原位PCR检测外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒
关键词：
我们用原位PCR和原位杂交检测丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA。
材料和方法：22人/份肝素化的静脉血10ml经淋巴细胞分离液分离出PBMC，用PBS液冲洗3次，离心，制成每毫升含1× 105 以上细胞浓度的悬液，取悬液200ml用离心法将细胞沉积在经过硅烷处理的载玻片上，凉干，用4%多聚甲醛固定10分钟，吹干，再酸化，蛋白酶K消化，反转录PCR后加地高辛标记探针，显色镜检，同时设阴性对照。
结果：用原位PCR检测22份PBMC标本，显示HCV基因信号的有15份，检出阳性率为68.1%，阳性信号为紫兰色，主要定位于PBMC胞浆中，而原位杂交检测8份，2份阳性，阳性率25.0%，其定位分布同原位PCR，但信号明显弱，而阴性对照均未见阳性信号。
讨论：由于原位PCR可以在组织细胞原位检测出低拷贝的HCV RNA序列。因此对疾病早期诊断，判断受染细胞类型、部位、疾病的发生机理，监测治疗及预后均有重要意义。本研究用原位PCR检测慢性丙型肝炎患者PBMC中证实HCV RNA存在，其阳性信号主要呈胞浆分布，故PBMC可能为HCV感染与复制的肝外场所。
(收稿：1997-04-29 修回：1997-12-08)
(本文编辑：金生 校对：袁平戈) , http://www.100md.com