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关键词：克栓颗粒；药理学；血小板聚集；药物作用；血栓形成；药物作用
摘要： 观察了克栓颗粒对家兔血小板聚集及小鼠血栓形成的影响。结果表明，克栓颗粒明显降低花生四烯酸(AA)及胶原诱导的家兔血小板聚集率(P<0.05～0.01)，对二磷酸腺苷(ADP)诱导的家兔血小板聚集率也有一定的降低作用；明显延长大鼠体内血栓形成时间(P<0.01)；明显抑制大鼠体外血栓的形成，其主要表现为使血栓长度明显缩短(P<0.01)，血栓湿重和干重明显减轻(P<0.05)；此外，还具有溶解血栓的作用，其主要表现为使血栓占血管腔面积的百分比明显减少(P<0.001)。提示克栓颗粒具有抑制血小板聚集及血栓形成的作用，这为解释该药的临床疗效机制提供了实验依据。
分类号：R285.5
文献标识码：A
克栓颗粒系由桃仁、红花、水蛭、黄芪等中药组成 ，具有活血化瘀、益气补血、消栓通络、行气通脉等功效，主治脑卒中、血栓闭塞性脉管炎、血栓性静脉炎等症。本文观察该药对家兔血小板聚集及大鼠血栓形成的影响，旨在探讨该药疗效的有关机制。
1 实验材料
1.1 药物 克栓颗粒，实验用药为该药提取清膏，4.0 g生药/mL，由北京海尔富药业有限公司提供；华佗再造丸，广州奇星药厂生产，批号 9405236801；脉管炎片，0.3 g/片，天津同仁堂制药厂生产，批号 921055；二磷酸腺苷(ADP)二钠盐，中国科学院上海生物化学研究所生产，批号 9209258；花生四烯酸(AA)，Fluka AG 产品；胶原(100 μg/mL)：由中国中医研究院基础研究所药理室提供。
1.2 动物 健康雄性日本大耳白兔，体重2.0～3.0 kg，由军事医学科学院实验动物中心提供；健康雄性 Wistar 大鼠，体重 250～300 g，由中国医学科学院实验动物中心提供。
1.3 仪器 BS634 型血小板聚集仪，北京生化仪器厂产品；BT87-2 型体内血栓形成测定仪，包头医学院心血管研究室产品；SDZ-A 型体外血栓形成仪，江苏无锡县电子仪器二厂产品。
2 方法与结果
2.1 对家兔血小板聚集的影响
实验前穿刺家兔心脏取血测定血小板聚集率，根据血小板聚集率水平和体重将 24 只家兔随机分为 4 组(每组 6 只)：对照组(等体积蒸馏水，3.0 mL/kg)，克栓颗粒 10 g 生药/kg 剂量组，克栓颗粒 5 g 生药/kg 剂量组，华佗再造丸组(1.5 g 丸/kg)。对照组灌胃等体积蒸馏水，其余 3 个给药组按所述剂量灌胃给药，每日 1 次，连续给药 7 d，未次给药后 1 h，穿刺心脏取血，测定血小板聚集率。血小板聚集率测定采用 Born 氏比浊法[1，2] ，所用诱导剂的终浓度为：ADP(47.6 μmol/L)、AA(782.0 μmol/L)、胶原(4.8 mg/L)。
结果(见表1)显示，当 ADP 诱导聚集时，给药前各组间血小板聚集率无明显差异，给药后克栓颗粒 10 g 生药/kg 组的血小板聚集率与对照组比较有下降趋势，克栓颗粒 5 g 生药/kg 组及华佗再造丸组的血小板聚集率与对照组比较无明显差异；当 AA 诱导聚集时，给药前各组间血小板聚集率无明显差异，给药后克栓颗粒 10 g 生药/kg 组及华佗再造丸组的血小板聚集率均明显低于对照组(P<0.05)，克栓颗粒 5 g 生药/kg 组的血小板聚集率与对照组比较有下降趋势；当胶原诱导聚集时，给药前各组间血小板聚集率无明显差异，给药后克栓颗粒两个剂量组的血小板聚集率均明显低于对照组(P<0.05～0.01)，华陀再造丸组的血小板聚集率与对照组比较有下降趋势。
表1 克栓颗粒对家兔血小板聚集率的影响
| 诱导剂 | 组别 | 剂量/(g。 kg-1 ) | 兔数 | 聚集率/(±s)% | ||
| 给药前 | 给药后 | 差值 | ||||
| ADP | 对照组 | 6 | 71.58±11.05 | 69.15±7.92 | -2.43±17.20 | |
| 克栓颗粒组 | 10 | 6 | 71.01±5.08 | 61.35±8.03 | -9.66±9.81 | |
| 5 | 6 | 63.09±14.88 | 62.82±12.22 | -0.27±4.37 | ||
| 华陀再造丸 | 1.5 | 6 | 68.91±10.75 | 68.60±6.84 | -0.31±12.61 | |
| AA | 对照组 | 6 | 67.07±17.42 | 72.54±10.50 | 5.47±15.22 | |
| 克栓颗粒组 | 10 | 6 | 71.28±6.34 | 55.25±9.81 | -16.0±13.58* | |
| 5 | 6 | 66.44±10.48 | 65.45±8.30 | -1.00±10.42 | ||
| 华佗再造丸 | 1.5 | 6 | 69.27±6.62 | 57.05±9.46 | -11.42±8.18* | |
| 胶原 | 对照组 | 6 | 72.44±15.53 | 73.55±5.39 | 1.10±15.63 | |
| 克栓颗粒组 | 10 | 6 | 76.04±10.01 | 41.70±17.44 | -34.35±21.92** | |
| 5 | 6 | 80.80±16.02 | 62.86±9.02 | -17.94±13.08* | ||
| 华佗再造丸 | 1.5 | 6 | 80.63±9.96 | 64.15±11.04 | -16.48±15.36 | |
2.2 对大鼠体内血栓形成的影响
将 40 只 Wistar 大鼠随机分为 4 组(每组 10 只)：对照组(等体积蒸馏水，10 mL/kg)，克栓颗粒 20 g 生药/kg 剂量组，克栓颗粒 10 g 生药/kg 剂量组，华佗再造丸组(2.5g丸/kg)。对照组灌胃等体积蒸馏水，其余 3 个给药组按所述剂量灌胃给药，每日 1 次，连续给药 7 d ，未次给药后 1 h，戊巴比妥钠麻醉，分离右侧颈总动脉，颈总动脉近端置刺激电极，远端置温度电极，刺激电流为 1.5 mA，刺激时间为 7 min。从刺激开始至仪器报警并自动记录的时间，称堵塞时间(OT)[3] ，即血栓形成的时间，以 OT 长短作为判断药效的指标。
结果显示，克栓颗粒 20 g 生药/kg、10 g 生药/kg 剂量组及华佗再造丸组的 OT 值(s)依次为：992.7±150.8，870.6±42.9，1030.4±103.2，与对照组(773.9±61.7)比较，均有显著性差异(P<0.01)。表明克栓颗粒和华佗再造丸均可明显延长血栓形成时间。
2.3 对大鼠体外血栓形成的影响
实验分组、给药途径、给药剂量、给药周期均与实验 2.2 同。末次给药后 1 h，用戊巴比妥钠(30.0 mg/kg)麻醉，切开腹腔暴露腹主动脉，用硅化注射器穿刺取血 2 mL，按照 Chandler 体外法[4] ，立刻将血注入旋转环内，注入的血量充满旋转环 1/2以下(1.8 mL)，迅速密封，置血栓形成仪上，旋转 10 min(实验温度为 37℃)，倾出血栓，生理盐水洗涤，测量长度，称量湿重，将血栓条置 80℃ 烘箱 3 h 时，恒重后称其干重。
结果(见表 2)显示，与对照组比较，克栓颗粒 20 g 生药/kg 组的血栓长度明显缩短(P<0.01)，血栓湿重和干重均明显减轻(P<0.05)；克栓颗粒 10 g 生药/kg 组的血栓长度有缩短趋势，血栓湿重和干重均有减轻趋势；华佗再造丸组的血栓长度明显减短(P<0.01)，血栓干重明显减轻(P<0.05)，血栓湿重有减轻趋势。
表2 克栓颗粒对大鼠体外血栓形成的影响(±s)
| 组 别 | 剂量/g。 kg-1 | 鼠数 | 长度/mm | 湿重/mg | 干重/mg |
| 对照组 | 10 | 22.8±2.0 | 134.7±28.5 | 28.1±5.7 | |
| 克栓颗粒组 | 20 | 10 | 19.2±1.9** | 108.0±19.9* | 21.7±4.8* |
| 10 | 10 | 21.4±1.7 | 122.2±17.5 | 25.0±3.6 | |
| 华佗再造丸组 | 2.5 | 10 | 19.9±2.4** | 127.7±26.6 | 23.1±3.2* |
2.4 对大鼠动脉血栓溶栓作用的影响
将 60 只健康 Wistar 大鼠随机分为 6 组(每组 10 只)：假手术组，模型组，克栓颗粒 20 g 生药/kg剂量组，克栓颗粒 10g生药/kg剂量组， 华佗再造丸组(2.5 g 丸/kg)；脉管炎片组(0.65 g/kg)。各组动物用戊巴比妥钠麻醉，分离右侧颈总动脉，颈总动脉近端置刺激电极，远端置温度探头。刺激电流为 1.5 mA，刺激时间为 7 min，至血栓形成仪报警为血栓形成。假手术组只分离颈总动脉不刺激形成血栓。动物缝合伤口，假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水(10 mL/kg)，其余 4 个给药组按所述剂量灌胃给药，每日 1 次，连续给药 7 d，末次给药后 1 h，麻醉、分离并取电刺激处血管约 0.5 cm，置福尔马林中固定，经脱水、包埋、垂直切片、染色，倒置显微镜下观察血栓及血管形态，经显微录像视频印刷分析系统印出图像，用落点求积法(25点/cm2 )求出血栓占血管腔面积的百分比。
结果显示，模型组血栓仍基本堵塞管腔，血栓占血管腔面积的百分比为(88.13±7.41)%；克栓颗粒 20 g 生药/kg 剂量组、10 g 生药/kg 剂量组动物，在给药 7 d 后血栓有所减少小，血栓占血管腔面积的百分比分别为 (12.14±11.67)%、(19.80±15.62)%，与模型组比较均有显著性差异(P<0.001)，华佗再造丸组及脉管炎片组血栓亦有所减小，血栓占血管腔面积的百分比分别为(37.24±29.92)%、(51.69±20.24)%，与模型组比较均有显著性差异(P<0.01)。假手术组血管腔内未见血栓形成。
3 讨 论
血是在心气推动下循行于脉道之中以营养周身的红色液体，它内注五脏六腑，外滋四肢百骸，是维持人体生命的重要物质。一旦血液出现“高凝态”，则会导致“血脉不通”或“血行失度”，机体会因为“不通则痛”而出现属于血瘀症的各种血栓性疾患。血液“高凝态”与血小板功能异常及血栓形成有密切关系(5) 。许多活血化瘀药通过抑制血小板聚集和血栓形成，改善血液“高凝态”，使“通则不痛”，消除血瘀症。
以活血化瘀、破瘀散结药为君，配以养血活血、益气活血药研制而成的克栓颗粒，活血化瘀力专，益气生血性强，能使陈旧瘀血得化，气滞郁结诸证得解，气血运行畅通，故临床用于治疗因血瘀气滞、血脉不通、经络阻塞所致之脑卒中、脉管炎、静脉炎等瘀证。本研究结果表明，克栓颗粒能抑制家兔血小板聚集及大鼠体外血栓形成 ，能延长大鼠体内血栓形成时间，此外还具有溶解血栓的作用。这为解释该药作用的中医理论基础及临床疗效机制提供了实验依据。
参 考 文 献
[1] Born GVR.Aggregation of blood platelets by diphosphate and its reversal[J].Nature,1962，194:927
[2] 翁维良，廖福龙，吴云鹏，等.血液流变学研究方法及其应用[M].北京：科学出版社，1989：168～205
[3] 李增希，刘凤鸣，覃建民，等.蒙药萨木普勒诸尔布对血小板聚集性及实验性动物血栓形成的影响[J].中国中西医结合杂志，1988，8(10)：618
[4] 吕恩武.倪祖梅，贺文杰.等.九种中药的抗血栓形成作用[J].中国中西医结合杂志，1981，1(2)：101
[5] 郝文学.血栓与抗栓酶[M].沈阳：沈阳出版社，1992：77，100
(收稿日期：1998-02-15) , http://www.100md.com