关键词：原发性肝细胞癌 转移 nm23-H1 甲胎蛋白A
【摘要】 目的 探讨检测肝癌患者外周血中肝癌细胞AFP mRNA，以动态观察原发性肝癌的转移状况。 方法 采用套式逆转录聚合酶联反应及cDNA定量等方法对30例外周血肝癌细胞AFP mRNA进行了检测。 结果 外周血肝癌细胞AFP mRNA检出率与肝癌的肝内转移、肝内静脉癌栓形成、nm23-H1表达以及细胞分化程度等密切相关。 结论 外周血AFP mRNA可能是肝癌细胞入侵体循环，即将或已经开始转移的标记之一。
CLINIC STUDY OF THEDETECTION OF CIRCULATING HEPATOCELLULAR CARCINOMA CELLS IN PERIPHERAL BLOOD
Zhang Kaitai, Han Benli, WangYuzhi. Southwest Hospital Third Military Medical University, Chongqing 400038
【Abstract】 Objective AFP is oneof the important markers in primary hepatocellular carcinoma. Detecting the circulatinghepatocellular carcinoma cells in peripheral blood would be beneficial to observing themetastasis in primary hepatocellular carcinoma. Methods Nested reverse transcription polymerase chain reaction wasdeveloped to detect the mRNA expression of AFP and nm23-H1 in 30 cases. Results AFPmRNA in circulating hepatocellular carcinoma cells in peripheral blood seemed to becorrelated with intrahepatic metastasis, portal vein tumor thrombi, nm23-H1 expression anddifferentiation of tumor cell. Conclusion AFP mRNA might indicate the invasion of hepatocellular carcinomacells and the process of metastasis.
【Key words】 Hepatocellular carcinoma Metastasis nm23-H1 AFP
我们采用套式逆转录聚合酶联反应(nested RT-PCR)及cDNA定量等方法对30例外周血肝癌细胞AFPmRNA进行了检测。
资料与方法
一、研究对象
30例原发性肝癌患者，平均年龄50.7岁，均经手术中及手术后病理检查证实。静脉癌栓13例、AFP大于500ng/ml 16例、肝内转移23例。
二、引物合成
AFP外侧引物：5'-ACTGAATCCAGAACACTGCATAG-3', 5'-TGCAGTCAATGCATC TTTCACCA-3',内侧引物：5'-TGG AAT AGCTTCCATATTGGATTC-3'；5-AAGTGGCTTCTTGAACAAACTGG-3'。
三、cDNA定量
2%琼脂糖电泳后进行图象扫描定量分析。
结 果
一、不同病理改变AFPmRNA的检出率
原发性肝癌直径小于5cm阳性率为25%(1/4)、界于5～10cm为53%(8/15)、大于10cm为73%(8/11)，肝内静脉癌栓形成AFP mRNA阳性率为85%(11/13)、无肝内静脉癌栓为32%(6/17)，血清AFP大于500ng/ml阳性率为68%(11/16)，小于500ng/ml为43%(6/14)，Ⅰ级分化阳性率为0%(0/1)、Ⅱ级分化为22%(2/9)、Ⅲ级分化73%(11/15)、Ⅳ级分化80%(4/5)，伴发肝内转移时AFP mRNA检出率为69%(16/23)、不伴肝内转移者为16%(1/6), nm23-H1表达强度小于0.4者检出率为85%(11/13)、界于0.4～0.8者为41%(5/12)、大于0.8为20%(1/5)。
二、AFP mRNA检出率与转移的相关分析
AFP mRNA检出率与肝内转移、肝内静脉癌栓形成呈正相关；与nm23-H1表达、细胞分化程度呈负相关。与血清AFP及肿瘤体积无相关。
讨 论
原发性肝癌在早期即可侵袭血管进入血循环，这一生长特点使在外周血中检测出肝癌细胞成为可能。在蛋白合成过程中，AFP mRNA于细胞核内由DNA转录，然后进入细胞浆内进行加工处理。因此mRNA只能存在于具有活性的细胞内 [1] 。在肿瘤生长过程中，可能会由于细胞膜的破裂而使mRNA释放到血液中并以游离的形式存在，但这种游离形成的mRNA非常不稳定，很快被血清中的RNA酶所降解，外周血中几乎不存在游离的mRNA。在排除其他包括生殖器肿瘤在内等干扰因素的前提下，只要外周血中查出AFP mRNA，原发性肝细胞癌存在的可能性便非常大。因此，外周血AFP mRNA可被认为是肝癌细胞存在于外周血较为可靠证据，是原发性肝细胞癌发生浸润并可能成为转移的重要的标志。
研究发现，转移相关基因的异常表达对肿瘤的转移中具有促进作用。nm23-H1系肿瘤转移抑制基因，控制癌细胞的浸润、迁移、分化等环节。在原发性肝细胞癌中表达强度与肿瘤转移能力呈负相关 [2] 。
本实验结果证实，外周血中癌细胞的出现与肿瘤体积无关，而与肝内静脉癌栓形成、细胞分化程度以及nm23-H1异常表达密切相关。
采用nested RT-PCR方法检测外周血AFP mRNA特异性强、灵敏度高的特点，对于临床动态观察肝癌的转移状况可能具有非常重要的价值。
参 考 文 献
1 Niwa Y, Matsumura M,Shiratori Y. Quantitation of alphafetoprotein and albumin messenger RNA in humanhepatocellular carcinoma. Hepatology, 1996, 23: 1384-1392.2 Wang L, Noria I, Massaaki O,et al. nm23-H1 and nm23-H2 messenger RNA abundance in human hepatocelluar carcinoma.Cancer Res, 1995, 55: 652-657.(收稿：1997-04-10 修回：1997-12-01)(本文编辑：何亚玲 校对：况琪) , 百拇医药