy)according to detect the plasma NO/ET level of maternal in patients with HDCP.Methods 50women with HDCP，30normal late trimester pregnant women(control group)and50patients with HDCP(trial group)were recruited.Maternal venous blood and umbilical venous blood were collected from all cases.The level of plasma NO -2 /NO -3 ，the stable metabolic end products of NO were measured with nitrate reeducate.The level of plasma ETwas measured with radio immunoassay.Results For HDCP patients，the changes of NO、ET and NO/ET levels in maˉternal plasma were consistent with their levels in umbilical plasma respectively.There is significant difference between the two groups，patients with pre-eclampsia and eclampsia decreased significantly when compared with gestational hypertenˉsion(P<0.05，P<0.01)，and there was a significant difference between the pre-eclampsia and eclampsia(P<0.05).Conclusion For the HDCP，the NO/ET level of maternal plasma decreased with the severity of the disease.
Key words HDCP NO ET NO/ET
妊娠高血压疾病(hypertensive disorder complicatˉing pregnancy，HDCP)是指育龄妇女在妊娠期间发生高血压、蛋白尿等一系列症状，是引起孕产妇及围生儿患病率和死亡率升高的重要原因，其发病率高达7%～10% [1] ，据统计，其中70%为妊娠高血压综合征(pregnancy-induced hypertension syndrome，PIH)，30%为慢性原发性高血压。我国在直接产科原因死亡的病例中，HDCP致死率占第2位。
近年来，血管内皮功能异常在妊高征发病中的作用越来越受广大学者关注，NO(nitric oxide一氧化氮)和ET(endothelin内皮素)是众所周知的内皮依赖性血管活性因子，它们的生物活性相互拮抗，在血压动态平衡的维持及调节组织局部血流方面发挥着重要作用 [2] 。NO是内皮衍生的舒张因子的主要成分，是目前所知体内作用最强的血管舒张因子，ET是日本学者Ylagrsawa等从猪主动脉内皮细胞培养液中分离、纯化的一种活性多肽，是迄今为止所知人体内作用最强、效应最持久的血管收缩因子。本研究比较母儿血浆NO、ET及NO/ET值的变化，探讨能从妊娠高血压疾病病因及母婴预后等多角度来全面反应妊娠高血压疾病病情程度的因子。
1 资料与方法
1.1 一般资料 随机选择2002年10月～2004年4月在上海南汇中心医院产科病房住院孕妇共80例，其中实验组50例，为妊娠高血压疾病患者，平均年龄(28.9±4.2)岁，按照高等院校教材《妇产科学》第六版的妊娠高血压疾病诊断和分类标准分为:妊娠期高血压13例，子痫前期轻度14例，子痫前期重度21例，子痫2例。正常晚孕妇女30例作为正常对照组，平均年龄(27.8±3.4)岁，两组既往均无其他妊娠并发症和合并症，均为单胎初产未临产且均以剖宫产手术结束分娩，剖宫产指征主要是社会因素、胎位异常、胎儿因素、骨盆因素及妊娠高血压疾病危及母儿安全，两组采血时均未服用影响钙镁代谢的药物。
1.2 标本制备 两组研究对象均于剖宫产术麻醉前或急诊入院时(妊娠高血压疾病患者未用药前)抽取肘静脉血5ml，其中3ml放于干净干燥试管中，室温下凝固后，2000r/min离心15min，取血清置-20℃冻存待测NO值，剩余2ml注入含10%EDTA二钠30μl和抑肽酶20μl的抗凝试管中，混均后在4℃下2000r/min离心10min，分离血浆后置-20℃冻存待测ET值。另外，在剖宫产术中新生儿娩出后立即取脐静脉血5ml，处理方法同上。
1.3 测定方法 NO、ET测定均严格按照试剂说明 操作。NO的测定:采用硝酸还原酶法;ET的测定:采用放射免疫分析法。
1.4 统计学方法 本研究中所有数据用均数±标准差(ˉx±s)表示，统计学处理应用SPSS for Windows12.0软件包进行。统计分析方法包括方差分析，t检验及直线相关分析。P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 两组母血与脐血中NO、ET比较 妊娠高血压疾病组母血、脐血中NO水平均显著低于对照组(P<0.01)，而ET水平则显著高于对照组(P<0.01)。不同程度妊娠高血压疾病随病情由轻到重，NO水平逐渐降低，ET水平逐渐增高。妊娠高血压与子痫前期、子痫期比较，差异有显著性(P<0.05)，子痫前期与子痫期比较，差异无显著性(P>0.05)。见表1。
表1 两组母血NO、ET水平比较 (略)
2.2 两组母血NO、ET水平与脐血中相应指标相关性分析 两组母血中NO、ET水平与脐血中相应指标进行直线相关分析表明，两组母血中NO、ET水平分别与各自脐血中NO、ET水平呈正相关(P<0.01)，对照组母血与脐血NO:r=0.481，ET:r=0.649;妊娠高血压疾病组母血与脐血NO:r=0.592，ET:r=0.471。
2.3 两组母血、脐血中NO/ET比值比较 妊娠高血压疾病组母血及脐血中NO/ET比值均显著低于对照组(P<0.01)，不同程度妊娠高血压疾病患者母血NO/ET比值比较，子痫前期和子痫期明显低于妊娠期高血压组(P<0.05，P<0.01)，子痫期NO/ET比值较子痫前期轻度组和重度组降低，差异有显著性(P<0.05);脐血中NO/ET比值比较结果与母血相似，见表2。
表2 两组母血及脐血中NO/ET比值比较 (略)
3 讨论
NO是一种脂溶性非肽类小分子物质，可由血管内皮、神经元及脑、肝、心、肾、胃肠道及血小板等多种组织和细胞产生，其生物学作用涉及机体的各个系统 [3] ，是体内作用最强的舒血管因子之一。正常妊娠时，NO主要来源于血管内皮细胞和胎盘中合体滋养细胞。ET是内皮衍生的收缩因子的主要成分，是迄今为止所知体内作用最强和效应最持久的血管收缩因子，由21个氨基酸残基组成。包括三种亚型(ET-1、ET-2、ET-3)，但内皮细胞只通过旁分泌作用产生一种ET-1，在体内成熟的ET-1能发挥最有效力的生物学作用。ET是介导其特异受体发挥作用的，目前为止共发现2种类型的ET受体A和B，A型受体主要表达在平滑肌细胞、心肌细胞和脑血管细胞，B型受体又可分为B 1 和B 2 两种亚型，B 1 主要表达在内皮细胞，与血管舒张剂的释放相耦联，B 2 主要表达在血管平滑肌细胞，与血管收缩机制相耦联。
NO和ET是一对作用相拮抗的血管活性物质。它们的生成相互影响、相互制约，这是维持二者在一定水平的基础。在正常妊娠期间，NO和ET保持平衡以调节血管的正常舒缩状态。ET可通过作用于血管内皮细胞上的ETB受体使NOS(NO合酶)活性增加，促进NO的合成分泌，从而拮抗ET的缩血管作用 [4] 。同时，增加的NO进而激活鸟苷酸环化酶。使第二信使cGMP(环磷酸鸟苷)增加，cGMP能够抑制ET-1mRNA的表达，使ET-1生成降低。孕妇体内ET与NO的这种协调释放维持了血管的舒缩平衡。本研究对两组的NO/ET比值进行比较并分析了NO与ET之间的相关性。结果显示:妊娠高血压疾病患者母儿血浆中NO/ET比值较正常孕妇显著降低(P<0.01)，且随患者病情加重，NO/ET比值渐 次降低，各期比较差异均在显著性。而单纯比较NO或ET的变化时，不论在母血还是新生儿脐血中，不同程度妊娠高血压疾病患者随病情由轻到重，NO水平逐渐降低，ET水平逐渐增高，但子痫前期与子痫期比较，差异无显著性(P>0.05)。这说明，NO/ET比值的下降与妊娠高血压疾病的发生发展关系更为密切，能够反映妊娠高血压疾病的严重程度。妊娠高血压疾病患者母血NO、ET含量均与脐血中相应的指标呈正相关，故提示我们在孕期可以通过测定母血NO、ET含量间接了解胎儿胎盘循环中NO、ET水平，从而了解胎儿的宫内生长情况。
此外，妊娠高血压疾病患者母血NO/ET比值与母儿预后相关分析发现，NO/ET比值与患者MAP之间呈负相关，与新生儿出生体重呈正相关。表明随着NO/ET比值降低，循环阻力增加，患者血压逐渐升高，病情加重，同时胎儿胎盘循环的阻力亦增加，脐血管收缩不利于氧和营养物质的输送，从而影响胎儿的生长发育，故新生儿的出生体重降低。
本研究结果提示，NO与ET之间的比例失衡与妊娠高血压疾病发生发展密切相关，NO/ET比值可反映病情的严重性，可供临床监测妊娠高血压疾病病情程度及间接了解胎儿宫内状况。在妊娠高血压疾病的临床治疗过程中如能有效的促进NO合成释放同时抑制ET的产生，提高NO/ET比值将给妊娠高血压疾病的防治开辟新的途径。
参考文献
1 Rodgers GM，Taylor RN，Roberts JM.Preeclampsia is associated with a serum farum factor cytotoxic to human endothelial cells.Am J Obstet Gyˉnecol，1988，159:908-914.
2 Ranta V，Viinikka L，Halmesmai E，et al.Nitric oxide production with preeclampsia Obstet Gynecol，1999，93:442-445.
3 Sanders KM，Ward SM.Nitric oxides as a mediator noradrenergic nonˉcholinergic neurotransmisson.Am J Physiol，1992，262:379-392.
4 Vural P.Nitric oxide/endothelin-1in pre-eclampsia.Clin Chim Acta，2002，317:65-70.
作者单位:1 201300上海市南汇区中心医院妇产科
2 430022湖北武汉华中科技大学附属协和医院妇产科
(收稿日期:2004-08-09) (编辑文 川), http://www.100md.com(黄红玲 黄波 邹丽 施正洪 胡春燕)
Huang Hongling，Huang Bo，Zhou Li，et al.
Department of Obstetrics and Gynecology，Central Hospital of Nanhui District，Shanghai201300.
【Abstract】 Objective To study the relationship between plasma NO/ET level of maternal and HDCP(hypertenˉsive disorder complicating pregnancy)according to detect the plasma NO/ET level of maternal in patients with HDCP.Methods 50women with HDCP，30normal late trimester pregnant women(control group)and50patients with HDCP(trial group)were recruited.Maternal venous blood and umbilical venous blood were collected from all cases.The level of plasma NO -2 /NO -3 ，the stable metabolic end products of NO were measured with nitrate reeducate.The level of plasma ETwas measured with radio immunoassay.Results For HDCP patients，the changes of NO、ET and NO/ET levels in maˉternal plasma were consistent with their levels in umbilical plasma respectively.There is significant difference between the two groups，patients with pre-eclampsia and eclampsia decreased significantly when compared with gestational hypertenˉsion(P<0.05，P<0.01)，and there was a significant difference between the pre-eclampsia and eclampsia(P<0.05).Conclusion For the HDCP，the NO/ET level of maternal plasma decreased with the severity of the disease.
Key words HDCP NO ET NO/ET
妊娠高血压疾病(hypertensive disorder complicatˉing pregnancy，HDCP)是指育龄妇女在妊娠期间发生高血压、蛋白尿等一系列症状，是引起孕产妇及围生儿患病率和死亡率升高的重要原因，其发病率高达7%～10% [1] ，据统计，其中70%为妊娠高血压综合征(pregnancy-induced hypertension syndrome，PIH)，30%为慢性原发性高血压。我国在直接产科原因死亡的病例中，HDCP致死率占第2位。
近年来，血管内皮功能异常在妊高征发病中的作用越来越受广大学者关注，NO(nitric oxide一氧化氮)和ET(endothelin内皮素)是众所周知的内皮依赖性血管活性因子，它们的生物活性相互拮抗，在血压动态平衡的维持及调节组织局部血流方面发挥着重要作用 [2] 。NO是内皮衍生的舒张因子的主要成分，是目前所知体内作用最强的血管舒张因子，ET是日本学者Ylagrsawa等从猪主动脉内皮细胞培养液中分离、纯化的一种活性多肽，是迄今为止所知人体内作用最强、效应最持久的血管收缩因子。本研究比较母儿血浆NO、ET及NO/ET值的变化，探讨能从妊娠高血压疾病病因及母婴预后等多角度来全面反应妊娠高血压疾病病情程度的因子。
1 资料与方法
1.1 一般资料 随机选择2002年10月～2004年4月在上海南汇中心医院产科病房住院孕妇共80例，其中实验组50例，为妊娠高血压疾病患者，平均年龄(28.9±4.2)岁，按照高等院校教材《妇产科学》第六版的妊娠高血压疾病诊断和分类标准分为:妊娠期高血压13例，子痫前期轻度14例，子痫前期重度21例，子痫2例。正常晚孕妇女30例作为正常对照组，平均年龄(27.8±3.4)岁，两组既往均无其他妊娠并发症和合并症，均为单胎初产未临产且均以剖宫产手术结束分娩，剖宫产指征主要是社会因素、胎位异常、胎儿因素、骨盆因素及妊娠高血压疾病危及母儿安全，两组采血时均未服用影响钙镁代谢的药物。
1.2 标本制备 两组研究对象均于剖宫产术麻醉前或急诊入院时(妊娠高血压疾病患者未用药前)抽取肘静脉血5ml，其中3ml放于干净干燥试管中，室温下凝固后，2000r/min离心15min，取血清置-20℃冻存待测NO值，剩余2ml注入含10%EDTA二钠30μl和抑肽酶20μl的抗凝试管中，混均后在4℃下2000r/min离心10min，分离血浆后置-20℃冻存待测ET值。另外，在剖宫产术中新生儿娩出后立即取脐静脉血5ml，处理方法同上。
1.3 测定方法 NO、ET测定均严格按照试剂说明 操作。NO的测定:采用硝酸还原酶法;ET的测定:采用放射免疫分析法。
1.4 统计学方法 本研究中所有数据用均数±标准差(ˉx±s)表示，统计学处理应用SPSS for Windows12.0软件包进行。统计分析方法包括方差分析，t检验及直线相关分析。P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 两组母血与脐血中NO、ET比较 妊娠高血压疾病组母血、脐血中NO水平均显著低于对照组(P<0.01)，而ET水平则显著高于对照组(P<0.01)。不同程度妊娠高血压疾病随病情由轻到重，NO水平逐渐降低，ET水平逐渐增高。妊娠高血压与子痫前期、子痫期比较，差异有显著性(P<0.05)，子痫前期与子痫期比较，差异无显著性(P>0.05)。见表1。
表1 两组母血NO、ET水平比较 (略)
2.2 两组母血NO、ET水平与脐血中相应指标相关性分析 两组母血中NO、ET水平与脐血中相应指标进行直线相关分析表明，两组母血中NO、ET水平分别与各自脐血中NO、ET水平呈正相关(P<0.01)，对照组母血与脐血NO:r=0.481，ET:r=0.649;妊娠高血压疾病组母血与脐血NO:r=0.592，ET:r=0.471。
2.3 两组母血、脐血中NO/ET比值比较 妊娠高血压疾病组母血及脐血中NO/ET比值均显著低于对照组(P<0.01)，不同程度妊娠高血压疾病患者母血NO/ET比值比较，子痫前期和子痫期明显低于妊娠期高血压组(P<0.05，P<0.01)，子痫期NO/ET比值较子痫前期轻度组和重度组降低，差异有显著性(P<0.05);脐血中NO/ET比值比较结果与母血相似，见表2。
表2 两组母血及脐血中NO/ET比值比较 (略)
3 讨论
NO是一种脂溶性非肽类小分子物质，可由血管内皮、神经元及脑、肝、心、肾、胃肠道及血小板等多种组织和细胞产生，其生物学作用涉及机体的各个系统 [3] ，是体内作用最强的舒血管因子之一。正常妊娠时，NO主要来源于血管内皮细胞和胎盘中合体滋养细胞。ET是内皮衍生的收缩因子的主要成分，是迄今为止所知体内作用最强和效应最持久的血管收缩因子，由21个氨基酸残基组成。包括三种亚型(ET-1、ET-2、ET-3)，但内皮细胞只通过旁分泌作用产生一种ET-1，在体内成熟的ET-1能发挥最有效力的生物学作用。ET是介导其特异受体发挥作用的，目前为止共发现2种类型的ET受体A和B，A型受体主要表达在平滑肌细胞、心肌细胞和脑血管细胞，B型受体又可分为B 1 和B 2 两种亚型，B 1 主要表达在内皮细胞，与血管舒张剂的释放相耦联，B 2 主要表达在血管平滑肌细胞，与血管收缩机制相耦联。
NO和ET是一对作用相拮抗的血管活性物质。它们的生成相互影响、相互制约，这是维持二者在一定水平的基础。在正常妊娠期间，NO和ET保持平衡以调节血管的正常舒缩状态。ET可通过作用于血管内皮细胞上的ETB受体使NOS(NO合酶)活性增加，促进NO的合成分泌，从而拮抗ET的缩血管作用 [4] 。同时，增加的NO进而激活鸟苷酸环化酶。使第二信使cGMP(环磷酸鸟苷)增加，cGMP能够抑制ET-1mRNA的表达，使ET-1生成降低。孕妇体内ET与NO的这种协调释放维持了血管的舒缩平衡。本研究对两组的NO/ET比值进行比较并分析了NO与ET之间的相关性。结果显示:妊娠高血压疾病患者母儿血浆中NO/ET比值较正常孕妇显著降低(P<0.01)，且随患者病情加重，NO/ET比值渐 次降低，各期比较差异均在显著性。而单纯比较NO或ET的变化时，不论在母血还是新生儿脐血中，不同程度妊娠高血压疾病患者随病情由轻到重，NO水平逐渐降低，ET水平逐渐增高，但子痫前期与子痫期比较，差异无显著性(P>0.05)。这说明，NO/ET比值的下降与妊娠高血压疾病的发生发展关系更为密切，能够反映妊娠高血压疾病的严重程度。妊娠高血压疾病患者母血NO、ET含量均与脐血中相应的指标呈正相关，故提示我们在孕期可以通过测定母血NO、ET含量间接了解胎儿胎盘循环中NO、ET水平，从而了解胎儿的宫内生长情况。
此外，妊娠高血压疾病患者母血NO/ET比值与母儿预后相关分析发现，NO/ET比值与患者MAP之间呈负相关，与新生儿出生体重呈正相关。表明随着NO/ET比值降低，循环阻力增加，患者血压逐渐升高，病情加重，同时胎儿胎盘循环的阻力亦增加，脐血管收缩不利于氧和营养物质的输送，从而影响胎儿的生长发育，故新生儿的出生体重降低。
本研究结果提示，NO与ET之间的比例失衡与妊娠高血压疾病发生发展密切相关，NO/ET比值可反映病情的严重性，可供临床监测妊娠高血压疾病病情程度及间接了解胎儿宫内状况。在妊娠高血压疾病的临床治疗过程中如能有效的促进NO合成释放同时抑制ET的产生，提高NO/ET比值将给妊娠高血压疾病的防治开辟新的途径。
参考文献
1 Rodgers GM，Taylor RN，Roberts JM.Preeclampsia is associated with a serum farum factor cytotoxic to human endothelial cells.Am J Obstet Gyˉnecol，1988，159:908-914.
2 Ranta V，Viinikka L，Halmesmai E，et al.Nitric oxide production with preeclampsia Obstet Gynecol，1999，93:442-445.
3 Sanders KM，Ward SM.Nitric oxides as a mediator noradrenergic nonˉcholinergic neurotransmisson.Am J Physiol，1992，262:379-392.
4 Vural P.Nitric oxide/endothelin-1in pre-eclampsia.Clin Chim Acta，2002，317:65-70.
作者单位:1 201300上海市南汇区中心医院妇产科
2 430022湖北武汉华中科技大学附属协和医院妇产科
(收稿日期:2004-08-09) (编辑文 川), http://www.100md.com(黄红玲 黄波 邹丽 施正洪 胡春燕)