作者:姚集鲁

    摘 要 病毒性肝炎是我国最重要的传染病之一，可导致严重慢性肝病，并且与肝细胞癌密切相关。近5年来，我们改进肝炎病毒核酸诊断技术，建立热变性HCV RNA直接扩增技术、RT-PCR夹心斑点杂交技术、HBV前C区点突变检测技术，以及克隆HCV、HGV基因序列。此外，对广东甲型肝炎流行病学调查与输血传播HCV、HGV及TTV人群感染的情况、慢性HBV感染者病情反复发作的因素、HCV与肝癌关系、干扰素、Lamivudine的临床治疗观察、基因治疗的应用基础研究，以及中西医结合治疗病毒性肝炎等作了一系列研究。这些技术的改进与研究成果，迅速应用到临床防治工作中，对当前病毒性肝炎诊治工作起到积极的推动作用。

    目前我国病毒性肝炎感染情况仍然很严重。甲型肝炎总流行率为80.9%，乙型肝炎表面抗原携带率为9.75%估计实际人数超过1.2亿，乙型肝炎病毒(HBV)感染总流行率为57.63%。丙型肝炎标化流行率为3.2%，戊型肝炎为17.2%。目前又发现一些新的肝炎病毒，如庚型肝炎病毒(HGV)、TT病毒(TTV)等。感染肝炎病毒后所致慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌是造成众多病人病情不愈、加重及死亡的主要原因。因而，病毒性肝炎的防治研究成为我国疾病控制的重大问题。本室过去5年来，在不断追踪国内外最新研究技术与方法的基础上，创建敏感的诊断技术，积极开展抗病毒治疗，免疫病理研究等，对病毒性肝炎有关的临床热点问题进行了一系列研究观察，现分述如下。

    1 诊断技术

    1.1 改进分子检测技术

    1.1.1 热变性HCV RNA模板直接扩增法技术 彻底提纯样本或充分除去样本中的抑制因子是巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV RNA成功的关键。同时，在处理过程中，如何抑制RNase活性和避免污染也是至关重要的。我科采用直接裂解制备样本进行PCR扩增，加ρ=0.5%硫基乙醇进行热裂解来制备样本，先用300 mg/L的蛋白酶K于55 ℃将血浆消化30 min再进行热变性，离心后，取上清液进行RT-PCR扩增[1～3]。

    本方法与目前常用的酸胍酚一步法比较，其敏感性与特异性一样，检出率相符，本法检测仅需4 h，而酸胍酚法约需36 h，明显缩短了时间。该法操作简便，不易出现污染，由于操作简化，有利推广。

    1.1.2 RT-PCR夹心斑点杂交技术 建立相应的重组体。载体选用P t 7 t 3，将质粒pUN中的HCV 5′端非编码区300 bp的cDNA片段亚克隆到选用载体中。经转化、增殖，M13K07超感染，可从培养上清中制备纯化重组的单链DNA ......