表皮细胞悬液移植治疗白癜风
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许爱娥 尉晓冬 程东庆 周荷芬 钱国培
摘 要 目的 建立非培养的自体表皮细胞悬液移植治疗白癜风的方法。方法 治疗24例稳定期白癜风患者。将取自臀部的皮肤体外消化后制成自体非培养的表皮细胞悬液，注入于白斑上冷冻诱发出的水疱内。结果 23例患者移植后显示色素恢复，14例经1次移植后色素恢复达62%～93%；9例2次移植后色素恢复达85%～97%，除2例在色素出现1～3个月后又消退外，其余随访半年以上，色素保持良好。结论 非培养的自体表皮细胞悬液移植治疗稳定期的各型白癜风有令人满意的疗效，且简便省时，可作为治疗稳定期白癜风的一种方法。
关键词：白癜风；移植
1992年Gauthier等[1]报道用含角质形成细胞的非培养黑素细胞移植治疗白癜风，取得了满意 的疗效。我们从1998年开始用自体表皮细胞悬液移植治疗了24例稳定期白癜风患者，取 得了满意的疗效，现将结果报道如下。
, 百拇医药
资料和方法
一、病例
稳定期白癜风患者共24例，其中男9例，女15例；年龄9～40岁，平均年龄25岁；病程6个 月至12年，平均6.5年。24例中节段型13例，局限型8例，散发型3例；移植部位：面部11例 ，颈部11例，胸腰部4例，手臂部2例，背部2例。移植治疗白斑面积2.5cm2～10cm2。
二、方法
1.取材：用利多卡因常规局麻后，按移植治疗面 积的一定比例(最大达1∶10)，用刀片在臀部取薄层刃皮片1～13cm2(取皮后以出现点状出 血为度)，将所取皮片置于生理盐水中送实验室。
2.细胞悬液的制备：将所取皮片剪成3mm×3mm大小，用0.25%胰酶4℃消化12～14h，用眼 科镊子将表皮下残余物去掉，将表皮片移入离心管，加入m2培养液(Sigma公司)，用吸管 反复吹打成单细胞悬液，2000r/min离心5min，弃上清液，再用m2培养液将沉淀制备成细 胞悬液(主要含角质形成细胞和黑素细胞)，细胞浓度约为1×107/mL。以上操作均在无菌 条件下进行。
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3.移植：采用水疱内注入法，于移植前1d，用液氮以棉签法在白斑区等距离诱发水疱， 直径在0.5～1.5cm左右，水疱总面积为取材面积的2～10倍。次日先将水疱刺破，放出疱 液后，再用一次性1mL注射器将细胞悬液注入疱内，每个疱注入细胞量约为8×105，让患 者休息1h，以免所注射的细胞悬液漏出并有利于细胞的贴附。注意不要弄破注射部位的 疱壁，局 部和全身无需任何处理，嘱其1周、3周、以后每隔1个月复诊。
结果
移植处7d后疱壁干涸，出现淡红色斑，约3周至1个月左右，注射部位可见小的点状色素 沉着，1个月后逐渐融合并向外扩大，2～3个月后形成约0.5～1倍于水疱面积的色素斑， 部分相互融合。本组1次移植治疗面积最大达110cm2，随访3个月色素恢复面积最大达150 cm2左右。在移植的24例患者中，除1例失败外，其余23例移植后均有色素斑出现，移植 后色素恢复面积为起疱面积的1.1～1.5倍。14例经1次移植后色素恢复率(治疗后色素恢复 面积/白斑总面积)为62%～93%，9例白斑面积较大的经2次移植后色素恢复率达85%～ 97%，取得了令人满意的效果。23例有效的患者中除2例在色素斑出现后1～3个月又消退 外，其余随访半年色素保持良好，其中3例随访1.5年，未见色素减退或缩小。
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讨论
采用含角质形成细胞非培养的黑素细胞移植治疗白癜风，早在1992年Gauthier等报道成功 [1]，但治疗面积仅达50cm2。1998年Olsson等[2]报道治疗26例患者，色素恢复达100%，最大 治疗面积达204cm2。我们于1998年开始对24例患者进行治疗，23例获得成功，在移植2～ 3个月后，色素斑互相融合，可形成1～1.5倍于水疱面积的色素斑，1次移植最大面积达 110cm2，1次移植色素恢复面积最大达150cm2左右，1次移植后色素恢复率达62%～93%， 经2次移植后色素恢复率达85%～97%，疗效满意。表明自体表皮细胞悬液移植治疗对稳 定期白癜风有较好的疗效。
表皮细胞悬液法与黑素细胞纯培养移植相比，黑素细胞纯培养的细胞量较大，疗效好。 但其培养体系中需添加TPA，而TPA是一种细胞诱导剂，也是一种对黑素细胞最重要的选 择性促进剂。黑素细胞经含TPA的培养液培养后移植的安全性目前尚有争论。而国外所 采用的PC-1培养液中用bFGF和dbcAMP取代了TPA，该体系较安全，但该培养液价格昂贵 ，且无法购到。我们采用的自体表皮细胞悬液移植治疗无需添加特殊成分，安全性好， 移植面积较大。徐小珂等[3]报告黑素细胞纯培养移植面积最大为70cm2，而我们移植最大 面积达110cm2。对于大面积白斑，可经2、3次移植。
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我们在治疗中体会到，要取得较好的疗效，需注意：①取皮要以刃厚皮片为好，不可深 达真皮，否则会留有瘢痕；②液氮冷冻要掌握好时间和深浅度，过深、过浅均影响疗效 ；③制备细胞悬液时，应严格掌握好消化时间和温度，消化不好会影响疗效；④疱内注 入的细胞数要控制好，每个水疱注入的黑素细胞数以500/mm2左右为宜。⑤整个操作中要 注意无菌，以防止感染。
在本组病例中，有2例在移植后1～1.5个月内有色素斑出现，随访中分别在1个月和3个月 内色素又消退。此2例患者曾作过自体表皮片移植，移植后色素斑生长良好，随访中也 逐渐消退。移植失败的1例患者，自体表皮片移植时亦未见色素出现。色素斑的消退及 失败可能与白癜风患者正常皮肤中的黑素细胞和角质形成细胞自身缺陷有关。
自体表皮细胞悬液移植时采用的是细胞悬液水疱内注射法，因疱壁形成自然保护层，不 易感染；移植后休息1h，有利于细胞的贴附，整个过程在门诊即可完成。但该法也有疱 与疱之间会留有缝隙的不足，有待进一步改进。该方法的远期疗效尚需观察。
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作者单位：许爱娥(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
尉晓冬(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
程东庆(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
周荷芬(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
钱国培(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
参考文献
[1]Gauthier Y, Sruieve Bazeille JE. Autologous grafting with noncultured melanocytes: a simplified method for treatment of depigmented lesions. J Am Acad Dermatol, 1992,26:191- 194.
[2]Olsson MJ, Juhlin L. Leucoderma treated by transplantation of a basal cell layer enriched suspension. Br J Dermatol,1998,138:644- 648.
[3]徐小珂，何威，张春明，等.黑素细胞原代培养自体移植治疗节段型白癜风.临床皮肤科
杂志，1995，24：236-237., http://www.100md.com
摘 要 目的 建立非培养的自体表皮细胞悬液移植治疗白癜风的方法。方法 治疗24例稳定期白癜风患者。将取自臀部的皮肤体外消化后制成自体非培养的表皮细胞悬液，注入于白斑上冷冻诱发出的水疱内。结果 23例患者移植后显示色素恢复，14例经1次移植后色素恢复达62%～93%；9例2次移植后色素恢复达85%～97%，除2例在色素出现1～3个月后又消退外，其余随访半年以上，色素保持良好。结论 非培养的自体表皮细胞悬液移植治疗稳定期的各型白癜风有令人满意的疗效，且简便省时，可作为治疗稳定期白癜风的一种方法。
关键词：白癜风；移植
1992年Gauthier等[1]报道用含角质形成细胞的非培养黑素细胞移植治疗白癜风，取得了满意 的疗效。我们从1998年开始用自体表皮细胞悬液移植治疗了24例稳定期白癜风患者，取 得了满意的疗效，现将结果报道如下。
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资料和方法
一、病例
稳定期白癜风患者共24例，其中男9例，女15例；年龄9～40岁，平均年龄25岁；病程6个 月至12年，平均6.5年。24例中节段型13例，局限型8例，散发型3例；移植部位：面部11例 ，颈部11例，胸腰部4例，手臂部2例，背部2例。移植治疗白斑面积2.5cm2～10cm2。
二、方法
1.取材：用利多卡因常规局麻后，按移植治疗面 积的一定比例(最大达1∶10)，用刀片在臀部取薄层刃皮片1～13cm2(取皮后以出现点状出 血为度)，将所取皮片置于生理盐水中送实验室。
2.细胞悬液的制备：将所取皮片剪成3mm×3mm大小，用0.25%胰酶4℃消化12～14h，用眼 科镊子将表皮下残余物去掉，将表皮片移入离心管，加入m2培养液(Sigma公司)，用吸管 反复吹打成单细胞悬液，2000r/min离心5min，弃上清液，再用m2培养液将沉淀制备成细 胞悬液(主要含角质形成细胞和黑素细胞)，细胞浓度约为1×107/mL。以上操作均在无菌 条件下进行。
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3.移植：采用水疱内注入法，于移植前1d，用液氮以棉签法在白斑区等距离诱发水疱， 直径在0.5～1.5cm左右，水疱总面积为取材面积的2～10倍。次日先将水疱刺破，放出疱 液后，再用一次性1mL注射器将细胞悬液注入疱内，每个疱注入细胞量约为8×105，让患 者休息1h，以免所注射的细胞悬液漏出并有利于细胞的贴附。注意不要弄破注射部位的 疱壁，局 部和全身无需任何处理，嘱其1周、3周、以后每隔1个月复诊。
结果
移植处7d后疱壁干涸，出现淡红色斑，约3周至1个月左右，注射部位可见小的点状色素 沉着，1个月后逐渐融合并向外扩大，2～3个月后形成约0.5～1倍于水疱面积的色素斑， 部分相互融合。本组1次移植治疗面积最大达110cm2，随访3个月色素恢复面积最大达150 cm2左右。在移植的24例患者中，除1例失败外，其余23例移植后均有色素斑出现，移植 后色素恢复面积为起疱面积的1.1～1.5倍。14例经1次移植后色素恢复率(治疗后色素恢复 面积/白斑总面积)为62%～93%，9例白斑面积较大的经2次移植后色素恢复率达85%～ 97%，取得了令人满意的效果。23例有效的患者中除2例在色素斑出现后1～3个月又消退 外，其余随访半年色素保持良好，其中3例随访1.5年，未见色素减退或缩小。
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讨论
采用含角质形成细胞非培养的黑素细胞移植治疗白癜风，早在1992年Gauthier等报道成功 [1]，但治疗面积仅达50cm2。1998年Olsson等[2]报道治疗26例患者，色素恢复达100%，最大 治疗面积达204cm2。我们于1998年开始对24例患者进行治疗，23例获得成功，在移植2～ 3个月后，色素斑互相融合，可形成1～1.5倍于水疱面积的色素斑，1次移植最大面积达 110cm2，1次移植色素恢复面积最大达150cm2左右，1次移植后色素恢复率达62%～93%， 经2次移植后色素恢复率达85%～97%，疗效满意。表明自体表皮细胞悬液移植治疗对稳 定期白癜风有较好的疗效。
表皮细胞悬液法与黑素细胞纯培养移植相比，黑素细胞纯培养的细胞量较大，疗效好。 但其培养体系中需添加TPA，而TPA是一种细胞诱导剂，也是一种对黑素细胞最重要的选 择性促进剂。黑素细胞经含TPA的培养液培养后移植的安全性目前尚有争论。而国外所 采用的PC-1培养液中用bFGF和dbcAMP取代了TPA，该体系较安全，但该培养液价格昂贵 ，且无法购到。我们采用的自体表皮细胞悬液移植治疗无需添加特殊成分，安全性好， 移植面积较大。徐小珂等[3]报告黑素细胞纯培养移植面积最大为70cm2，而我们移植最大 面积达110cm2。对于大面积白斑，可经2、3次移植。
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我们在治疗中体会到，要取得较好的疗效，需注意：①取皮要以刃厚皮片为好，不可深 达真皮，否则会留有瘢痕；②液氮冷冻要掌握好时间和深浅度，过深、过浅均影响疗效 ；③制备细胞悬液时，应严格掌握好消化时间和温度，消化不好会影响疗效；④疱内注 入的细胞数要控制好，每个水疱注入的黑素细胞数以500/mm2左右为宜。⑤整个操作中要 注意无菌，以防止感染。
在本组病例中，有2例在移植后1～1.5个月内有色素斑出现，随访中分别在1个月和3个月 内色素又消退。此2例患者曾作过自体表皮片移植，移植后色素斑生长良好，随访中也 逐渐消退。移植失败的1例患者，自体表皮片移植时亦未见色素出现。色素斑的消退及 失败可能与白癜风患者正常皮肤中的黑素细胞和角质形成细胞自身缺陷有关。
自体表皮细胞悬液移植时采用的是细胞悬液水疱内注射法，因疱壁形成自然保护层，不 易感染；移植后休息1h，有利于细胞的贴附，整个过程在门诊即可完成。但该法也有疱 与疱之间会留有缝隙的不足，有待进一步改进。该方法的远期疗效尚需观察。
, 百拇医药
作者单位：许爱娥(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
尉晓冬(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
程东庆(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
周荷芬(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
钱国培(310009杭州市第三人民医院皮肤科)
参考文献
[1]Gauthier Y, Sruieve Bazeille JE. Autologous grafting with noncultured melanocytes: a simplified method for treatment of depigmented lesions. J Am Acad Dermatol, 1992,26:191- 194.
[2]Olsson MJ, Juhlin L. Leucoderma treated by transplantation of a basal cell layer enriched suspension. Br J Dermatol,1998,138:644- 648.
[3]徐小珂，何威，张春明，等.黑素细胞原代培养自体移植治疗节段型白癜风.临床皮肤科
杂志，1995，24：236-237., http://www.100md.com