K562细胞端粒酶非同位素标记检测方法的建立
关键词:
目前国外检测端粒酶活性的端粒重复序列扩增方法(TRAP)多采用放射性同位素标记引物或底物,经PCR扩增后行放射自显影,不仅费时,而且存在放射性同位素标记和放射性废物处理的问题。我们用K562细胞和人工合成的引物,经PCR扩增后用特殊的荧光染料SYBR Green I染色,利用凝胶成像分析仪进行了TRAP产物定量分析,探讨本法对端粒酶活性检测的特异性、敏感性和最佳反应条件。
材料和方法
1 K562白血病细胞株 本校免疫教研室惠赠。
2 引物 端粒酶底物引物(Telomerase Substrate, TS): 5′-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3′;下游CX引物:5′-CCCTTACCCTTACCCTTACCCTAA-3 ′(美国赛百盛公司合成) ......
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