重组质粒pVAX1-C3d-S2S的构建与序列分析及其在真核细胞中的初步表达
重组质粒,补体C3d,preS,2-,S基因,pVAX1,乙肝核酸疫苗
【摘要】 目的 针对我国乙肝病毒流行的血清型，采用美国FDA认可的应用于核酸疫苗的表达载体pVAX1，构建了重组真核表达质粒pVAX1-C3d-S 2 S，该质粒含有HBV基因组织的pre S 2 S片段及补体C3d的编码基因;并对其在真核细胞中的表达进行研究。以期预见补体C3d的佐剂作用，加快乙肝核酸疫苗的实用化进程。方法 采用PCR技术分别扩增了小鼠补体C3d基因(897bp)及HBV preS 2 S片段(约900bp)，并将其克隆至真核表达载体pVAX1上，经限制性核酸内切酶EcoRI的酶切分析及DNA测序分析证实。再将其短暂转染至SP2/0细胞，(1)抽提转染后SP2/0细胞的总RNA，再用RT-PCR法扩增其中的preS 2- S片段;(2)裂解SP2/0细胞，用ELISA方法检测HBsAg，以检测真核表达质粒pVAX1-C3d-S 2 S的蛋白表达基础。可进一步用于基因表达和基因治疗的研究。结果 DNA测序证实了所扩增片段分别为小鼠补体C3d基因和乙型肝炎病毒adw型preS 2- S基因。连接至真核表达载体pVAX1上后，DNA测序亦证实了pVAX1-C3d-S 2 S中C3d和S 2 S基因序列的准确性。将其短暂转染至SP2/0细胞后，用ELISA法可检测出S 2 S的表达产物HBˉsAg ......
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