酶消化热裂解法处理血清样本进行RT-PCR检测的研究
核糖核酸|逆转录-聚合酶链反应|方法学,关键词：,Digestedthermaldenaturalizationmethodfortranscriptase-polymerasechainreactionofserumspecimen,1材料与方法,1.1材料,1.2方法,2结果,2.1直接热变性上清液的pH值检测及对RT-PCR系
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关键词：核糖核酸；逆转录-聚合酶链反应；方法学
摘要： 目的 探讨相对简便和不易污染的直接热变性处理血清样本进行RT-PCR检测的敏感性和重复性不理想的原因，并对其进行改良。方法 对比分析直接热变性上清液中的pH值和蛋白抑制因子对RT-PCR体系的pH值和PCR扩增效果的影响。评价改良方法的性能。结果 10份正常血清直接热变性上清的pH值平均为8.96±1.34。与RT-PCRⅠ液和改良RT-PCR Ⅰ液混合后的pH值分别为8.55±0.53和8.32±0.07。直接热变性上清液对PCR的抑制作用达100～1000倍。这种抑制作用可被加入300 μg/mL蛋白酶K消化而完全消除。消化热变性法的敏感性和重复性与传统的抽提法接近，且不易污染。结论 pH值波动和蛋白性抑制因子的存在是直接热变性法重复性和敏感性差的重要原因。消化热变性法不仅敏感性高，重复性能与抽提法相媲美，而且简便性和防污染能力更为优越。
Digested thermal denaturalization method fortranscriptase-polymerase chain reaction of serum specimen
Gu Lin, Peng Xiaomou, Deng Lianxian, et al.
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