抗CEA嵌合小分子抗体的构建与表达

http://www.100md.com 赵泽国；冉宇靓；孔健；孙立新；遇垅；刘军；杨治华

癌胚抗原|小分子抗体|抗体工程,关键词：

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     赵泽国；冉宇靓；孔健；孙立新；遇垅；刘军；杨治华 中国医学科学院；中国协和医科大学肿瘤研究所细胞生物及分子生物学室；北京100021 免疫学杂志 2001 3

    关键词：癌胚抗原；小分子抗体；抗体工程

    目的构建表达抗CEA小分子抗体,以利于放射免疫诊断及导向治疗。方法构建CEA单链抗体基因,克隆入载体pKpL-3a,在大肠杆菌中包涵体表达,ELISA检测活性。将轻重链基因克隆入分泌型表达载体pSCMH,在大肠杆菌中表达,ELISA检测活性。将CEA嵌合抗体的轻链和Fd基因克隆入杆状病毒表达载体pAcUW51中,在sf9细胞中分泌表达,ELISA检测活性及测定产量,竞争抑制ELISA测定其识别的抗原表位。结果多种方法复性的包涵体及原核分泌表达的单链抗体未测到活性。昆虫细胞中表达的小分子抗体具抗体活性,产量为1.7μg/mL,竞争抑制实验显示其与亲本鼠单抗C50识别相同的表位。结论该CEA抗体基因在大肠杆菌中不能表达出有功能的分子,而在昆虫细胞中表达了具活性抗体分子;某些抗体基因只有在真核细胞中才能表达出有功能的抗体分子。

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