中药抗肿瘤机制探讨(二)
http://www.100md.com
体外试验早已证实肿瘤坏死因于(TNF)可使肿瘤细胞坏死，但对正常细胞无此作用。经最近的研究发现，TNFα诱导的肿瘤细胞杀伤作用，也是通过其诱导细胞凋亡这一途径实现的。肿瘤细胞表面有一种名为Fas(也叫APO-1)的分子，分子量为48000，是TNF受体(TNFR)家族成员。Fas有三个跨细胞膜区与一个胞浆尾端(为死亡区)，这与TNFR(P55)同源。后者的死亡区与Fas的完全十样.Faas与效应细胞相结合迅速诱发靶细胞凋亡。同理，细胞表面的或可溶性的TNF 与TNFR(P55)结合后，发出死亡信号导致肿瘤靶细胞凋亡。
诱导细胞凋亡可能使某些化疗药抑制肿瘤的主要机理之一。如从中药莪术中提取的抗癌药物榄香烯，能阻止肿瘤细胞从S期进入G2期，并诱发其凋亡。榄香烯处理HL-60 细胞2h，即可发现清晰的DNA梯状带；处理HL-60细胞 24h。可观察到细胞调亡特征性形态学改变。其它如美洲商陆、柴胡苷等也具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。
有研究表明，茶中多酚类物质具有明显的抗肿瘤作用。其中4种儿茶素类化合物含量占茶多酚总量的85%～90%，其中表没食子儿茶素没食子酸酯(FGCG)是主要成分，约占 50%。EGCG的抗癌作用曾为很多试验研究所证实。赵燕等用EGCGO 55 ×10-3mol/L作用 HL-60细胞5h后，琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA条带，投射电镜观察到凋亡小体。中药雄黄的主要成分砷可促进急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡，使执凋亡基因PML-RAR和Bcl-2基因的表达下降，临床观察其缓解率高，且不引起骨髓抑制。现代研究已证明，中药乳香提取物(Boswc11ia cartrii Birdw extrac tive，BCBE)能诱导急性粒细胞白血病细胞株HI-60，急性单核细胞白血病细胞株 U937及急性粒细胞白血病原代细胞凋亡，并已用于临床治疗急性非淋巴细胞白血病，取得良好疗效。
, http://www.100md.com
新的研究热点
中药逆转MDR的研究 多药耐药性(multidrug resistance，MDR)是由一种药物诱发而同时对其它多种结构和作用机制完全不同的抗癌药物产生的交叉耐药。MDR是当今肿瘤化疗失败的主要原因之一。临床上许多肿瘤经历了最初有效的化疗后又再复发，多发癌化疗者效果差，其主要原因是肿瘤细胞对化疗的耐受性。肿瘤耐药原因很多，目前公认最主要是多药耐药基因的过度表达，克服此障碍，肿瘤化疗将取得决定性突破。目前认为解决MDR问题主要有两种方法；一是寻找对MDR细胞有效的抗肿瘤药物，二是通过增加细胞内药物浓度而逆转MDR。但多数逆转剂的毒副作用限制了他们的临床应用。在中药中筛选MDR逆转剂具有很大的优势。
钙通道阻滞剂维拉帕米(Verapami，VER)是经典的MDR逆转剂。潘启超等研究了11种具有钙通道拮抗作用的中药单体，发现对长春新碱(VCR)天然耐药的BEL-7402 细胞株大多数中药钙通道拮抗剂都有类似VER的体外细胞毒增效作用。尤以粉防已碱(tetrandrine，Tet)、蝙蝠葛碱、莲心碱、左旋四氢巴马汀和人参皂甙Rbl作用明显，其逆转倍数为8.6～13倍，而对耐阿霉素(adriamycin，ADR)人乳腺癌细胞MCF-7/ADR则只有Tet和蝙蝠葛碱的逆转作用明显优于VER，其它中药钙通道拮抗剂的作用不明显。无细胞毒性的Tet还有明显增强ADR对HL-60耐药细胞的生长抑制，但不增强ADR对HL-6O敏感细胞的毒性，荧光法测定结果表明Tet增加ADR在CH～DOX和HL-60耐药细胞内的积累。说用Tet本身无细胞毒性，但能通过耐药逆转而明显增加ADR对耐药细胞的生长抑制作用。王宝成等，发现榄香烯不但抑制BEL-7402细胞的生长，对其耐药株BEL-7402/DOX仍有较强的杀伤作用。同时经榄香烯乳剂的长期作同，未能诱导出BEL-7402细胞的mdrl mR NA及P-gp表达，说明已耐药的肿瘤细胞对榄香烯仍然敏感，且不易使肿瘤细胞产生耐药性，特别适用于对其它化疗药物产生耐药性的恶性肿瘤治疗。
, http://www.100md.com
中药抑制肿瘤血管形成的研究 现已证实，实体瘤的生长和转移与新生血管的形成(angiogenesis)有密切的关系。在缺乏新生血管的情况下肿瘤可长期处于1～ 2mm 的微小状态，一旦血管形成，由于能得到充分的营养供给肿瘤便迅速生长形成临床可见肿瘤(接近1cm3)，而且新生的血管为肿瘤细胞的脱落入血液循环进而向远处转移提供了有利条件。肿瘤的血管系统已成为一个崭新的有希望的抗肿瘤冶疗靶点。人门正致力于开发和研究能破坏或抑制血管生成，有效地阻止肿瘤的生长和转移的药物，这类药物称为TA 抑制剂，是当今新型抗肿瘤药物研究最活跃的领域之一。TA 抑制剂治疗肿瘤里有许多优势：①肿瘤发生时，血管形成已被启动，故具有良好的特异性；②血管内皮细胞暴露于血流中，药物能直接发挥作用，故剂量小、疗效高、不良反应小；③ 内皮细胞基因表达相对稳定，不易产生耐药性。目前已有20 余种TA抑制剂分别进入Ⅰ～Ⅲ期临床试验。
中药抑制肿瘤血管形成有一定的理论基础。①某些中药或其有效成分有诱生TNF、 IFN作用，如云芝多糖、香菇多糖、虫草多糖等均能诱生TNF：十全大补汤、小柴胡汤以及柴胡、当归、川穹、桂枝等也有良好的诱生TNF，提高TNF活性的能力；中药黄芪、当归、党参、芍药、猪苓多糖等皆可诱生IFN。TNF是抑制肿瘤生长的有效物质，其抗癌机理之一是能够抑制肿瘤血管形成。IFN能抑制体外血管内皮细胞的增殖和体内血管形成。因而抑制肿瘤生长。②大量的临床实践证实某些中药或复方有抑制肿瘤转移的作用，推测可能与其抗肿瘤血管形成机制有关。从中药中研究开发 7A抑制剂具有广阔的前景。
, http://www.100md.com
中药对肿瘤细胞膜的影响 有研究表明，抗癌中药巴豆的有效成分巴豆生物碱。可使红细胞膜的流动性减小，膜蛋白的二级结构发生改变，提示巴豆碱可能是通过改变蛋白质的空间构象而发生药理作用的。李宗锴、李电东等用牛膝多糖(Achyranthes bidentata Polysaccharides,ABPS)作用 S180细胞，对S180细胞膜成分的研究表明：ABPS与细胞接触24h引起细胞膜唾液酸含量由69.63±1.87μg/mg蛋白显著升高到76.31±5.81μ/mg蛋白，膜磷脂含量由291.31± 14.17nmol/mg蛋白显著降低至242.22±9.04nmol/mg蛋白，但对细胞膜胆固醇含量，膜流动性无影响。提示ABPS的抗肿瘤作用与其增强宿主免疫功能及改变细胞膜的生化特性有关。加强这方面的研究，对深入探讨中药抗肿瘤机制具有深刻意义。
中药对癌基因和抑癌基因表达的影响 肿瘤的发生发 展是多因素、多阶段的过程。各种癌基因和抑癌基因的异常累积是癌变的重要环节。已有试验证实，经无素剂量的丹参酮处理后，人宫颈癌细胞株Mel80中的癌基因(C-myc Ha ras)表达明显降低，推测其诱导分化的作用可能是通过对癌基因表达的抑制实现的。
, http://www.100md.com
施波等用导三尖杉酯碱(IHT)和高三尖杉酯碱(HHT)诱导HL-60细胞凋亡的试验中采用Northern hlot方法分析了其对凋亡相关的 bek-2和c-myc基因表达的影响。HL-60细胞经106mol/L 的IHT及 HHT处理 30min时bcl-2mRNA表达没有变化，此时HL-60细胞还没有出现明显的凋亡，提示bcl-2不是影响凋亡早期过程的因素。药物作用60min、90min时·HL-60 细胞的bcL-2的表达逐渐减少，显示bel-2表达减少与细胞凋亡的进程相平行。已知bel-2促进细胞存活,抑制细胞凋亡, 是阻断细胞凋亡的最后共同通路的关键蛋白。bcl-2是细胞凋亡研究中最受重视的癌基因，IHT和HHT诱导细胞bel-2 mRNA表达是药物促进HL-60细胞凋亡的重要分子机制之一。IHT和HHT均诱导c-myc的表达,细胞表达c-myc mRNA在药物作用30min时即有明显的增加,提示c-myc可能参与细胞凋亡的早期生化过程。c-myc在药物作用 60min、 90min后的: HL-60细胞中仍保持高水平的表达。原癌基因c-myc与细胞的增值与分比关系密切，增殖旺盛的细胞c-myc表达水平升高，而静止细胞c-myc表达水平较低。c- myc的表达同时又可以诱导细胞凋亡。c-myc的表这可能是 IHT和HHT诱导HL-60细胞凋亡的又一因素。
, 百拇医药
问题与展望
肿瘤的发生是多因素、多阶段的过程。中药抗肿瘤也必然是多环节、多起点作用的结果。“中药基因组学(TCM Genomics)”和“中药化学组掌(TCM Chemics)”的提出为中药的现代化研究提供了思路和方向。”目前存在的问题有以下几点：①缺乏多学科交叉和融合； ②采用的技术手段落后；③缺乏即精通中药又对现代生命科学、化学及生物高技术有较深刻了解的复合型人才；④对中药基础理论研究不够，尤其是对中药现代化研究缺乏宏观的、发展的战略考虑。
用“中药基因组学”及“中药化学组学”的研究策略深入地剖析抗肿瘤中药对于其作用机理、物质基础、中药复方配伍规律及抗肿瘤新药的研究和开发具有非常重要的指导意义。对于让全世界更多的人了解理论的实质，促进中药走问世界，贡献全人类，弘扬中华民族灿烂的中医药文化具有重要的历史和现实意义。, http://www.100md.com
诱导细胞凋亡可能使某些化疗药抑制肿瘤的主要机理之一。如从中药莪术中提取的抗癌药物榄香烯，能阻止肿瘤细胞从S期进入G2期，并诱发其凋亡。榄香烯处理HL-60 细胞2h，即可发现清晰的DNA梯状带；处理HL-60细胞 24h。可观察到细胞调亡特征性形态学改变。其它如美洲商陆、柴胡苷等也具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。
有研究表明，茶中多酚类物质具有明显的抗肿瘤作用。其中4种儿茶素类化合物含量占茶多酚总量的85%～90%，其中表没食子儿茶素没食子酸酯(FGCG)是主要成分，约占 50%。EGCG的抗癌作用曾为很多试验研究所证实。赵燕等用EGCGO 55 ×10-3mol/L作用 HL-60细胞5h后，琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA条带，投射电镜观察到凋亡小体。中药雄黄的主要成分砷可促进急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡，使执凋亡基因PML-RAR和Bcl-2基因的表达下降，临床观察其缓解率高，且不引起骨髓抑制。现代研究已证明，中药乳香提取物(Boswc11ia cartrii Birdw extrac tive，BCBE)能诱导急性粒细胞白血病细胞株HI-60，急性单核细胞白血病细胞株 U937及急性粒细胞白血病原代细胞凋亡，并已用于临床治疗急性非淋巴细胞白血病，取得良好疗效。
, http://www.100md.com
新的研究热点
中药逆转MDR的研究 多药耐药性(multidrug resistance，MDR)是由一种药物诱发而同时对其它多种结构和作用机制完全不同的抗癌药物产生的交叉耐药。MDR是当今肿瘤化疗失败的主要原因之一。临床上许多肿瘤经历了最初有效的化疗后又再复发，多发癌化疗者效果差，其主要原因是肿瘤细胞对化疗的耐受性。肿瘤耐药原因很多，目前公认最主要是多药耐药基因的过度表达，克服此障碍，肿瘤化疗将取得决定性突破。目前认为解决MDR问题主要有两种方法；一是寻找对MDR细胞有效的抗肿瘤药物，二是通过增加细胞内药物浓度而逆转MDR。但多数逆转剂的毒副作用限制了他们的临床应用。在中药中筛选MDR逆转剂具有很大的优势。
钙通道阻滞剂维拉帕米(Verapami，VER)是经典的MDR逆转剂。潘启超等研究了11种具有钙通道拮抗作用的中药单体，发现对长春新碱(VCR)天然耐药的BEL-7402 细胞株大多数中药钙通道拮抗剂都有类似VER的体外细胞毒增效作用。尤以粉防已碱(tetrandrine，Tet)、蝙蝠葛碱、莲心碱、左旋四氢巴马汀和人参皂甙Rbl作用明显，其逆转倍数为8.6～13倍，而对耐阿霉素(adriamycin，ADR)人乳腺癌细胞MCF-7/ADR则只有Tet和蝙蝠葛碱的逆转作用明显优于VER，其它中药钙通道拮抗剂的作用不明显。无细胞毒性的Tet还有明显增强ADR对HL-60耐药细胞的生长抑制，但不增强ADR对HL-6O敏感细胞的毒性，荧光法测定结果表明Tet增加ADR在CH～DOX和HL-60耐药细胞内的积累。说用Tet本身无细胞毒性，但能通过耐药逆转而明显增加ADR对耐药细胞的生长抑制作用。王宝成等，发现榄香烯不但抑制BEL-7402细胞的生长，对其耐药株BEL-7402/DOX仍有较强的杀伤作用。同时经榄香烯乳剂的长期作同，未能诱导出BEL-7402细胞的mdrl mR NA及P-gp表达，说明已耐药的肿瘤细胞对榄香烯仍然敏感，且不易使肿瘤细胞产生耐药性，特别适用于对其它化疗药物产生耐药性的恶性肿瘤治疗。
, http://www.100md.com
中药抑制肿瘤血管形成的研究 现已证实，实体瘤的生长和转移与新生血管的形成(angiogenesis)有密切的关系。在缺乏新生血管的情况下肿瘤可长期处于1～ 2mm 的微小状态，一旦血管形成，由于能得到充分的营养供给肿瘤便迅速生长形成临床可见肿瘤(接近1cm3)，而且新生的血管为肿瘤细胞的脱落入血液循环进而向远处转移提供了有利条件。肿瘤的血管系统已成为一个崭新的有希望的抗肿瘤冶疗靶点。人门正致力于开发和研究能破坏或抑制血管生成，有效地阻止肿瘤的生长和转移的药物，这类药物称为TA 抑制剂，是当今新型抗肿瘤药物研究最活跃的领域之一。TA 抑制剂治疗肿瘤里有许多优势：①肿瘤发生时，血管形成已被启动，故具有良好的特异性；②血管内皮细胞暴露于血流中，药物能直接发挥作用，故剂量小、疗效高、不良反应小；③ 内皮细胞基因表达相对稳定，不易产生耐药性。目前已有20 余种TA抑制剂分别进入Ⅰ～Ⅲ期临床试验。
中药抑制肿瘤血管形成有一定的理论基础。①某些中药或其有效成分有诱生TNF、 IFN作用，如云芝多糖、香菇多糖、虫草多糖等均能诱生TNF：十全大补汤、小柴胡汤以及柴胡、当归、川穹、桂枝等也有良好的诱生TNF，提高TNF活性的能力；中药黄芪、当归、党参、芍药、猪苓多糖等皆可诱生IFN。TNF是抑制肿瘤生长的有效物质，其抗癌机理之一是能够抑制肿瘤血管形成。IFN能抑制体外血管内皮细胞的增殖和体内血管形成。因而抑制肿瘤生长。②大量的临床实践证实某些中药或复方有抑制肿瘤转移的作用，推测可能与其抗肿瘤血管形成机制有关。从中药中研究开发 7A抑制剂具有广阔的前景。
, http://www.100md.com
中药对肿瘤细胞膜的影响 有研究表明，抗癌中药巴豆的有效成分巴豆生物碱。可使红细胞膜的流动性减小，膜蛋白的二级结构发生改变，提示巴豆碱可能是通过改变蛋白质的空间构象而发生药理作用的。李宗锴、李电东等用牛膝多糖(Achyranthes bidentata Polysaccharides,ABPS)作用 S180细胞，对S180细胞膜成分的研究表明：ABPS与细胞接触24h引起细胞膜唾液酸含量由69.63±1.87μg/mg蛋白显著升高到76.31±5.81μ/mg蛋白，膜磷脂含量由291.31± 14.17nmol/mg蛋白显著降低至242.22±9.04nmol/mg蛋白，但对细胞膜胆固醇含量，膜流动性无影响。提示ABPS的抗肿瘤作用与其增强宿主免疫功能及改变细胞膜的生化特性有关。加强这方面的研究，对深入探讨中药抗肿瘤机制具有深刻意义。
中药对癌基因和抑癌基因表达的影响 肿瘤的发生发 展是多因素、多阶段的过程。各种癌基因和抑癌基因的异常累积是癌变的重要环节。已有试验证实，经无素剂量的丹参酮处理后，人宫颈癌细胞株Mel80中的癌基因(C-myc Ha ras)表达明显降低，推测其诱导分化的作用可能是通过对癌基因表达的抑制实现的。
, http://www.100md.com
施波等用导三尖杉酯碱(IHT)和高三尖杉酯碱(HHT)诱导HL-60细胞凋亡的试验中采用Northern hlot方法分析了其对凋亡相关的 bek-2和c-myc基因表达的影响。HL-60细胞经106mol/L 的IHT及 HHT处理 30min时bcl-2mRNA表达没有变化，此时HL-60细胞还没有出现明显的凋亡，提示bcl-2不是影响凋亡早期过程的因素。药物作用60min、90min时·HL-60 细胞的bcL-2的表达逐渐减少，显示bel-2表达减少与细胞凋亡的进程相平行。已知bel-2促进细胞存活,抑制细胞凋亡, 是阻断细胞凋亡的最后共同通路的关键蛋白。bcl-2是细胞凋亡研究中最受重视的癌基因，IHT和HHT诱导细胞bel-2 mRNA表达是药物促进HL-60细胞凋亡的重要分子机制之一。IHT和HHT均诱导c-myc的表达,细胞表达c-myc mRNA在药物作用30min时即有明显的增加,提示c-myc可能参与细胞凋亡的早期生化过程。c-myc在药物作用 60min、 90min后的: HL-60细胞中仍保持高水平的表达。原癌基因c-myc与细胞的增值与分比关系密切，增殖旺盛的细胞c-myc表达水平升高，而静止细胞c-myc表达水平较低。c- myc的表达同时又可以诱导细胞凋亡。c-myc的表这可能是 IHT和HHT诱导HL-60细胞凋亡的又一因素。
, 百拇医药
问题与展望
肿瘤的发生是多因素、多阶段的过程。中药抗肿瘤也必然是多环节、多起点作用的结果。“中药基因组学(TCM Genomics)”和“中药化学组掌(TCM Chemics)”的提出为中药的现代化研究提供了思路和方向。”目前存在的问题有以下几点：①缺乏多学科交叉和融合； ②采用的技术手段落后；③缺乏即精通中药又对现代生命科学、化学及生物高技术有较深刻了解的复合型人才；④对中药基础理论研究不够，尤其是对中药现代化研究缺乏宏观的、发展的战略考虑。
用“中药基因组学”及“中药化学组学”的研究策略深入地剖析抗肿瘤中药对于其作用机理、物质基础、中药复方配伍规律及抗肿瘤新药的研究和开发具有非常重要的指导意义。对于让全世界更多的人了解理论的实质，促进中药走问世界，贡献全人类，弘扬中华民族灿烂的中医药文化具有重要的历史和现实意义。, http://www.100md.com