小鼠IL-18 cDNA克隆及在H₂₂ 肝癌细胞中的初步表达

http://www.100md.com 周虎；陆 梁；裴冬生；赵惠仁

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     周虎；陆 梁；裴冬生；赵惠仁 徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心 江苏 徐州221002 免疫学杂志 2002 3

    关键词：白细胞介素-18；逆转录病毒载体；克隆

    目的 构建小鼠白细胞介素-18(mIL-18)逆转录病毒载体,实现mIL-18在小鼠H22肝癌细胞中表达。方法 用RT-PCR方法从小鼠肝脏细胞中扩增出mIL-18 cDNA,克隆到载体pBluscript中,测序后亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中。pLNCX/mIL-18重组子用脂质体介导的方法转染PA317包装细胞,用400μmL G418进行筛选。挑取筛选得到的阳性克隆扩大培养,取上清感染NIH3T3细胞和H22肝癌细胞。用感染后的H22细胞上清诱导小鼠脾细胞IFN-r生成能力来检测H22细胞分泌mIL-18的情况。结果 用NH3T3细胞测得病毒滴度为1.5×105克隆形成单位CFU/mL,转染后的H22肝癌细胞上清对小鼠脾细...

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