人颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达导致HeLa细胞凋亡
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王智. 赵晶. 张莉. 温伟红. 王成济. 杨安钢.
颗粒酶B.融合蛋白.HeLa细胞.诱导表达.凋亡.
参见附件(166kb)。
王智. 赵晶. 张莉. 温伟红. 王成济. 杨安钢.
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室. 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 陕西西安710032
【关键词】
颗粒酶B. 融合蛋白. HeLa细胞. 诱导表达. 凋亡.
【发表年期页】
2004,4; 329-332
【摘要】
目的观察诱导表达的颗粒酶B融合蛋白对HeLa细胞形态和生长的作用。方法用重组PCR法将活性型颗粒酶B基因序列的5’端连接绿脓杆菌外毒素(PE)的部分转位肽编码序列。所获融合蛋白基因克隆入pIND诱导表达载体后,与辅助质粒pVgRXR共转染HeLa细胞,经G418和zeocin筛选建系。间接免疫荧光检测蜕皮激素诱导后目的蛋白的表达,并通过电镜、TUNEL染色、细胞计数等方法观察细胞的形态和生长速度的变化。结果建立了可诱导表达人颗粒酶B融合蛋白基因的HeLa细胞系。蜕皮激素诱导后检测到目的蛋白的表达,同时观察到细胞出现多核巨细胞的异常形态,细胞生长受到抑制。电镜
王智. 赵晶. 张莉. 温伟红. 王成济. 杨安钢.
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室. 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 陕西西安710032
【关键词】
颗粒酶B. 融合蛋白. HeLa细胞. 诱导表达. 凋亡.
【发表年期页】
2004,4; 329-332
【摘要】
目的观察诱导表达的颗粒酶B融合蛋白对HeLa细胞形态和生长的作用。方法用重组PCR法将活性型颗粒酶B基因序列的5’端连接绿脓杆菌外毒素(PE)的部分转位肽编码序列。所获融合蛋白基因克隆入pIND诱导表达载体后,与辅助质粒pVgRXR共转染HeLa细胞,经G418和zeocin筛选建系。间接免疫荧光检测蜕皮激素诱导后目的蛋白的表达,并通过电镜、TUNEL染色、细胞计数等方法观察细胞的形态和生长速度的变化。结果建立了可诱导表达人颗粒酶B融合蛋白基因的HeLa细胞系。蜕皮激素诱导后检测到目的蛋白的表达,同时观察到细胞出现多核巨细胞的异常形态,细胞生长受到抑制。电镜
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