目的 探讨移植肾组织内细胞间粘附分子-1(ICAM-1)/淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的异常表达与移植排斥的关系。方法 采用改进的大鼠原位肾移植模型，分五个实验组，在不同的时间段、观测受体鼠存活、肾功能；以及移植肾组织用单克隆抗体免疫组织化学染色后，图象分析法定量测定移植肾组织ICAM-1/LFA-1分子表达的水平。结果 移植肾急性排斥组ICAM-1/LFA-1分子水平显著高于同品系移植对照组和药物治疗组。结论 移植肾组织活检同时检测组织内ICAM-1/LFA-1分子的表达，在肾移植急性排斥的诊断和治疗方面具有极其重要的临床意义。

Objective To assess relationship between the renal graft expression of ICAM-1 (intercellular adhesion molecule-1) and LFA-1 (Lymphocyte function associated antigen-1) molecule and the graft rejection. Methods Rat kidney transplantation was performed according to the procedure of kamada, with some modification. Experimental rats were divided into 5 groups. The survival time of recipient rats and function of grafts after renal transplantation were observed. The sections of renal graft were stained for monoclonal antibody ICAM-1 and LFA-1, and then quantification of ICAM-1 and LFA-1 expression was accomplished by computer image analysis. Results ICAM-1 and LFA-1 increased significantly in the renal allograft rejection group as compared with the non-rejection group (P<0.05). Conclusion Both the biopsy of renal graft and the monitoring of ICAM-1 and LFA-1 are useful tools in diagnosing and treating acute rejection.

    Key words Renal transplantation Rejection ICAM-1 LFA-1

近几年来，有学者从临床^[1] 和实验方面^[2] 研究了ICAM-1分子的表达与移植肾急性排斥间的关系。作为重要免疫分子的LFA-1，在移植肾内表达的报道文献较少。对此，我们采用大鼠原位肾移植模型，在过去实验研究的基础上^[3] ，用单克隆抗体(MoAb)检测肾组织内ICAM-1/LFA-1分子的表达水平，旨在探索ICAM-1/LFA-1的表达水平与肾移植排斥反应的关系。

一、实验动物与分组 (1)动物：随机采用近交系SD大鼠35只，Wistar大鼠55只，均系雄性，重200～250克，分别作为供、受体。动物由华西医科大学实验动物中心提供。(2)实验分组：根据使用药物的不同随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组，其中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ等组，又根据不同的实验时间，每组再分为2周、4周两个亚组。Ⅰ组(同品系移植n=10)：供受者同为Wistar大鼠，作为无排斥对照组：其它组(同种异体移植组n=35)：SD大鼠供肾移植给Wistar受体鼠。Ⅱ组(n=5)作为不用药实验对照组：Ⅲ组(n=10)：单用环孢素A(10 mg*kg^-1 *d^-1 )抗排斥治疗组：Ⅳ组(n=10)：小剂量环孢素A(2.5 mg*kg^-1 *d^-1 )联合金钱草(7 g/kg^-1 *d^-1 )抗排斥治疗组；Ⅴ组(n=10)：单用金钱草(7 g*kg^-1 *d^-1 )抗排斥治疗组。

    二、药物及给药方法 环孢素A(cyclosporine A,CsA) 100 g/L溶于10%脂肪乳液中，浓度分别为1.25 g/L、0.25 g/L；金钱草(Herba Lysimachiae)购自四川省中草药进出品公司；金钱草颗粒冲剂的制备采用煎煮、过滤、减压浓缩、干燥、制粒而成，由华西医科大学药学院提供。颗粒冲剂溶于0.9%氯化钠溶液中，浓度为350 g/L。采用灌胃针(日本产)插入大鼠胃内缓慢(3～5分钟)注入给药，按前述各组的剂量每日一次连续10天，术后当日为0天不给药。

    三、单克隆抗体(MoAb)ICAM-1/LFA-1购自美国 Pharmingen公司。

    四、改进的大鼠原位肾移植模型 采用改进的Kamada^[5] 大鼠肾移植法。切除左肾，供肾原位移植术毕后，立即切除对侧右肾。术后进食、饮水不限，凡因手术失败致受体鼠死亡排除在本实验外。

    五、观察、采集标本 受体鼠存活以天计，分别于术后14或28天处死前一天，将其放入代谢笼，收集24小时尿液，记录尿量，测24小时尿蛋白，处死时从下腔静脉采血2 ml，测血BUN、Cr，取移植肾作光镜、电镜观察及免疫组化检查；病理诊断根据“Banff Schema”标准^[5] 。未治疗组大鼠术后立即放入代谢笼中观察，收集尿液，死亡时立即按上述方法采集标本。

    六、移植肾免疫组织化学检查SP法(LSAB法) 新鲜肾组织快速置入液氮中冷冻，在恒冷(-20℃)切片机中切5 μm厚冰冻切片，然后采用苏红等^[7] SP法进行免疫组化染色。实验中，另外处死未手术的正常SD和Wistar大鼠各3只，取其肾脏，按上述组织化学染色法染色作为空白对照，用Ⅱ组移植肾染色阳性标本作为阳性对照。

    七、免疫组织化学定量研究^[8] 采用MIAS-300计算机图像分析系统，通过光学显微镜放大400倍摄取图像，输入图像分析系统内。每只鼠肾取4张切片，每张切片随机选5个视野(每一个视野含肾小球一个)。5个视野测试面积作为包容空间(或称参考空间)将ICAM-1/LFA-1的阳性面积除以包容空间，取其均值作为“阳性区域面积”(与参考空间相比的绝对值)。

    八、统计方法 在486微机上采用美国SAS(6.04版)软件包进行方差分析及两两比较(Student-Newman-Keule test;SNK)；当P<0.05时差异具有显著性，实验结果以±s表示。

一、受体鼠存活时间 Ⅱ组受体鼠术后11天内均死亡，经病理证实为急性排斥(Ⅲ度)，平均存活时间9天，Ⅴ组的2周亚组有一例(1/5)手术后8天死亡，经病理诊断为急性排斥(Ⅲ度)；Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组的各亚组四周组受体鼠分别在术后14天、28天时处死(处死前活着)，其术后平均存活时间明显较Ⅱ组长，Ⅲ、Ⅳ组受体鼠术后存活时间与Ⅰ组相比无显著性差异。

    二、移植肾形态学改变 见表1。

    肾移植术后2周，Ⅰ组正常4只，临界性改变1只，仅见灶性的单核细胞浸润，间质轻度水肿；Ⅳ组与Ⅰ组的病理改变相似，仅间质浸润的单核细胞较Ⅰ组稍多，也无间质出血和肾小管的坏死。Ⅱ组光镜下见大量的单核细胞浸润、肾小管坏死溶解，小动脉纤维素样坏死；电镜下见细胞器溶解，空泡变，呈典型的急性排斥反应；Ⅴ组间质中有灶性单核细胞浸润、间质水肿，有一例可见肾小管坏死改变，Ⅲ组的病理改变界于Ⅳ、Ⅴ组之间。肾移植术后4周，Ⅴ组以间质纤维化、肾小管灶性萎缩、动脉内膜和肾小球基底膜增厚、肾单位减少为特征；Ⅲ组与Ⅳ组的改变相似，都有不同程度的慢性排斥存在，但较Ⅴ组轻，以Ⅰ组最轻。而Ⅱ组已全部死亡。

    三、功能指标的变化 见表2、3。移植术后2周时测定血BUN、Cr及蛋白尿，Ⅱ组与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组相比有显著性差异，与Ⅴ组相比无显著性差异。移植术后4周时，Ⅴ组血BUN、Cr及蛋白尿高于其它各组，相比有显著性差异；从2～4周，各组都有不同程度的血BUN、Cr及蛋白尿的升高，Ⅴ组最高(P<0.05)。

    四、免疫组织化学染色 见表4。肾移植术后各组ICAM-1/LFA-1都呈阳性表达，2周时，以Ⅱ组表达水平最高，与其余组相比有显著性差异，以Ⅰ组表达水平最低；4周时，各组表达水平都较2周时高，Ⅰ组仍最低，且与其余组相比较有显著性差异，以Ⅴ组表达水平最高。