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关键词：前列腺增生；血管形成
【摘要 】 目的 探讨血管形成在良性前列腺增生 (BPH)发病中作用及其与 bFGF、 PCNA之间的相关关系。 方法 应用免疫组化结合计算机图像分析方法检测第Ⅷ因子相关抗原、 bFGF和 PCNA在 18例正常前列腺 (NP)和 62例 BPH中的表达及其相关关系。 结果 BPH组织中微血管密度 (MVD)、 bFGF和 PCNA指数均显著高于 NP； BPH的 MVD与间质的面积百分比、 bFGF表达和 PCNA指数均呈正相关，而与上皮面积百分比负相关； NP的 MVD仅与间质的 PCNA指数正相关。 结论 血管形成增多与 BPH的发生、发展有密切关系，尤其对间质细胞增殖、增生的作用更为显著，而 bFGF异常表达可能是血管形成增多的主要原因之一。
The significance ofangiogenesis in benign prostatic hyperplasia
XIE Qingxiang, PEI Faguang,MENG Jiarong, et al
Department of Urology, The 175th Hospital of PLA, Zhangzhou 363000
【 Abstract 】 Objective To investigate the roles ofangiogenesis in the pathogenesis of benign prostatic hyperplasia (BPH) and itsrelationships with basic fibroblast growth factor (bFGF) and proliferating cell neculearantigen (PCNA). Methods Immunohistochemistry combined with computer-assisted image analysissystem were carried out to examine the expressions of factor Ⅷ -related antigen,bFGF and PCNA in 18 normal prostates and62 specimens of BPH. Results The microvessel density (MVD), bFGF expression and the index ofPCNA in BPH were significantly higher than those in normal subjects. The MVD of BPHpositively correlated with the proportion of stroma and the index of PCNA and bFGFexpression in stroma, while negatively correlated with the proportion of epithelial area.The MVD in normal prostate correlated merely with the index of PCNA in stroma. Conclusions The increase of angiogenesismight involved in the development and progression of BPH, particularly in stromal hyperplasia. bFGF might be an important factor for promoting angiogenesis.
【 Keywords 】 Prostatichypertrophy Angiogenesis
我们应用免疫组化结合计算机图像分析方法检测正常和增生的前列腺组织中第Ⅷ因子相关抗原、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和增殖细胞核抗原 (PCNA)表达，以探讨血管形成在良性前列腺增生 (BPH)发病中的作用。
材料与方法
一、组织标本
62例 BPH，年龄 51～ 80岁，平均 64.3岁。均为耻骨上经膀胱前列腺摘除标本。 18例正常前列腺 (NP)作为对照，其中 12例取自意外死亡供肾者， 6例取自全膀胱切除病人。石蜡包埋，切片厚 4μ m。所有标本均常规 HE染色，病理组织学证实。
二、免疫组化方法
采用 SP方法。第Ⅷ因子相关抗原 (1∶ 100)和 bFGF(1∶ 50)为兔抗多克隆抗体、 PCNA(1:50)为单克隆抗体。 DAB显色，苏木素复染。 PBS替代一抗作为阴性对照。以上试剂购自北京中山生物公司。
三、微血管密度的计算
第Ⅷ因子相关抗原阳性染色的微血管呈棕黄色至深棕色，按 Weinder法[ 1] 并稍改进计数微血管密度 (MVD)，即先在低倍镜 (×100)下观察并选择 5个 MVD最多的区域(热点)，尔后在高倍镜 (×400)下计数，取平均值。
四、组织构成的检测
应用医学真彩色图像处理系统对 HE染色切片进行图像分析。随机测量 5～ 10个视野 (×100)，分别计算间质、上皮和腺腔所占的面积百分比。
五、 bFGF表达的定量测定
应用医学真彩色图像处理系统进行分析。随机检测 5～ 10个视野 (×400)，分别测定间质和上皮的 bFGF阳性面积百分比。
六、 PCNA指数的计算
高倍镜下 (×400)，再通过图像分析处理系统进一步放大，便于准确鉴别及计数。随机检测 10～ 20个视野，计算阳性细胞所占百分比，即 PCNA指数，其中至少计数 500个上皮细胞和 500个间质细胞。
七、统计方法
应用万道统计软件 (SDAS)进行统计分析，两样本比较采用 t检验，相关分析采用直线相关回归分析。
结 果
MVD、 bFGF和 PCNA指数在正常和增生前列腺组织中的表达见表 1。
表 1 前列腺组织 MVD,bFGF和 PCNA表达的结果 (±s)
| 例数 | MVD | bFGF | PCNA | |||
| 间质 | 上皮 | 间质 | 上皮 | |||
| NP | 18 | 7.7±4.9 | 5.6±3.7 | 8.4±5.3 | 3.9±5.8 | 8.3±9.0 |
| BPH | 62 | 19.4±7.1 | 17.0±5.8 | 11.6±7.4 | 14.0±10.6 | 20.2±13.8 |
| P值 | <0.001 | <0.001 | >0.05 | <0.001 | <0.001 | |
相关分析： NP的 MVD与间质 PCNA指数之间呈正相关 (P<0.01)，与上皮 PCNA指数、间质和上皮各自的面积百分比和 bFGF表达之间均无相关性 (P>0.05)。 BPH的 MVD与间质中 PCNA指数、 bFGF表达和面积百分比之间均呈正相关 (P<0.05)，与上皮面积百分比之间负相关 (P<0.05)，与上皮的 PCNA指数和 bFGF表达之间无相关 (P>0.05)。
BPH间质的 bFGF表达与间质的面积百分比和 PCNA指数之间均呈正相关 (P<0.05)， BPH上皮的 bFGF表达和 NP的 bFGF表达与各指标之间均无相关性 (P>0.05)。
讨 论
bFGF是中胚层和神经外胚层细胞的促有丝分裂原和血管形成的重要促进因子，研究表明其与 BPH的发生发展过程有密切关系[ 2， 3] 。我们结合计算机图像分析进行定量研究，发现 bFGF在 BPH的间质中表达增高，其表达与间质面积百分比和 PCNA指数正相关，提示 bFGF能够促进间质细胞增殖，而且其表达与间质增生程度密切相关，表明 bFGF在 BPH的发病过程中起着重要作用，尤其对间质增生作用更重要，这与以前的研究一致[ 3] 。同时发现本组 bFGF表达与 MVD之间正相关，而且血管内皮细胞可见 bFGF阳性染色，提示 bFGF是促进 BPH组织中新生血管形成增多的重要因子之一。动物实验发现在前列腺再生过程中， bFGF水平升高呈现“迟发性反应”，可能与其促进血管形成以支持前列腺生长有关[ 4] 。因此推测在 BPH发病早期， bFGF可能通过促进间质细胞增殖而诱导结节形成；而当结节生长到一定大小时， bFGF可能主要通过促进血管形成而进一步支持及促进结节生长。
血管形成在许多良恶性疾病的发病过程中的重要性已为人们所认识[ 5， 6] 。虽然研究已发现 BPH组织中多种与血管形成有密切关系的生长因子表达增高，但有关血管形成的研究甚少且多缺乏正常对照[ 3， 7， 8] 。
Deering等[ 8] 研究表明 BPH组织中结节区 MVD显著高于非结节区，提示 BPH结节形成及发展需要增加血液供应。 Weingartner等[ 9] 报道了 BPH病人尿中促进血管内皮细胞增殖活性和 bFGF及 VEGF水平均较正常的高，进一步表明血管形成与 BPH的发病有密切关系。本组结果则显示 BPH组织中 MVD显著高于 NP，而且 BPH的 MVD与间质面积百分比密切相关，提示血管形成增多在 BPH的发生发展过程中起着重要作用，尤其对间质增生作用更为显著。同时本组发现 BPH的 MVD与上皮面积百分比负相关，这可能与上皮面积百分比为构成比有关。由于 BPH中间质和腺腔的比例明显增大，相对降低上皮的比例，这就使 MVD与上皮面积百分比之间出现负性对应关系。因此本组结果在某种程度上反映了血管形成对上皮增生的发生发展也起着一定作用。
本组发现 NP和 BPH的 MVD均与间质 PCNA指数正相关，而与上皮 PCNA指数无相关性，提示间质细胞的增殖更依赖于新生血管的支持，进一步表明血管形成增加对间质细胞增殖、增生作用较上皮细胞更显著，这可能与血管形成的主要促进因子 bFGF等因子同时也是间质细胞生长、增殖的重要促进因子有关。目前血管形成抑制剂已在肿瘤治疗方面取得了进展，因此深入探讨 BPH中血管形成的各个环节，将为临床治疗提供新的方向。
参 考 文 献
[1] Weidner N, Carroll PR,Flax J,etal.Tumor angiogenesis correlates with metastasis in invasive prostate carcinoma. Am JPathol,1993,143∶ 401-409.
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[3] 谢庆祥 ,刘春晓 ,姚华强 ,等 . 前列腺增生和癌变组织中碱性成纤维细胞生长因子的表达及其临床意义 . 中华泌尿外科杂志 ,1997,18∶ 107-109.
[4] 谢庆祥 ,刘春晓 ,姚华强 ,等 . 雄激素影响前列腺组织 bFGF表达的研究 . 中华泌尿外科杂志 ,1997,18∶ 88.
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(收稿： 1998-08-03 修回： 1998-11-09) , 百拇医药