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关键词：
目前在生命科学中，研究氧自由基对生物体的作用，已是一个非常活跃的领域。氧自由基在肾脏病、心血管病、糖尿病、肿瘤、衰老等多学科疾病中的地位，引人瞩目，并有众多文献报道[1～6] 。我们就茶多酚的性质、抗氧自由基及脂质过氧化作用机理，毒理学实验等方面，以及我们对海南省生产的茶多酚抗氧自由基作用初步研究结果，结合文献进行综述。
一、茶多酚的性质
茶多酚(tea polyphenals, TP)，是从绿茶中提取的多酚类化合物。按其化学结构可分为4类[7] 。(1)儿茶素；(2)黄酮及黄酮醇类；(3)花白素及花青素；(4)酚类和缩酚酸类。儿茶素约占TP总量的60%～80%。其中EGCG是TP中主要成分，在儿茶素中还原电位最高，抗氧化能力最强。
二、TP的稳定性
1. TP的提取方法[7] ：(1)用含水有机溶剂提取；(2)用水或有机溶剂提取；(3)有机溶剂提取。目前我国浙江农业大学提取TP的方法，不用或只用一种有机溶剂，不用重金属盐提取脱咖啡碱TP的方法，为TP的商品化生产提供了一条可行的途径。产品有液态、粉态、粗晶态三种。
2. TP的稳定性：沈氏等[8] 通过TP在高温、高湿及强光照射下加速试验，检测TP的稳定性，结果如表1～4。
三、TP抗脂质过氧化作用
1.王氏等[8] 用H2 O2 -F2+ 体系诱导兔肝匀浆产生脂质过氧化，用硫代巴比妥酸(TBA)法测定脂质过氧化终末产物丙二醛(MDA)的含量，用电子自旋共振仪(ESR)直接证实了TP对肝匀浆脂质过氧化终末产物降低74%～79.1%，对卵磷脂质过氧化清除率64%。
2. TP可作为其清除自由基的作用降低(MDA)的微观解释[9] ：H2 O2 -F2+ 体系产生的*OH，使肝匀浆产生脂质过氧化产生脂质过氧自由基Loo*，加入茶后TP产生的半醌自由基使Loo.发生猝灭，使氧化终止，从而使MDA减少。
四、TP对油脂的抗氧化作用
茶叶所含多酚类物质，一般为含有2个以上互为邻位的羟基的多元酚，以儿茶素为例同样具有很强的供氢能力，因此TP是一种理想的抗氧化剂。用活性氧法(AOM)比较几种儿茶素等摩尔(MOL)抗氧化强度，依次为L-EC
五、TP对活性氧自由基()和羟自由基(*OH)的清除作用。
1. TP对的清除作用：贾氏[3] 用核黄素光照产生，加入TP20～200 μg/ml范围内对有明显清除效果。
2. TP对抗坏血酸体系产生*OH的清除作用：TP在20～ 500 μg/ml范围内对*OH有一定清除作用，如表6、7。实验表明TP有很强清除能力，清除*OH作用只有15%，但在生物体系中*OH的生成是H2 O2 与反应生成的*+H2 O2 →*OH+OH- +O2 。TP对有较强清除作用、有助于减少体内过量*OH的产生[3] 。对生物体损害主要是使细胞核酸链断裂、多糖解聚，不饱和脂肪酸(RH)过氧化作用，进而使成膜损伤，改变线粒体氧化磷酸化作用。还可使DAN中鸟嘌呤核苷、蛋白质和非蛋白质的巯基(-SH)及磷脂膜上的脂肪酸产生反应，产生大分子自由基成为癌变的前身[3] 。在细胞中被铁配合物催化与H2 O2 反应生成*OH的速度加快，*OH的生成增多，即Fenton型Haber-weiss反应：+H2 O2 Fe3+ O2 +*OH+OH- 。*OH是一个氧化能力更强的自由基，生物体内的DNA核苷酸、核苷及碱基等亚单位，很容易受到*OH攻击。活性氧上述的毒性反应，认为与炎症、自身免疫症、肿瘤、心肌及脑缺血、衰老、高脂血症、肾缺血再灌注损伤，肾脏疾病等疾病直接有关[3，10] 。
六、TP对体内铁及胆固醇的影响
学者们认为，冠心病人体内铁过剩，铁引发的Haber-weiss反应产生*OH自由基，若能及时排除铁，即可保护心脏。TP具有较强的配位能力，以配合物形式将铁排出体外。薄氏等[11] 给体重180克大鼠灌服TP粗品15 mg后2小时取血分别测定血清铁、全血铁、血清铁蛋白；另以20 mg/ml TP浸提液注入另一组小白鼠腹腔内，2小时后取血测定胆固醇含量。试验结果，试验鼠血清铁下降45%、全血铁下降12.80%、血清铁蛋白下降28.52%、胆固醇含量平均下降17%～23%。对ROOH抑制率74.35%。
七、海南省绿茶提取物TP主要成分及对及*OH的清除作用
1. TP主要成分：用热提取法生产的TP，外观呈棕褐色晶态粉末，有很好的水溶性及一定脂溶性，经农业部茶叶质量监督检验中心检测结果：晶态粉末TP含水4.2%、TP>95%、咖啡碱0.091 ug/g、六六六 100ug/g、DDT未检出、铜0.136 ug/g、铅0.011 ug/g、儿茶素组成：L-EC+D.L-C 33.89 mg/g、D.L-GC 56.20 mg/g、L-EGC 23.74 mg/g、L-ECG 61.66 mg/g、L-EGCG 269.50 mg/g，与国内产品质量相近[7] 。
2.用分光光度法测定TP对及*OH的清除率：(1)对的清除率：用黄嘌呤氧化酶(XOD)加嘌呤(X)体系酶促反应法，的生成过程是：黄嘌呤+2O2 +H2 O尿酸+2+2H+ 。测定结果，TP在体外浓度100 μg/ml范围内对清除率93.0±1.20，与贾氏用光照核黄素体系产生的清除作用相近[3] 。(2)用抗坏血酸体系产生*OH的清除率：参照贾氏方法[3] 进行，TP对*OH清除率15.40±1.0*(200μg)-1 ，与贾氏报告相近。
表1 TP在高温高湿光照条件下外观色泽的变化
| 处理 | 光照 | 80℃ | 60℃ | 40℃ | 35℃、85%湿度 |
| 外观色泽 | 10天后变红 | 2天后开始红变，并伴有风化结块现象 | 略有红变 | 变化甚微 | 3小时后有红变开始板结，5小时后成褐色，并呈糊状潮解物 |
表2 加速处理条件下TP中茶多酚总量的变化(n=3)
| 处理 | 光照 | 80℃ | 60℃ | 40℃ | 35、85%相对湿度 | 对照 |
| 茶多酚总量(%) | 97.65±0.99 | 102.38±1.40 | 98.28±1.50 | 100.17±0.45 | 95.13±1.62 | 98.28±0.72 |
表3 处理后的TP对O2 的清除作用(n=3)
| 处理 | 光照 | 80℃ | 60℃ | 40℃ | 35℃，85%湿度 | 对照 |
| 清除率(%) | 95.03±0.89 | 95.76±0.11 | 95.11±0.43 | 97.60±1.12 | 95.21±0.76 | 95.00±0.81 |
表4 TP中(一)-EGCG在加速处理后的变化(n=3)
| 处理 | 光照 | 80℃ | 60℃ | 40℃ | 35℃，85%湿度 | 对照 |
| (一)-EGCG 相对含量(%) | 51.73±1.12 | 49.64±0.76 | 83.48±1.44 | 92.45±1.37 | 78.57±0.96 | 100.00 |
表5 茶多酚清除*OH的作用
| 浓度(μg/ml) | 吸光度 | 清除率(%) | |
| 对 照 | - | 0.601±0.001 | - |
| 茶多酚 | 0 | 0.422±0.002 | 0 |
| 100 | 0.449±0.002 | 15.2±1.1 | |
| 200 | 0.449±0.003 | 15.2±1.6 | |
| 300 | 0.452±0.002 | 16.5±1.1 | |
| 400 | 0.453±0.004 | 17.8±2.2 | |
| 500 | 0.453±0.003 | 17.8±1.6 |
表6 茶多酚清除光照核黄素体系产生的的作用
| 对照 | 茶多酚 | 维生素C | 维生素E | |
| 吸光度 | 0.653±0.004 | 0.052±0.008 | 183±0.016 | 0.470±0.020 |
| 清除率(%) | 92.000±1.2 | 72.000±2.2 | 28.100±2.7 |
八、TP毒理学研究
1.对哺乳类动物及昆虫毒理试验：曹、扬二氏报告[12，13] ，TP对NIH小鼠以2.25 g*kg-1 *d-1 ×6周饮用后，发现对小鼠红、白细胞数及血红蛋白量、对肝、脾、肾脏器，胸腺免疫器官细胞数/克，与对照组对比无明显异常。贾氏等[3] 确定TP对小鼠口服LD50为10 g/kg。Amess试验、骨髓PCE微核试验、骨髓细胞姐妹染色体单体互换试验，果蝇伴性隐性致死试验结果均为阴性[13] 。对昆虫、哺乳类以1/20 LD50以下剂量试验结果，无蓄积性及遗传毒性[13] 。至今在茶叶中还未发现有具有一定毒性的单体酚类化合物，例如儿茶酚，所以TP对人体卫生是绝对安全的[14] 。
2. TP的耐受性：给自愿人员定时口服TP片剂500 mg/d×3月，无中毒病例发生。具有降血压、降血脂、降GOP、GPT及改善便秘作用[13] 。作者应用海南TP 0.6 g/d×3月，治疗CRF 31例，未发现毒副作用。
目前众多文献报道，包括急、慢性肾小球肾炎、肾综、CRF等肾脏疾病、肾移植后排斥反应的发生与发展，均与氧自由基损伤和脂质过氧化密切相关。有人对携带附加的SOD基因的转基因老鼠研究中，提供了关于内源性SOD保护作用的依据。为受氧自由基损伤的机体补充抗氧化剂，特别是天然无毒的抗氧化剂无疑是有益的。众多的研究说明，TP有助于提高SOD、CAT、GSH-PX等酶活性，抑制脂质过氧化作用。[1～6，10] 。
综上所述，人们对自由基医学科学的研究，使人们对于疾病的发病学、病理生理学和治疗学有了全新的认识，拓宽了视野。但仍有许多问题尚需进一步研究，对TP的抗氧自由基作用也是如此。进一步开展更广泛的研究，将有助于对天然、高效、无毒抗自由基药物的认识。
参 考 文 献
1 尹培达，甘华，欧阳玉林，等.氧自由基与肾小球疾病发病关系及抗氧化剂的防治作用.中山医科大学学报，1995，4∶1.
2 叶任高，沈清瑞.主编.肾脏病诊断与治疗学.北京：人民卫生出版社，1994.205～206.
3 贾之慎，杨贤强.茶多酚(TP)清除活性氧自由基和*OH的分光光度法研究.茶叶，1993，1∶25.
4 杨敏，代幼琴.茶多酚治疗慢性肾功能不全中抗自由基作用观察.中华肾脏病杂志，1994，4∶287.
5 Gen H, Yin PD, Zhong SG, et al. Study of the role for antioxidation in adrianmycin nephrotic syndrome in rat. Kidney Int, 1992,2∶207.
6 祁狄克，汪江淮，陆履佩，等.自由基，抗自由基系统在慢性肾功能不全发病机制中的探讨.中华肾脏病杂志.1991，6∶345.
7 贾之慎，杨贤强.茶多酚抗氧化作用的研究与应用.食品科学，1990，11∶1.
8 沈生荣.茶多酚的稳定性.茶叶，1993，2∶27.
9 王强，徐碧辉.茶叶抗脂质过氧化作用的研究.茶叶，1994，2∶11.
10 赵世民主编.医学自由基基础与临床.济南：山东大学出版社，1993.36～83；383～407.
11 薄云红，刘亮，田松林，等.茶多酚对动物体内铁及胆固醇的影响.中国茶叶，1995，416.
12 曹明富，杨贤强，茶多酚的亚急性毒理研究，茶叶，1992，1∶17.
13 扬贤强，徐绯.茶多酚保健功效研究的新进展.茶叶，1992，1∶42.
14 阮宇成.茶叶保健功能的研究及其发展前途(续).茶叶，1994，3∶8.
(收稿：1997-02-02 修回：1997-12-05)
, http://www.100md.com