急性脑梗塞患者红细胞膜微粘度改变与脂质过氧化的关系
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吴海琴. 张桂莲. 王玉环. 安良. 贾天成.
参见附件(90kb)。
作者：吴海琴 张桂莲 王玉环 安良 贾天成
单位：(西安医科大学第二附属医院神经内科 西安 710004)
关键词：脑梗塞；红细胞；膜微粘度；丙二醛
西安医科大学学报000214摘要 用荧光偏振法测定了36例急性脑梗塞患者红细胞膜微粘度，同时对血浆MDA、SOD含量进行了测定，并与24例正常人进行比较。结果显示：脑梗塞组红细胞膜微粘度与对照组比较呈显著性升高(P<0.001)，其改变与血浆MDA水平呈正相关，与血浆SOD水平呈负相关。说明脂质过氧化可能是导致急性脑梗塞红细胞膜微粘度增大、红细胞膜脂流动性降低的直接原因之一。
中图分类号 R540.4 文献标识码 A 文章编号 0258-0659(2000)02-0127-02
The relationship between alteration of erythrocytes membrane microviscosity and lipid peroxidation in acute cerebral infarction patients
Wu Haiqin Zhang Guilian Wang Yuhuan
(Department of Neurology ,Second Affiliated Hospital,Xi′an Medical University, Xi′an 710004，China)
ABSTRACT Fluorescence polarization method was used to measure the degree of erythrocytes membrane microviscosity in 36 patients with acute cerebral infarction, the plasma MDA and SOD were also measured, which compared with healthy persons.It was found that the erythrocytes membrane microviscosity of the acute cerebral infarction patients was significantly higher than that of the control group(P<0.001).The increasing degree was positively correlated with MDA and was negatively correlated with SOD.It is indicated that lipid peroxidation was probably a direct factor inducing increase of erythrocyte membrane microviscosity and decrease of erythrocyte membrane fluidity in acute cerebrane infarction patients.
KEY WORDS cerebral infarction erythrocyte membrane microviscosity malonyldialdehyde(MDA)
细胞膜流动性已受到医学领域的重视。研究证实，一些疾病的病理过程中均表现出红细胞膜脂流动性的改变[1，2]。但脑血管疾病的红细胞膜脂流动性和脂质过氧化的关系研究甚少。本文对36例急性脑梗塞患者红细胞膜脂流动性进行了观察，并对其与血浆脂质过氧化最终产物—丙二醛(MDA)和自由基清除剂—超氧化物歧化酶(SOD)的关系做了初步分析。
1 对象和方法
1.1 对象 脑梗塞组，系1996年6～12月在我院神经内科住院患者共36例，男17例，女19例，年龄(54.6±8.3)岁，均符合1995年第四届全国脑血管疾病学术会议通过的诊断标准，并经颅脑CT或MRI证实，均在发病1周内的急性期，已除外有糖尿病和感染者。正常对照组，系同期在我院门诊做健康查体结论正常者共24例，男9例，女15例，年龄(52.5±9)岁。
1.2 方法
1.2.1 红细胞膜制备 取晨间空腹肘静脉血4ml，肝素抗凝，低温离心(3 000r/min)20min，吸取血浆作MDA和SOD测定。去除白细胞层，用等渗磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次，制成红细胞悬液。参考Dodge法制成白色红细胞膜，悬浮于PBS待检。1.2.2 红细胞膜微粘度测定[3，4] 以1.6-diphenyl-1,3,5-hexatrience (DPH,美国Sigma公司产品)为荧光探剂，用MPF-4型(日本日立公司)荧光分光光度计25℃恒温下进行荧光测定。测定条件：激发光波长362nm,发射光波长432nm。按下列公式计算偏振度(ρ)和微粘度(η)。
式中ρ为偏振度；Ivv为起偏器和检偏器光轴均在垂直方向时的荧光强度；Ivh为起偏器光轴在垂直方向，检偏器光轴在平行方向时的荧光强度。G为校正因子。G=Ihv/Ihh，Ihv为起偏器光轴在水平方向，检偏器光轴在垂直方向时的荧光强度；Ihh为起偏器和检偏器光轴均在水平方向时的荧光强度。
式中η为微粘度，0.46为常数。用η定量膜脂流动性，η值越大膜脂流动性越小，反之则流动性越大。
1.2.3 MDA、SOD测定 MDA测定采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法，SOD测定采用黄嘌呤氧化酶法。试剂盒为南京建成生物工程研究所提供，操作步骤按说明书进行。
1.3 统计学处理
两均数比较采用t检验，变量间相关程度采用直线相关分析。
2 结 果
2.1 脑梗塞组和对照组红细胞膜微粘度、血浆MDA和SOD测定结果 见附表。
附表 脑梗塞组与对照组红细胞膜微粘度和血浆MDA、SOD比较(
±s) 组 别
n
η
MDA(μmol/L)
SOD(nu/ml)
脑梗塞组
36
2.381±0.274*
11.437±1.117*
90.512±21.391*
对照组
24
1.913±0.392
4.599±0.821
110.670±17.532
与对照组比较*P<0.001
由附表可见，脑梗塞组红细胞膜微粘度和血浆MDA水平明显高于对照组(P<0.001)，而血浆SOD水平明显低于对照组(P<0.001)。两组中不同性别比较其结果均无差异(P>0.05)。
2.2 相关性分析 脑梗塞组红细胞膜微粘度与血浆MDA水平呈正相关关系(r=0.7351,P<0.01),与血浆SOD水平呈负相关关系(r=-0.7064,P<0.01)。
3 讨 论
本文显示，急性脑硬塞组红细胞膜微粘度明显高于正常对照组(P<0.001)，说明脑梗塞患者红细胞膜微粘度明显增大，膜脂流动性显著降低。缺血性脑血管疾病患者红细胞膜脂流动性降低可影响膜的坦克覆带样运动、膜蛋白酶的活动及红细胞变形能力[5]，被看成是缺血性脑血管病发生发展的一个重要的病理基础。缺血性脑血管病红细胞膜胆固醇含量增加、磷脂降低，胆固醇/磷脂比值升高[6，7]，膜脂质含量中胆固醇/磷脂比值愈大，红细胞膜微粘度就增大，膜脂流动性降低[8]。
红细胞膜脂流动性降低必然与红细胞的宏观机能相关，可直接影响红细胞变形性、通透性、脆性、酶活性以及运输功能，使其变形能力降低，不易通过口径较小的血管，且在通过微循环时容易被破坏并滞留在微循环中，加重微循环血流障碍和组织的缺血损伤[8]。红细胞变形能力降低可诱发血液湍流现象，与层流相比，湍流的最大特点是管壁附近的速度梯度较大，管壁的剪切力增高，容易损伤动脉内膜，加重动脉硬化，促进脑梗塞发生。
本文还提示，急性脑梗塞病例组MDA测定值明显高于对照组(P<0.001)，而SOD测定值明显低于对照组(P<0.001)。其数据的改变明显与脑梗塞组的红细胞微粘度值呈线性相关。已知自由基可使细胞膜结构中的磷脂不饱和脂肪酸过氧化，产生大量的自由基和其分解产物MDA，后二者对细胞都起损伤作用[9]。推测自由基对磷脂的过氧化使膜磷脂含量降低很可能是脑梗塞红细胞膜微粘度增大，膜脂流动性降低的直接原因之一，应引起临床重视。 参考文献
1，左 琳，张之南，陈 清.红细胞膜脂流动性的研究进展[J].生理科学进展，1991；12(3)∶279
2，林克椿，聂松青.细胞膜的流动性[J].生理科学进展，1995；16(1)∶88
3，聂松青，薄惠卿，林克椿.蜂王浆对大鼠红细胞膜流动性的影响[J].北京医学院学报，1983；15(4)∶249
4，Shinitzhy M,Barenhonz Y.Fluidity parameters of lipid regions determined by fluorescene polarisation[J].Biochem Biophys Acta,1978;515(4)∶367
5，Cooper RA.Abnormalities of cell membrane fludity in the pathogenesis o f disease[J].N Engl J Med, 1977;297(7)∶271
6，马焕文，郭述苏，许荣家等.缺血性中风红细胞膜流动性与膜脂质及血脂关系 的研究[J].中风与神经疾病杂志，1998；15(4)∶220
7，朱辉，侯靖边，田新亚等.脑梗塞患者红细胞膜脂代谢与膜流动性、变形性关系 的研究[J].中风与神经疾病杂志，1998；15(3)∶132
8，金水娟，朱文云，佟 松等.红细胞流动性与其膜关系的研究[J].中国病理 生理学杂志，1992；8(5)∶541
9，南登昆，缪鸿石主编.康复医学[M].北京：人民卫生出版社，1997∶23
(1999-06-24收稿 1999-08-10修回)
作者：吴海琴 张桂莲 王玉环 安良 贾天成
单位：(西安医科大学第二附属医院神经内科 西安 710004)
关键词：脑梗塞；红细胞；膜微粘度；丙二醛
西安医科大学学报000214摘要 用荧光偏振法测定了36例急性脑梗塞患者红细胞膜微粘度，同时对血浆MDA、SOD含量进行了测定，并与24例正常人进行比较。结果显示：脑梗塞组红细胞膜微粘度与对照组比较呈显著性升高(P<0.001)，其改变与血浆MDA水平呈正相关，与血浆SOD水平呈负相关。说明脂质过氧化可能是导致急性脑梗塞红细胞膜微粘度增大、红细胞膜脂流动性降低的直接原因之一。
中图分类号 R540.4 文献标识码 A 文章编号 0258-0659(2000)02-0127-02
The relationship between alteration of erythrocytes membrane microviscosity and lipid peroxidation in acute cerebral infarction patients
Wu Haiqin Zhang Guilian Wang Yuhuan
(Department of Neurology ,Second Affiliated Hospital,Xi′an Medical University, Xi′an 710004，China)
ABSTRACT Fluorescence polarization method was used to measure the degree of erythrocytes membrane microviscosity in 36 patients with acute cerebral infarction, the plasma MDA and SOD were also measured, which compared with healthy persons.It was found that the erythrocytes membrane microviscosity of the acute cerebral infarction patients was significantly higher than that of the control group(P<0.001).The increasing degree was positively correlated with MDA and was negatively correlated with SOD.It is indicated that lipid peroxidation was probably a direct factor inducing increase of erythrocyte membrane microviscosity and decrease of erythrocyte membrane fluidity in acute cerebrane infarction patients.
KEY WORDS cerebral infarction erythrocyte membrane microviscosity malonyldialdehyde(MDA)
细胞膜流动性已受到医学领域的重视。研究证实，一些疾病的病理过程中均表现出红细胞膜脂流动性的改变[1，2]。但脑血管疾病的红细胞膜脂流动性和脂质过氧化的关系研究甚少。本文对36例急性脑梗塞患者红细胞膜脂流动性进行了观察，并对其与血浆脂质过氧化最终产物—丙二醛(MDA)和自由基清除剂—超氧化物歧化酶(SOD)的关系做了初步分析。
1 对象和方法
1.1 对象 脑梗塞组，系1996年6～12月在我院神经内科住院患者共36例，男17例，女19例，年龄(54.6±8.3)岁，均符合1995年第四届全国脑血管疾病学术会议通过的诊断标准，并经颅脑CT或MRI证实，均在发病1周内的急性期，已除外有糖尿病和感染者。正常对照组，系同期在我院门诊做健康查体结论正常者共24例，男9例，女15例，年龄(52.5±9)岁。
1.2 方法
1.2.1 红细胞膜制备 取晨间空腹肘静脉血4ml，肝素抗凝，低温离心(3 000r/min)20min，吸取血浆作MDA和SOD测定。去除白细胞层，用等渗磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次，制成红细胞悬液。参考Dodge法制成白色红细胞膜，悬浮于PBS待检。1.2.2 红细胞膜微粘度测定[3，4] 以1.6-diphenyl-1,3,5-hexatrience (DPH,美国Sigma公司产品)为荧光探剂，用MPF-4型(日本日立公司)荧光分光光度计25℃恒温下进行荧光测定。测定条件：激发光波长362nm,发射光波长432nm。按下列公式计算偏振度(ρ)和微粘度(η)。
式中ρ为偏振度；Ivv为起偏器和检偏器光轴均在垂直方向时的荧光强度；Ivh为起偏器光轴在垂直方向，检偏器光轴在平行方向时的荧光强度。G为校正因子。G=Ihv/Ihh，Ihv为起偏器光轴在水平方向，检偏器光轴在垂直方向时的荧光强度；Ihh为起偏器和检偏器光轴均在水平方向时的荧光强度。
式中η为微粘度，0.46为常数。用η定量膜脂流动性，η值越大膜脂流动性越小，反之则流动性越大。
1.2.3 MDA、SOD测定 MDA测定采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法，SOD测定采用黄嘌呤氧化酶法。试剂盒为南京建成生物工程研究所提供，操作步骤按说明书进行。
1.3 统计学处理
两均数比较采用t检验，变量间相关程度采用直线相关分析。
2 结 果
2.1 脑梗塞组和对照组红细胞膜微粘度、血浆MDA和SOD测定结果 见附表。
附表 脑梗塞组与对照组红细胞膜微粘度和血浆MDA、SOD比较(
±s) 组 别n
η
MDA(μmol/L)
SOD(nu/ml)
脑梗塞组
36
2.381±0.274*
11.437±1.117*
90.512±21.391*
对照组
24
1.913±0.392
4.599±0.821
110.670±17.532
与对照组比较*P<0.001
由附表可见，脑梗塞组红细胞膜微粘度和血浆MDA水平明显高于对照组(P<0.001)，而血浆SOD水平明显低于对照组(P<0.001)。两组中不同性别比较其结果均无差异(P>0.05)。
2.2 相关性分析 脑梗塞组红细胞膜微粘度与血浆MDA水平呈正相关关系(r=0.7351,P<0.01),与血浆SOD水平呈负相关关系(r=-0.7064,P<0.01)。
3 讨 论
本文显示，急性脑硬塞组红细胞膜微粘度明显高于正常对照组(P<0.001)，说明脑梗塞患者红细胞膜微粘度明显增大，膜脂流动性显著降低。缺血性脑血管疾病患者红细胞膜脂流动性降低可影响膜的坦克覆带样运动、膜蛋白酶的活动及红细胞变形能力[5]，被看成是缺血性脑血管病发生发展的一个重要的病理基础。缺血性脑血管病红细胞膜胆固醇含量增加、磷脂降低，胆固醇/磷脂比值升高[6，7]，膜脂质含量中胆固醇/磷脂比值愈大，红细胞膜微粘度就增大，膜脂流动性降低[8]。
红细胞膜脂流动性降低必然与红细胞的宏观机能相关，可直接影响红细胞变形性、通透性、脆性、酶活性以及运输功能，使其变形能力降低，不易通过口径较小的血管，且在通过微循环时容易被破坏并滞留在微循环中，加重微循环血流障碍和组织的缺血损伤[8]。红细胞变形能力降低可诱发血液湍流现象，与层流相比，湍流的最大特点是管壁附近的速度梯度较大，管壁的剪切力增高，容易损伤动脉内膜，加重动脉硬化，促进脑梗塞发生。
本文还提示，急性脑梗塞病例组MDA测定值明显高于对照组(P<0.001)，而SOD测定值明显低于对照组(P<0.001)。其数据的改变明显与脑梗塞组的红细胞微粘度值呈线性相关。已知自由基可使细胞膜结构中的磷脂不饱和脂肪酸过氧化，产生大量的自由基和其分解产物MDA，后二者对细胞都起损伤作用[9]。推测自由基对磷脂的过氧化使膜磷脂含量降低很可能是脑梗塞红细胞膜微粘度增大，膜脂流动性降低的直接原因之一，应引起临床重视。 参考文献
1，左 琳，张之南，陈 清.红细胞膜脂流动性的研究进展[J].生理科学进展，1991；12(3)∶279
2，林克椿，聂松青.细胞膜的流动性[J].生理科学进展，1995；16(1)∶88
3，聂松青，薄惠卿，林克椿.蜂王浆对大鼠红细胞膜流动性的影响[J].北京医学院学报，1983；15(4)∶249
4，Shinitzhy M,Barenhonz Y.Fluidity parameters of lipid regions determined by fluorescene polarisation[J].Biochem Biophys Acta,1978;515(4)∶367
5，Cooper RA.Abnormalities of cell membrane fludity in the pathogenesis o f disease[J].N Engl J Med, 1977;297(7)∶271
6，马焕文，郭述苏，许荣家等.缺血性中风红细胞膜流动性与膜脂质及血脂关系 的研究[J].中风与神经疾病杂志，1998；15(4)∶220
7，朱辉，侯靖边，田新亚等.脑梗塞患者红细胞膜脂代谢与膜流动性、变形性关系 的研究[J].中风与神经疾病杂志，1998；15(3)∶132
8，金水娟，朱文云，佟 松等.红细胞流动性与其膜关系的研究[J].中国病理 生理学杂志，1992；8(5)∶541
9，南登昆，缪鸿石主编.康复医学[M].北京：人民卫生出版社，1997∶23
(1999-06-24收稿 1999-08-10修回)
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