史敦云 汪明春 熊文 李明 万军梅 史敦云 汪明春 李 明 万军梅 518029 深圳市血液研究所；熊 文 深圳市中心血站 中华血液学杂志 1999 0 20 11


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将脐血单个核细胞在含有细胞因子的培养体系中长期培养,观察其细胞构成和集落生成能力,了解其数量和质量的变化过程,对最佳扩增时间进行了探讨。

材料和方法

    1 人脐血细胞来源及制备 12份脐血标本采自本院妇产科健康足月产妇,袋装采集,ACD抗凝，羟乙基淀粉沉降去除大部分红细胞，剩余细胞洗涤后用RPMI1640混匀，经Ficoll(相对密度1.077)离心，分离出单个核细胞，洗涤备用。

    2 细胞培养 采用液体培养的方法， RPMI 1640培养液中加入体积分数为20%的胎牛血清、重组人白细胞介素3(rhIL-3，南方制药厂产品)2 ng/ml、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF，麒麟公司产品)50 ng/ml、红细胞生成素(Epo，麒麟公司产品)2U/ml，接种细胞浓度为2×10⁵ /ml，每周半量换液，并进行细胞计数、形态观察、流式细胞仪分析和造血祖细胞集落培养。

    3 造血祖细胞集落培养 分离的脐血单个核细胞(CBMNC)或扩增细胞在甲基纤维素体系中测定其集落生成能力。RPMI 1640培养液中加入体积分数为30%的胎牛血清、rhIL-3(2 ng/ml)、 GM-CSF(50 ng/ml))、Epo(2 U/ml)、甲基纤维素13.5 g/L ......