儿童急性白血病患者MTS1基因检测及其临床意义
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关键词：
我们采用聚合酶链反应(PCR)和PCR单链构象多态性分析(SSCP)技术研究了国内儿童急性白血病细胞中MTS1基因的纯合性缺失和突变情况，以探讨MTS1基因在儿童急性白血病发生、发展中的变化规律和意义。
对象和方法
1 研究对象 儿童急性白血病患者79例，均为1988年8月～1997年8月在我院初治的住院患儿。其中急性淋巴细胞白血病(ALL)50例，男34例，女16例，年龄6个月～14岁，平均5.6岁。按全国血液学会议诊疗建议[1] 分型：高危型32例，标危型18例。截止1997年8月，27例已死亡。急性非淋巴细胞白血病(ANLL)29例，男13例，女16例，年龄8个月～14岁，平均6.7岁，已死亡20例。20名正常儿童骨髓作为对照。
2 标本收集及DNA提取和浓度测定 用无菌手术刀片将已染色存档的骨髓涂片(涂片均为化疗前所取，洁净、均匀、无霉变，幼稚细胞数>0.70)上的细胞仔细刮下，加入细胞裂解液和蛋白酶K等，摇匀后55℃孵育6小时，采用酚-氯仿法使DNA析出，再加入TE缓冲液使DNA溶解后，用紫外分光光度仪测定其在260nm处的A值，依下式计算样本的DNA浓度，并均调整浓度为30～50ng/μl。
3 MTS1 基因的PCR扩增及纯合性缺失检测 MTS1 基因及标准内对照基因β-actin的PCR扩增引物序列及退火温度见表1 ......
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