乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母系统的分泌表达

http://www.100md.com 徐丽宏；梁国栋；付士红；宋宏；王大维；苏乃伦；夏国良；张智清

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    参见附件(85kb)。

     徐丽宏；梁国栋；付士红；宋宏；王大维；苏乃伦；夏国良；张智清 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室 病毒学报 2003 3

    关键词：乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因；Adw2亚型；PichiaPastoris酵母表达系统；分泌型表达

    拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在PichiaPastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达。实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G418筛选多拷贝整合克隆,经甲醇诱导表达并用SDS-PAGE电泳及酶免疫法检测表达产物。经100个克隆筛选获得了表达量较高的表达菌株WC4。该菌株甲醇诱导后细胞上清10倍浓缩SDS-PAGE电泳检测显示,细胞上清中有特异蛋白条带,且第6天表达量最高,表达产物单体分子量为31kD左右。用美国雅培公司AUZYMEMONOCLONAL试剂盒估算表达量为...

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