MRP真核表达载体的构建及其在人膀胱癌中的表达

http://www.100md.com 《中华泌尿外科杂志》 1999年第10期

     章小平鲁功成杨红枚刘辉朱应刘德立齐义鹏章小平鲁功成 430022 武汉同济医科大学附属协和医院泌尿外科；杨红枚刘辉朱应刘德立齐义鹏武汉大学生命科学院病毒及分子生物学系中华泌尿外科杂志 1999 0 20 10

    关键词： 期刊 zhmnwkzz 0 论著摘要 fur -->

多药耐受(MDR)是导致化疗失败的重要原因。研究表明：mdr1/P-gp介导的MDR是膀胱癌MDR的重要机制，但不是唯一机制。新近发现的多药耐受相关蛋白(MRP)基因是介导MDR的一种肯定机制^[1]，我们将MRP基因转入膀胱癌细胞，并初步观察了其介导的MDR及MRP的表达。

材料和方法

真核表达载体pcDNA3.1(+)/MRP1的构建：含全长MRP1cDNA的载体PJ3Ω/MRP1由荷兰癌症研究所的Marcel Kool博士赠送。用限制性内切酶NheI、Not I完全消化PJ3Ω/MRP1和pcDNA3.1(+)后,将电泳回收的目的片段纯化，在T₄连接酶作用下12℃过夜；将连接产物转化后，挑选阳性转化子，扩增后酶切鉴定。

细胞培养及重组子转染：膀胱癌EJ细胞以含7%小牛血清不含抗生素的RPMI1640培养 ......

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