人源性大肠癌cDNA噬菌体表达文库的构建及鉴定

http://www.100md.com 刘宇虎；张振书；肖冰；钟东；武金宝；王亚东；赖卓胜；张亚历

人源性大肠癌|噬菌体|cDNA文库,关键词：

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     刘宇虎；张振书；肖冰；钟东；武金宝；王亚东；赖卓胜；张亚历 第一军医大学南方医院全军消化内科研究所 510515广州 中华消化杂志 2003 10

    关键词：人源性大肠癌；噬菌体；cDNA文库

    目的 构建人源性大肠癌cDNA噬菌体表达文库。方法 从人大肠癌组织中提取总RNA ,RT PCR反转录合成cDNA第1链,用长距离PCR技术合成cDNA第2链,除去小于5 0 0bp的小片段后与λTriplEx2噬菌体连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库。转染E .coliXL1 Blue大肠杆菌,滴定文库的滴度,确定文库容量大小,测定重组率。用EXTagTM酶做PCR和SfiⅠ酶切鉴定插入的cDNA片段大小。结果 构建成含2 .39×10 6pfu/ml重组子的人大肠癌cDNA噬菌体表达文库,重组率为97.5 %。插入的外源cDNA片段大小为5 0 0bp～4kb ,平均长约1.4kb。结论 成功构建高质量人源性大肠癌cDNA噬菌...

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