关键词：
为了探讨胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factorⅡ，IGF-Ⅱ)及其受体(IGF-ⅡR)在肝癌发生及发展过程中的作用，我们采用原位分子杂交技术，对肝癌和癌旁肝组织中IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR基因的表达进行了观察，发现IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR参与了肝细胞癌变的演化过程，IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR对于预测肝细胞癌变倾向具有较大的临床意义。
一、材料与方法
1.标本：肝细胞癌27例，男20例，女7例，平均年龄45.8岁。根据Edmondson分级法，Ⅰ级1例，Ⅱ级2例，Ⅲ级20例，Ⅳ级4例。其中25例含癌旁肝组织，均经病理证实。
2.寡核苷酸探针：IGF-Ⅱ：5’-GTGCTTCTCACCTTCGCCTTCGCCTCGTGCTG-CATTG-3’；IGF-ⅡR：5’-ACAATGCCTGTCTGTGGGACCATCCTGGGAAAACCTGT-CT-3’。采用地高辛加尾标记法标记。
3.方法：DNA-RNA分子杂交主要步骤包括石蜡切片脱蜡水化，蛋白酶K消化(30～40mg/L，37℃，30 min)，预杂交(39℃，2 h)，杂交(探针浓度2.5 mg/L，39℃，12～16h)，硝基四氮唑/5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸(NBT/BCIP)显色。实验中设阴性对照和空白对照。HBV-DNA整合采用Southern杂交方法检测。
二、结果
1.IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR mRNA的表达：27例肝癌中20例有IGF-Ⅱ mRNA表达，19例有IGF-ⅡRmRNA表达，紫蓝色阳性信号绝大数位于胞浆。IGF-Ⅱ mRNA表达多见于癌巢周边细胞，分化较差的细胞表达信号较强。25例癌旁肝组织中18例有IGF-ⅡmRNA的表达，19例有IGF-ⅡR mRNA表达，紫蓝色阳性信号均位于胞浆。IGF-Ⅱ、IGF-ⅡRmRNA在肝细胞再生结节及不典型增生肝细胞中呈高表达。
2.IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR mRNA表达与肝癌分化程度的关系：在Ⅰ级和Ⅱ级病例中无IGF-Ⅱ、IGF-ⅡRmRNA的表达，在Ⅲ级病例中IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR mRNA的表达率分别为85%和75%，在Ⅳ级病例中IGF-Ⅱ、IGF-ⅡRmRNA的表达率分别为3/4和4/4。
3.IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR mRNA表达与HBV-DNA整合的关系：本组病例有92.6%(25/27)肝癌和84.0%(21/25)癌旁肝组织存在HBV-DNA整合。存在HBV-DNA整合的肝癌及癌旁肝组织，其IGF-Ⅱ阳性率分别为80.0%和85.7%，IGF-ⅡR阳性率分别为76.0%和90.5%。HBV-DNA阴性者未发现IGF-Ⅱ、IGF-ⅡRmRNA表达。
讨论 研究结果表明，在肝癌和癌旁肝组织中IGF-Ⅱ、IGF-ⅡRmRNA的阳性率相近，而且IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR mRNA绝大多数均定位于胞浆，它们的分布区域基本一致。这一结果符合IGF-Ⅱ通过与IGF-ⅡR结合而发挥生物学效应的理论[1] 。肝癌细胞通过自分泌大量IGF-Ⅱ直接作用于自身或邻近癌细胞的IGF-ⅡR，放大了细胞持续生长信号的传递，加速了肝癌细胞的自主性生长[2] 。癌旁肝组织、特别是在肝细胞再生结节和不典型增生肝细胞中存在IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR的高表达，提示IGF-Ⅱ可能通过自分泌或旁分泌途径与IGF-ⅡR结合刺激肝细胞的异常生长和分化，加速癌前肝细胞的恶性转化，最终发生肝细胞的癌变[3] 。肝细胞再生结节和不典型增生肝细胞是肝癌的癌前病变，IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR在这些增殖活跃的肝细胞中的过量表达，提示了肝细胞癌变倾向的特征，对于预测肝细胞癌变具有较大的临床意义。
IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR的表达水平与肝癌细胞的分化程度有关，即在低分化癌细胞中可见较强的阳性杂交信号，在分化程度较差的肝癌病例，IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR的表达率较高[4] 。我们发现癌巢外周的细胞杂交信号较强，这些细胞通常体积较小，富含染色质，属分化较差的细胞，增殖活跃。这一结果提示IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR的高表达与肝细胞恶性演化过程中的增殖活性有关。
IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR仅在存在乙型肝炎病毒(HBV)-DNA整合的肝癌和癌旁肝组织中有表达，提示IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR在肝癌和癌旁肝组织中的过表达与HBV-DNA整合密切相关。我们推测HBV可能通过HBxAg的反式激活作用激活IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR基因，从而导致其过度表达，促使肝细胞恶性增殖，加速癌前肝细胞的癌变[5] 。
国家自然科学基金资助项目(No：39470774)
参考文献
1 CarianiE, Seurin D, Lasserre C, et al. Expression of insulin-like growth factor Ⅱ (IGF-Ⅱ) in human primaryliver cancer: mRNA and protein analysis. J Hepatol, 1990,11：226-231.
2 Rogler CE,Yang D, Rossetti L, et al. Allered body composition and increased frequency of diversemalignancies in insulin-like growth factor Ⅱ transgenicmice. F Biol Chem, 1994,269：13779-13784.
3 Lamas E,LeBail B, Housset C, et al. Localization of insulin-like growth factor Ⅱ and hepatitis B virus mRNAs and proteins in human hepatocellularcarcinomas. Lab Invest, 1991,64：98-104.
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5 Wang W,London TW, Feitelson MA. Hepatitis B x antigen in hepatitis virus carrier patients withliver cancer. Cancer Res, 1991,51：4971-4977.
(收稿：1998-02-04 修回：1998-09-02)
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