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关键词：
应用免疫组织化学SP方法研究肝硬化患者胃粘膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达，探讨一氧化氮(NO)在肝硬化胃粘膜病变(GML)中的作用。
对象与方法
一、研究对象
乙型肝炎后肝硬化患者45例，男女比为8∶1，平均年龄52.8岁(范围21～64岁)；肝硬化按Child-pugh评分：A级15例，B级12例，C级18例。对照组19例：轻型慢性乙型肝炎(CPH)13例，急性甲型肝炎(AH)6例(1995年全国病毒性肝炎会议诊断标准)；男女比为15∶4，平均年龄43.5岁(范围24～61岁)。根据内镜诊断有无GML分5组：(一)肝硬化伴门脉高压性胃病(PHG)组：20例；PHG内镜诊断参考Sarin[1] 标准：①胃粘膜mosaic样变伴红晕；②散在或弥漫性红斑呈“麻疹或猩红热样”改变；③胃粘膜呈“樱桃色”红斑。(二)肝硬化合并十二指肠溃疡(HPU)组：14例；内镜下溃疡分期为A1 ～H2 。(三)肝硬化无GML(LC-N)组：11例；内镜下表现为轻度慢性胃炎。(四)十二指肠溃疡病(Non-HPU)组：11例(CPH8例，AH3例)；溃疡分期为A1 ～H2 。(五)无GML(正常)组：8例(CPH 5例，AH 3例)；内镜诊断为轻度慢性胃炎。
二、方法
GIF-XQ30型内镜下于胃窦前壁距幽门口2～3cm取胃粘膜3块，Bouin液固定24小时，常规酒精梯度脱水；石蜡包埋、切片5μm，常规HE染色；免疫组化SP法步骤：脱蜡→3%H2 O2 室温30分钟→10%羊血清封闭→1∶60抗iNOS多抗(Santa Cruz)4°C过夜→SP试剂盒染色(北京中山公司提供，按说明书操作)；MPV型显微分光光度计测定iNOS表达阳性组织、细胞的光密度值，放大倍数400×，每例随机测定10个区域数。统计学处理方法：光密度值用±s表示,Systat统计软件秩和检验。
结果
肝硬化患者胃粘膜上皮细胞、腺细胞、血管均有iNOS阳性表达，但其表达强弱不一致，见表1。PHG组及HPU组血管iNOS表达均较正常组及LC-N组增加(P<0.001)，胃粘膜上皮细胞、腺细胞iNOS表达均较正常组减少(P<0.001)；HPU组胃粘膜血管iNOS表达较非HPU患者增加(P<0.001)。肝硬化患者Child分级与胃粘膜iNOS表达见表2：Child C级患者胃粘膜血管iNOS较Child A级明显增加(P<0.001)，但胃粘膜上皮细胞、腺细胞iNOS减少与肝硬化Child分级无明显关系(P>0.05)。
表1 各组患者胃粘膜iNOS表达定量测定结果
| 组别 | 病例数 | 测定 区域数 | 血管 | 腺细胞 | 上皮细胞 |
| PHG组 | 20 | 200 | 0.21±0.10* ★ | 0.15±0.11 | 0.18±0.08 ★ |
| HPU组 | 14 | 140 | 0.23±0.12* | 0.16±0.08 | 0.16±0.04 ★ |
| LC-N组 | 11 | 110 | 0.17±0.08 | 0.16±0.04 | 0.18±0.09 |
| 非HPU组 | 11 | 110 | 0.17±0.09 | 0.15±0.09 ★ | 0.18±0.09 ★ |
| 正常组 | 8 | 80 | 0.16±0.07 | 0.19±0.08 | 0.54±0.45 |
注：*与LC-N比较， 与非HPU比较，★与正常组比较，P<0.001
表2 胃粘膜iNOS表达与肝硬化Child分级关系
| 分组 | 例数 | 测定 区域数 | 血管 | 腺细胞 | 上皮细胞 |
| 肝硬化 | |||||
| Child分级 | |||||
| A | 15 | 150 | 0.16±0.06* | 0.12±0.05 | 0.17±0.05 |
| B | 12 | 120 | 0.19±0.08 | 0.15±0.06 | 0.18±0.09 |
| C | 18 | 180 | 0.21±0.08 ★ | 0.13±0.05 ★ | 0.18±0.05 ★ |
| 对照组 | 19 | 190 | 0.16±0.09 | 0.17±0.05 | 0.51±0.45 |
注：★与对照组比较P<0.001,*组内比较P<0.001
讨论
新近发现，NO与肝硬化患者PHG、GML及消化性溃疡的发生有关[2] 。El-Newihi等[3] 研究也发现，肝硬化PHG患者胃粘膜cNOS/iNOS活性明显高于无肝病对照者，并且血清NO - 2/NO - 3水平也明显增高；提示NO在肝硬化PHG、GML中具有重要作用。本研究发现：肝硬化患者胃粘膜上皮细胞、腺细胞、血管均有iNOS阳性表达；PHG与HPU患者胃粘膜血管iNOS表达明显增加。因此认为，肝硬化患者胃粘膜血管iNOS过度表达导致局部NO合成增加，NO引起局部血管扩张与PHG及HPU发生有密切关系，与Ohta[2] 的观点基本一致。同时还发现：HPU患者胃粘膜血管iNOS表达较非HPU患者增加，但胃粘膜上皮细胞、腺细胞iNOS表达无明显差异，提示HPU发生机制可能不同于普通消化性溃疡；肝硬化患者胃粘膜上皮细胞iNOS表达降低，导致局部NO合成减少，可能与胃粘膜上皮细胞对其它损伤因素防御功能减弱有关[2] ，提示NO在肝硬化GML中具有粘膜保护与细胞损伤双重作用。本研究还发现：肝硬化Child C级患者胃粘膜血管iNOS表达明显增加，但胃粘膜上皮细胞、腺细胞iNOS表达减少与Child分级无明显关系。因此认为，肝脏严重病变是胃粘膜血管iNOS表达增加的始动因素，与肝硬化患者胃粘膜病变的发生、发展有密切关系；NO可能仅在组织、细胞局部发生重要的病理生理作用。
参考文献
1. Sarin SK. Diagnostic issues: portal hypertensive gastropathy and gastric varices. In: Franchis RD. Portal hypertension Ⅱ . Blackwell Science Ltd, 1996, 30-39.
2. Ohta M, Tanoue K, Tarnawski A, et al. Overexpressed nitric oxide synthase in portal hypertensive stomach of rats: A key to increase susceptibility to damage? Gastroenterology, 1997, 112:1920-1930.
3. El-Newihi HW, Kanji VK, Mihas A. Activity of gastric mucosal nitric oxide synthase in portal hypertensive rats. Am J Gastroenterol, 1996, 91:535-539.
(收稿：1998-09-16 修回：1999-02-02)
, http://www.100md.com