雪莲黄酮总甙抑制染色体损伤与SOD活性的相关研究
http://www.100md.com
黄辰. 倪磊. 胡劲松. 王爱英.
雪莲黄酮总甙.染色体畸变.超氧歧化酶.
参见附件(162kb)。
作者：黄辰 倪磊 胡劲松 王爱英
单位：(西安医科大学医学生物学暨遗传学教研室 西安 710061)
关键词：雪莲黄酮总甙；染色体畸变；超氧歧化酶
西安医科大学学报000201 摘 要 用微量全血培养研究雪莲黄酮总甙对染色体的保护作用与SOD活性的相关性。结果显示雪莲黄酮总甙抑制丝裂霉素C(MMC)诱导的淋巴细胞的微核形成和SCE频率，同时促进淋巴细胞SOD活性的增加。统计分析表明，淋巴细胞的微核形成率和SCE频率与SOD活性呈负相关，雪莲黄酮总甙诱导淋巴细胞SOD活性增加是其抑制染色体损伤的重要机制之一。
中图分类号 R968 文献标识码 A 文章编号 0258-0659(2000)02-0093-02
The study of association between the inhibition of chromosome damage and the increase of SOD activity induced by the total flavoroids of saussarea
Huang Chen Ni Lei Hu Jinsong
(Department of Biology and Genetics，Xian Medical University,Xi′an 710061,China)
ABSTRACT Using the method of human whole blood culture, the authors studied the correlation between the inhibition of total flavoroids of saussarea (TFS) on the lymphocytes chromosome damage induced by mitomycin C (MMC) and the increase on the SOD activity of lymphocytes. The results showed that TFS reduced the frequency of lymphocyte micronucleus formation (FLMF) and lymphocyte sister chromatid exchange (SCE) induced by MMC, and increased the SOD activity of lymphocyte. Statistic analysis of results showed that there were negative correlation either between FLMF and SOD activity, or between SCE and SOD activity. The increase of TFS on the SOD activity is an important mechanism of reducing chromosome damages induced by MMC.
KEY WORDS saussarea flavoroids chromosomal aberration superoxide dismutase
雪莲(Saussurea involucrata Kar et Kir. ex Maxim)是菊科青木属多年生草本植物，在我国新疆分布较广，主要用于治疗风湿性关节炎、月经不调、宫寒腹痛等症，具有抗炎的功效。雪莲多糖的药理作用已有研究[1]。研究发现，雪莲黄酮总甙对细胞内遗传物质具有保护作用[2]。本文研究雪莲黄酮总甙抗染色体损伤与SOD活性的相关性。
1 材料与方法
1.1 取材与分组 采无病人员静脉血，分组微量全血培养，37℃48h，加入药物处理。对照及黄酮总甙处理组分别加入5×10-5g/L丝裂霉素C(MMC)，处理组黄酮总甙分组浓度如表1，单位为μg/ml。
1.2 微核标本的制备 按马国建法制备微核标本[3]。每个观察组计数3 000个淋巴细胞，微核标本以‰表示。
1.3 SCE标本的制备 常规制备SCE染色体标本，每组标本计数50个中期分裂细胞，计算每个细胞SCE的发生频率。
1.4 SOD活性测定 用邻苯三酚自氧化法。每min抑制邻苯三酚自氧化率达50%的酶量定义为一个酶单位u。
2 结 果
2.1 雪莲黄酮总甙抑制染色体损伤作用 MMC诱导的淋巴细胞SCE频率随雪莲黄酮总甙浓度的升高而降低；雪莲黄酮总甙明显抑制MMC诱导的淋巴细胞微核形成。所有处理组与对照组在两项指标中都具有显著性差异(见表1)。2.2 雪莲黄酮总甙对MMC处理的血细胞SOD活性的影响 表2显示，雪莲黄酮总甙可以促进血细胞SOD活性增加以及SOD的分泌。培养上清液中SOD活性随雪莲黄酮总甙浓度的提高而升高。统计学处理说明24×10-3g/L处理组与对照组具有显著性差异。而1.2×10-4g/L和6.0×10-4g/L处理组与对照组仅表现为量的差异。
表1 雪莲黄酮总甙抑制MMC对染色体损伤的作用 项 目
雪莲黄酮总甙浓度
0
1.2×10-4g/L
6.0×10-4g/L
24×10-4g/L
SCE频率
20.0±3.9
18.7±2.4
18.7±4.3
15.2±3.2
微核率‰
9.7±2.1
6.0±1.0
5.3±0.6
4.0±1.7
K方检验：处理组与对照组比较P<0.01表2 雪莲黄酮总甙对MMC处理的培养血细胞SOD活性的影响 项 目
雪莲黄酮总甙浓度
0
1.2×10-4g/L
6.0×10-4g/L
24×10-4g/L
上清液(u)
10.2±0.3
12.3±0.8
13.4±1.1*
14.8±0.1*
血细胞(u)
137.2±4.7
150.3±6.5
154.9±9.5
166.1±0.9*
K方检验：*P<0.05
2.3 SOD活性与淋巴细胞SCE频率和微核形成率的相关性 实验显示，雪莲黄酮总甙抑制淋巴细胞SCE频率升高与促进SOD活性具有负相关性，淋巴细胞微核形成率与SOD活性也呈负相关性(表3)。表3 淋巴细胞SCE频率、微核形成率与SOD活性相关分析 指标
直线回归
P
相关系数(r)
P
上清液
y=32.25-1.08x
<0.05
-0.9556
<0.05
上清液
y=17.48-0.77z
<0.05
-0.9801
<0.05
血细胞
y=276.51-6.83x
<0.05
-0.9763
<0.05
血细胞
y=181.83-4.75z
<0.05
-0.9701
<0.05
注：y为SOD活性，x为淋巴细胞SCE频率，z为淋巴细胞微核率
3 讨 论
染色体畸变可分为数量畸变和结构畸变。前者是由于染色体不分离或丢失而形成，后者是由于染色体断裂和重接而形成。大量的研究证明，许多理化因素都能造成染色体的断裂。而在化学因素中，引起染色体断裂的重要因素之一是诱导自由基的形成。
MMC是一种双功能的烷化剂，广泛用于致畸、致突变及抗癌的研究。其作用机理是通过代谢过程产生半醌型自由基、超氧自由基(O-2)和羟自由基(OH)等活性氧而起作用[4]。现已证明MMC诱导淋巴细胞微核形成与自由基具有密切的关系[5]。MMC与DNA具有高亲和力，可以促进DNA断裂，提高染色体SCE频率[6]。
本实验表明，雪莲黄酮总甙明显抑制MMC诱导的淋巴细胞微核形成率，并且降低淋巴细胞SCE频率，同时促进培养液和SOD 活性的增加。相关分析表明，SCE频率和微核形成率与SOD活性之间呈负相关。提示，雪莲黄酮总甙抑制淋巴细胞微核形成和降低淋巴细胞SCE频率与SOD活性具有密切的关系。SCE频率和微核形成率之间具有正相关，表明两者的产生具有相似的机制。
参考文献
1，林秀珍，王国祥.雪莲多糖对离体大鼠子宫的作用[J].药学学报，1986；21(3)∶220
2，黄 辰，宋土生，曹峻岭等.雪莲黄酮总甙的细胞遗传学效应[C].中国医学生物学研究(2).四川：四川科学技术出版社，1998∶225～227
3，马国建，薛开先.一种快速简便的完整的淋巴细胞微核制片法[J].细胞生物学杂志，1989；11(3)∶143
4，莫 简，吕 问，孙淑芳等.医用自由基生物导论[M].第1版，北京：人民卫生出版社，1989∶69～171
5，黄 辰，康朝英，陈 萍等.丝裂霉素C诱导淋巴细胞微核形成的相关研究[J].中华医学遗传学杂志，1995；12(3)∶182
6，陈 瑗，周 玫.自由基医学[M].北京：人民军医出版社，1991；167～222
(1999-07-25收稿 1999-09-17修回)
作者：黄辰 倪磊 胡劲松 王爱英
单位：(西安医科大学医学生物学暨遗传学教研室 西安 710061)
关键词：雪莲黄酮总甙；染色体畸变；超氧歧化酶
西安医科大学学报000201 摘 要 用微量全血培养研究雪莲黄酮总甙对染色体的保护作用与SOD活性的相关性。结果显示雪莲黄酮总甙抑制丝裂霉素C(MMC)诱导的淋巴细胞的微核形成和SCE频率，同时促进淋巴细胞SOD活性的增加。统计分析表明，淋巴细胞的微核形成率和SCE频率与SOD活性呈负相关，雪莲黄酮总甙诱导淋巴细胞SOD活性增加是其抑制染色体损伤的重要机制之一。
中图分类号 R968 文献标识码 A 文章编号 0258-0659(2000)02-0093-02
The study of association between the inhibition of chromosome damage and the increase of SOD activity induced by the total flavoroids of saussarea
Huang Chen Ni Lei Hu Jinsong
(Department of Biology and Genetics，Xian Medical University,Xi′an 710061,China)
ABSTRACT Using the method of human whole blood culture, the authors studied the correlation between the inhibition of total flavoroids of saussarea (TFS) on the lymphocytes chromosome damage induced by mitomycin C (MMC) and the increase on the SOD activity of lymphocytes. The results showed that TFS reduced the frequency of lymphocyte micronucleus formation (FLMF) and lymphocyte sister chromatid exchange (SCE) induced by MMC, and increased the SOD activity of lymphocyte. Statistic analysis of results showed that there were negative correlation either between FLMF and SOD activity, or between SCE and SOD activity. The increase of TFS on the SOD activity is an important mechanism of reducing chromosome damages induced by MMC.
KEY WORDS saussarea flavoroids chromosomal aberration superoxide dismutase
雪莲(Saussurea involucrata Kar et Kir. ex Maxim)是菊科青木属多年生草本植物，在我国新疆分布较广，主要用于治疗风湿性关节炎、月经不调、宫寒腹痛等症，具有抗炎的功效。雪莲多糖的药理作用已有研究[1]。研究发现，雪莲黄酮总甙对细胞内遗传物质具有保护作用[2]。本文研究雪莲黄酮总甙抗染色体损伤与SOD活性的相关性。
1 材料与方法
1.1 取材与分组 采无病人员静脉血，分组微量全血培养，37℃48h，加入药物处理。对照及黄酮总甙处理组分别加入5×10-5g/L丝裂霉素C(MMC)，处理组黄酮总甙分组浓度如表1，单位为μg/ml。
1.2 微核标本的制备 按马国建法制备微核标本[3]。每个观察组计数3 000个淋巴细胞，微核标本以‰表示。
1.3 SCE标本的制备 常规制备SCE染色体标本，每组标本计数50个中期分裂细胞，计算每个细胞SCE的发生频率。
1.4 SOD活性测定 用邻苯三酚自氧化法。每min抑制邻苯三酚自氧化率达50%的酶量定义为一个酶单位u。
2 结 果
2.1 雪莲黄酮总甙抑制染色体损伤作用 MMC诱导的淋巴细胞SCE频率随雪莲黄酮总甙浓度的升高而降低；雪莲黄酮总甙明显抑制MMC诱导的淋巴细胞微核形成。所有处理组与对照组在两项指标中都具有显著性差异(见表1)。2.2 雪莲黄酮总甙对MMC处理的血细胞SOD活性的影响 表2显示，雪莲黄酮总甙可以促进血细胞SOD活性增加以及SOD的分泌。培养上清液中SOD活性随雪莲黄酮总甙浓度的提高而升高。统计学处理说明24×10-3g/L处理组与对照组具有显著性差异。而1.2×10-4g/L和6.0×10-4g/L处理组与对照组仅表现为量的差异。
表1 雪莲黄酮总甙抑制MMC对染色体损伤的作用 项 目
雪莲黄酮总甙浓度
0
1.2×10-4g/L
6.0×10-4g/L
24×10-4g/L
SCE频率
20.0±3.9
18.7±2.4
18.7±4.3
15.2±3.2
微核率‰
9.7±2.1
6.0±1.0
5.3±0.6
4.0±1.7
K方检验：处理组与对照组比较P<0.01表2 雪莲黄酮总甙对MMC处理的培养血细胞SOD活性的影响 项 目
雪莲黄酮总甙浓度
0
1.2×10-4g/L
6.0×10-4g/L
24×10-4g/L
上清液(u)
10.2±0.3
12.3±0.8
13.4±1.1*
14.8±0.1*
血细胞(u)
137.2±4.7
150.3±6.5
154.9±9.5
166.1±0.9*
K方检验：*P<0.05
2.3 SOD活性与淋巴细胞SCE频率和微核形成率的相关性 实验显示，雪莲黄酮总甙抑制淋巴细胞SCE频率升高与促进SOD活性具有负相关性，淋巴细胞微核形成率与SOD活性也呈负相关性(表3)。表3 淋巴细胞SCE频率、微核形成率与SOD活性相关分析 指标
直线回归
P
相关系数(r)
P
上清液
y=32.25-1.08x
<0.05
-0.9556
<0.05
上清液
y=17.48-0.77z
<0.05
-0.9801
<0.05
血细胞
y=276.51-6.83x
<0.05
-0.9763
<0.05
血细胞
y=181.83-4.75z
<0.05
-0.9701
<0.05
注：y为SOD活性，x为淋巴细胞SCE频率，z为淋巴细胞微核率
3 讨 论
染色体畸变可分为数量畸变和结构畸变。前者是由于染色体不分离或丢失而形成，后者是由于染色体断裂和重接而形成。大量的研究证明，许多理化因素都能造成染色体的断裂。而在化学因素中，引起染色体断裂的重要因素之一是诱导自由基的形成。
MMC是一种双功能的烷化剂，广泛用于致畸、致突变及抗癌的研究。其作用机理是通过代谢过程产生半醌型自由基、超氧自由基(O-2)和羟自由基(OH)等活性氧而起作用[4]。现已证明MMC诱导淋巴细胞微核形成与自由基具有密切的关系[5]。MMC与DNA具有高亲和力，可以促进DNA断裂，提高染色体SCE频率[6]。
本实验表明，雪莲黄酮总甙明显抑制MMC诱导的淋巴细胞微核形成率，并且降低淋巴细胞SCE频率，同时促进培养液和SOD 活性的增加。相关分析表明，SCE频率和微核形成率与SOD活性之间呈负相关。提示，雪莲黄酮总甙抑制淋巴细胞微核形成和降低淋巴细胞SCE频率与SOD活性具有密切的关系。SCE频率和微核形成率之间具有正相关，表明两者的产生具有相似的机制。
参考文献
1，林秀珍，王国祥.雪莲多糖对离体大鼠子宫的作用[J].药学学报，1986；21(3)∶220
2，黄 辰，宋土生，曹峻岭等.雪莲黄酮总甙的细胞遗传学效应[C].中国医学生物学研究(2).四川：四川科学技术出版社，1998∶225～227
3，马国建，薛开先.一种快速简便的完整的淋巴细胞微核制片法[J].细胞生物学杂志，1989；11(3)∶143
4，莫 简，吕 问，孙淑芳等.医用自由基生物导论[M].第1版，北京：人民卫生出版社，1989∶69～171
5，黄 辰，康朝英，陈 萍等.丝裂霉素C诱导淋巴细胞微核形成的相关研究[J].中华医学遗传学杂志，1995；12(3)∶182
6，陈 瑗，周 玫.自由基医学[M].北京：人民军医出版社，1991；167～222
(1999-07-25收稿 1999-09-17修回)
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