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关键词：胰腺肿瘤；化学治疗；表阿霉素；血胰屏障
【摘要】 目的 研究表阿霉素在大鼠胰腺和血液中的分布规律。方法 经颈静脉推注表阿霉素7.5mg/kg体重，在规定的时间点处死大鼠，用高效液相色谱法测定血浆及胰腺组织中表阿霉素的含量。结果 血浆浓度在5分钟时达到最高点为1720μg/L；胰腺中表阿霉素的含量在10分钟时达到最高点为1448.85ng/g，此后两者均迅速下降。穿透比率(PR)在5分钟时最低为0.399，9小时后上升到5.606，此后逐渐下降，24小时为1.931。结论 静脉推注表阿霉素后药物未能维持在有效杀伤肿瘤细胞的浓度，这可能是胰腺癌化疗反应性不理想的原因之一。
Distribution of epirubicinin pancreatic tissue and plasma of rats
HU Ya, TAO Wei, ZHAO Yupei.
Department of Surgery, Chinese Medical Academy, Chinese Union Medical College, Beijing100730
【Abstract】 Objective To study thedistribution of epirubicin in blood and pancreatic tissue of rats. Methods Venousbolus injection of epirubicin (7.5 mg/kg body weight) was performed through a jugularcatheter. At the given time points, the rats were sacrificed. The concentrations ofepirubicin in the plasma and pancreatic tissue were measured by high performance liquidchromatography. Results The peak concentration in plasma was 1720 ng/mlat 5 min while the peak concentration in pancreatic tissue was 1448.85 ng/g at 10 min.After that, the concentrations were decreased quickly in both of them. The penetrationratio (PR) between pancreatic tissue and plasma was 0.399 at 5 min. The peak value was5.606 at 9 h. It was deceased to 1.931 at 24 h. Conclusion Theconcentration of epirubicin in pancreatic tissue was quickly decreased to a low level,which was a possible reason for the unsatisfactory result of chemotherapy for pancreaticcarcinoma.
【Key words】 Pancreatic neoplasm Chemotherapy Epirubicin Bloodpancreas barrier
为了解血胰屏障对化疗药物的影响，探讨化疗药物对胰腺组织的穿透性，我们选用临床上常用的表阿霉素，检测其在血液和胰腺组织中的浓度，以探讨表阿霉素在胰腺组织中的分布规律，现将结果报道如下。
材料与方法 1. 动物 Wistar健康雄性大鼠，体重180～220g，由中国医学科学院基础医学研究所动物中心提供。
2. 试剂 表阿霉素(epirubicin EPI色谱纯)及阿霉素(adriamycinADR色谱纯)由意大利爱宝药厂提供。表阿霉素针剂(10mg/支)用蒸馏水配成2mg/ml溶液，避光储于-20℃备用。
3. 动物分组 将动物随机分组，每组7只。据文献报道及预实验结果，选定在下述时间点处死大鼠：5、10、20、30、40分钟，1、2、4、6、9、12、24小时。
4. 给药方法 大鼠氯胺酮(1.6mg/100g体重)腹腔麻醉后固定，行颈总静脉插管，30秒内推注表阿霉素溶液(7.5mg/kg体重)，拔管后结扎颈总静脉，缝合皮肤。在规定的时间点开腹，从腹腔动脉取血液，收集于已肝素化的聚乙烯塑料管中，2500r/min离心20分钟取血浆，转移入聚乙烯塑料管，避光储于-70℃。游离全部胰腺组织，用生理盐水清洗后，转移入玻璃研磨器中研磨成匀浆，置于聚乙烯塑料管，避光储于-70℃。
5. 标本处理 取2.0ml血浆或全部胰腺组织匀浆，转移入塑料离心管，加入阿霉素150ng(5mg/L×30μl)作为内标，加入5ml氯仿与异丙醇(1∶1)混合液，剧烈振荡2分钟，4℃恒温下2500r/min离心30分钟，取上清有机液层，在30℃避光条件下用氮气吹干。加入50μl流动相，剧烈振荡30秒，4℃恒温下12000r/min离心10分钟，取上清液20μl注入进样阀进行测定。
6. 测定表阿霉素浓度 采用高效液相色谱法[1，2] 测定条件：C18反相色谱柱(4.5mm×15cm,phenomenexsphereclone 5uODS)，流动相为含乙腈的甲酸铵溶液(0.75g/100ml)，用甲酸调节pH至3.0，流动相流速为1.5ml/min，压力2.2Kpsi。梯度脱洗：在10分钟内，流动相中乙腈含量由25%变为45%，两次测量间期用25%乙腈溶液平衡5分钟。荧光检测器(惠普HP1046A)激发波长为230nm，发射波长为550nm。使用自动积分仪(惠普HP 3392A)记录波谱峰，自动计算峰面积。制作标准曲线：取空白人血浆2.0ml，加入表阿霉素标准溶液以及内标阿霉素150ng，运用同一液相抽提法抽提，用高压液相色谱法测定，以EPI与ADR的峰面积比和相应的EPI含量作线性回归，得回归方程。
7. 统计学处理 (1)根据测量结果作出血浆及胰腺组织中表阿霉素浓度-时间曲线，同时计算曲线下面积(AUC)。用EXCEL进行统计学处理。(2)运用SPSS程序对曲线进行NONLINE回归运算，回归方程选用药代动力学三室模型方程：Ct =A. e-at +B. e-βt +C. eγt ，计算半衰期：T1/2(α) =In2/α；T1/2(β) =In2/β；T1/2(γ) =In2/γ。(3)计算穿透比率(penetration ratio,PR)PR=CT /CP 。 CT 为胰腺组织药物浓度，CP 为血浆药物浓度。
本实验条件下表阿霉素的保留时间为9.29分钟，阿霉素的保留时间为8.34分钟。标准曲线AEPI /AADR =0.0054C+0.1967(r=0.9971)。静脉推注后，血浆中药物浓度迅速下降，5分钟时其浓度为1720μg/L，在1小时时已降至185.036μg/L，此后缓慢下降。在胰腺组织中，给药后10分钟药物浓度达最高水平为1448.85ng/g，此后迅速下降。在1小时时降至425.746ng/g，24小时为66.5ng/g。用SPSS统计软件进行分析表明：EPI在体内的消除代谢过程变化符合三室模型(相关系数R2 =0.997)，t1/2(α) =0.352分钟，t1/2(β) =8.390分钟，t1/2(γ) =449.609分钟。胰腺组织与血浆的药物浓度比(PR)在5分钟时最低，为0.399，后逐渐上升，9小时达最高为5.606，以后下降，24小时为1.931。药物浓度及穿透比率变化见表1。
表1
静脉推注EPI后胰腺和血浆中药物浓度及穿透比率(±s)| 时间 | 胰腺组织浓度 (ng/g) | 血浆浓度 (ng/ml) | 穿透比率 |
| 5min | 659.20±405.21 | 1720.00±543.17 | 0.39±0.31 |
| 10min | 1448.80±488.00 | 1090.20±186.02 | 1.48±0.13 |
| 20min | 820.74±173.55 | 623.87±273.47 | 1.59±1.00 |
| 30min | 669.14±167.92 | 269.15±52.96 | 2.69±1.46 |
| 40min | 613.56±98.77 | 220.75±53.74 | 2.90±1.16 |
| 1h | 425.75±206.43 | 185.04±42.71 | 2.04±0.57 |
| 2h | 369.78±209.96 | 136.04±34.45 | 1.93±0.96 |
| 4h | 302.39±32.27 | 103.35±35.92 | 3.32±1.25 |
| 6h | 288.44±118.46 | 47.67±0.89 | 4.46±2.26 |
| 9h | 220.77±181.08 | 43.99±3.87 | 5.61±1.74 |
| 12h | 202.94±74.87 | 42.78±17.75 | 4.82±2.75 |
| 24h | 66.51±16.46 | 24.49±10.57 | 1.93±1.09 |
讨论
本实验中所得的t1/2(α) 、t1/2(β) 、t1/2(γ) 比临床实验中的半衰期短，说明大鼠对EPI的代谢清除比人体要快，此结果符合药物代谢的一般规律，即体表面积/体积比值小的动物对药物的代谢率要高于比值低的动物。本实验结果发现，EPI的PR在5分钟时最低，为0.339，然后随时间延长有上升趋势，9小时达最高值5.61，随后24小时降至1.93。出现这种变化的原因可能是胰腺组织对药物有保留作用，造成其对表阿霉素的消除滞后于血浆中的消除。
本研究结果发现：表阿霉素在胰腺组织中的穿透比率除5分钟时点外，均大于1，这一点与其他药物有所不同，说明胰腺组织对表阿霉素不存在屏障作用。其原因尚有待进一步研究。本研究结果还发现：静脉给药后胰腺组织中的药物峰浓度仅为1.448μg/g，低于上述体外试验运用的药物浓度，1小时后胰腺组织中EPI浓度降至0.425μg/g，此后较长时间内缓慢下降，由此可以推测静脉推注EPI后，其在体内对胰腺癌细胞的抑制率可能会更低。
注： 本课题为国家九五攻关项目(No.96-907-03-05)和国家教委博士点专项研究基金资助项目(No.9715)
参考文献
1 Andrews P A, Brenner D E, Chow F T E, et al. Facile and definitive determination ofhuman adriamycin and daunorubicin metabolites by high-pressure liquid chromatography. DrugMetab Dispos, 1980, 8:152.
2 Zou Y, Horikoshi I, Kasagi T, et al. Organ distribution and antitumor activity of freeand liposomal doxorubicin injected into the hepatic artery. Cancer Chemother Pharmacol,1993,31:313-318.
(收稿：1999-04-13)
, 百拇医药