体外授精与胚胎移植妊娠成功39例
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2005年11月4日
摘要 采用体外授精与胚胎移植121例，39例妊娠成功，生化妊娠率为32.23%。39例妊娠中有9例自然流产，2例异位妊娠，临床妊娠率为23. 14%。已分娩10例，获15例活产儿。
关键词 不孕 体外授精 胚胎移植
不孕症是近年妇科常见疾病之一，占已婚夫妇的10%左右[1]。自1978年开创了体外授精与胚胎移植(IVF—ET)以来，全世界已广泛采用IVF-ET技术，出生了300000多名试管婴儿。我国此项技术开展较晚，北京医科大学附属第三医院张丽珠等率先在国内获IVF—ET成功(1988年)。我院应用此项技术对121例患者进行助孕治疗，现报道如下。
一、资料与方法
1996年6月至1997年12月，选择121例不孕症患者，经签字同意后开始IVF助孕。年龄≤30岁的57例，31—35岁42例，36—39岁19例，≥40岁3例。输卵管因素致不孕89例(73.55%)，子宫内膜异位症致不孕14例(11.57%)，少精不孕8例(6.61%)，不明原因不孕者10例(8.26%)。诊断依据参照腹腔镜、输卵管碘油造影报告。少精诊断：精
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于密度<20×106/m1(WHO不育夫妇标准检查及诊断手册)。
一、材料
(一)东芝SSD一220A PVG一601V阴道探头超声仪。针导穿刺架WAGV015A。
(二)取卵负压泵：K一MAR一5000(COOK)。K—OPS一2035一RWHl6G，K—OPS一1635—16G取卵针。
(三)超纯水仪：EASY Pure UV/UF，EASYPure RF(USA)。
(四)C02培养箱。Nuaire Nu-2500E，Heraeus—BBl6。
(五)DPBS(Sigma)，HTF培养液(自配，调渗透压284-285mOsm/Kg.H02)。
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(六)胚胎移植导管：K—JET一3205(COOK)，T.D，T，K—SOFT一3011，K—PETS一4031。
二、方法
IVF之前采用PCR检查每例不孕症者支原体、衣原体感染(PCRKit上海复华生物医学工程公司)。用宫腔探针检查于宫腔深度及方位(K—SOFT一3300，COOK)。
(一)控制性超排卵(COH)
121例病人均进行COH治疗。从使用促性腺激素(Gn)治疗周期前的黄体期开始(月经周期第21天)用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)，使用Buserelin(Hoechest)0.9mg/天。对于正常反应者(FSH<3mmo1/m1，E2<296.0pmol/L，子宫内膜厚度小于O.5cm，双侧卵巢卵泡<0.5cm＝，月经第5天起使用FSH(Serono公司，Metrodin)，直至注射hCG时停止。初使用150—2251U/天。在用FSH第5天起连续B超监测双侧卵巢被刺激发育的卵泡数及于宫内膜，同时连续测定血清E2。当主导卵泡直径达18mm以上时，停用Gn。给hCGl0000IU(Profasi，Serono)。36小时后通过阴道超声引导穿刺取卵。
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(二)体外授精培养及移植
选出的卵在显微镜下需对其成熟度做出评估，分为成熟、未成熟、过熟型[2]。
获得的卵母细胞在含10%血清的HTF液中，置5%CO2培养箱37℃培养2—6小时后加精子体外授精。调整精子浓度为50000—100000/卵母细胞。在授精16—20小时后，观察原核及第二极体出现。将授精的胚胎继续培养至72小时(HTF液)。移植胚胎前对胚胎质量进行评估。Ⅰ级胚胎：卵裂球大小相等，没有碎片。Ⅱ级胚胎：卵球大小相等，有小于细胞团1/3的少许碎片。Ⅲ级胚胎：卵裂球大小不均匀，碎片少许或无。Ⅳ级胚胎：碎片多于细胞团1/3，卵裂球大小相同或不匀。Ⅴ级胚胎：大量碎片，无核或1—2个大小不一的卵裂球。
选择Ⅰ—Ⅲ级胚胎2—5个置入含75%血清的培养液中(HTF)，移植入子宫腔中。病人卧床休息1—3小时。移植14天后尿检hCG判断妊娠。其间应用hCG/黄体酮支持黄体治疗。
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二、结果
IVF—ET助孕结果，见表1，表2，表3。
表1 121例不孕症IVE-ET结果
年龄(岁)例数 取卵数 授精卵(数) 卵裂数 妊娠(例)
≤30 57 550 432 367 21
31-35 42 324 241 192 14
36-39 19 72 42 32 3
>40 3 7 4 4 1
表2 39例妊娠结局
年龄(岁) 生化妊娠(例)临床妊娠(例)自然流产(例)异位妊娠(例)
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≤30 21 17 4
31-35 14 9 3 2
36-39 3 2 1
>40 1 1 1
表3 10例IVF-ET生产情况
病历号 孕周 胎儿情况 分娩方式 新生儿体重(g) Apgar评分
1 34 双胎 剖宫产 2100/2300 8/8
2 40 单胎 剖宫产 2800 10
3 39 双胎 剖宫产 2300/2400 10/10
4 36 三胎 剖宫产 1900/1600/1700 8/9/8
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5 34 单胎 剖宫产 3500 10
6 39 单胎 剖宫产 3850 10
7 38 双胎 自然分娩 2400/2500 10/10
8 37 单胎 剖宫产 2750 10
9 39 单胎 剖宫产 3100 10
10 38 单胎 剖宫产 3000 10
三、讨论
多数经验表明，应用IVF一ET治疗不孕症在年龄较小且是第一次者成功率最高。本组资料≤30岁病例中生化妊娠率为36.84%，临床妊娠率为29.82%。31—35岁病例中生化妊娠率为33.33%，临床妊娠率为21.42%。大于36岁病例生化妊娠率为18.18%，临床妊娠率为13.63%。这与年龄增大后卵泡数目减少且卵母细胞质量下降和剩余的卵泡对FSH不敏感有关。因此，Edwards和Steptoe建议，在原发不孕的治疗中应把IVF—ET技术做为首选治疗方案，失败者再用其他方法治疗[3] 。
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COH中应用GnRH一α降调节的目的是有效地防止卵泡过早黄素化，改善卵泡生长发育同步化，增加高质量卵子。在使用GnRH—α垂体降调节后，必须在垂体达到完全降调节的标准后启动FSH。在启用FSH之后，需要经过4—5天才能达到稳定的血浓度。因此，FSH使用5天后，可根据卵泡生长发育及E2水平作适度调整。基于卵泡早期主要是依赖FSH的水平，故FSH起始用量我们主张150—225IU/天，37岁以上不孕者可用300IU一450IU/天。
IVF—ET成功率受多种因素影响。国内因条件限制，通常使用Earle’s液作为IVF的培养液。而Earle’s液不能提供胚胎发育2—4细胞期后所需要的营养。所以国内IVF中胚胎移植时间均在取卵后48小时完成。但在IVF中，50%以上的胚胎4—8细胞可发生阻断现象[4]。由于胚胎在体外培养条件下生长速度侵于体内。而取卵后授精48小时的胚胎为4—6细胞朔，此时移植入子宫腔的胚胎着床率较低。因此我们采用HTF(拟人输卵管液)培养液，对卵母细胞授精后培养至8—16细胞期胚胎再移植回子宫腔。因HTF培养液可以满足8—16细胞期胚胎营养[5]。因此，可以提高IVF的成功率。目前，已有采用其培养系统培养胚胎至囊胚期移植使成功率达到50%左右的报道[6]。所以体外培养液条件是影响IVF—ET成功率的重要因素之一。
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移植胚胎数目，国内趋于4—6个胚胎。我们认为，胚胎质量I级时，可移植2—4个胚胎。若胚胎质量差于I级，可移植5个胚胎。胚胎移植是整个IVF工作中最后和最重要的一个环节，移植液体总量为10—30μl。本文使用含75%血清的HTF液移植，是利用75%血清比重大，使移植入子宫腔内的胚胎迅速沉积在子宫内膜上，可能有助于移植后的胚胎着床。
胚胎移植后应常规支持黄体。虽然用hCG支持黄体可能诱发卵巢过度刺激综合征，但在我们的方案中，对取卵时E2大于7400pmpl/L，卵泡数多于15个的病例才不用hCG，仅用黄体酮支持。对其他病例均用HCG2000IU(Profasi，Serono)每2天1次，共用6000IU，同时加用黄体酮。
IVF—ET成功者的分娩方式中，本文除1例自然分娩外，其余均副宫产。本文资料中均为活胎，但多胎中新生儿体重除一个胎儿2500g外余均低于2500g。所以IVF—ET时对胚胎移植数目应该有所控制。欧州及美国的部份实验室IVF—ET规定放置2—3个胚胎。其结果是降低了多胎的发生率，提高了新生儿质量。, 百拇医药
关键词 不孕 体外授精 胚胎移植
不孕症是近年妇科常见疾病之一，占已婚夫妇的10%左右[1]。自1978年开创了体外授精与胚胎移植(IVF—ET)以来，全世界已广泛采用IVF-ET技术，出生了300000多名试管婴儿。我国此项技术开展较晚，北京医科大学附属第三医院张丽珠等率先在国内获IVF—ET成功(1988年)。我院应用此项技术对121例患者进行助孕治疗，现报道如下。
一、资料与方法
1996年6月至1997年12月，选择121例不孕症患者，经签字同意后开始IVF助孕。年龄≤30岁的57例，31—35岁42例，36—39岁19例，≥40岁3例。输卵管因素致不孕89例(73.55%)，子宫内膜异位症致不孕14例(11.57%)，少精不孕8例(6.61%)，不明原因不孕者10例(8.26%)。诊断依据参照腹腔镜、输卵管碘油造影报告。少精诊断：精
, http://www.100md.com
于密度<20×106/m1(WHO不育夫妇标准检查及诊断手册)。
一、材料
(一)东芝SSD一220A PVG一601V阴道探头超声仪。针导穿刺架WAGV015A。
(二)取卵负压泵：K一MAR一5000(COOK)。K—OPS一2035一RWHl6G，K—OPS一1635—16G取卵针。
(三)超纯水仪：EASY Pure UV/UF，EASYPure RF(USA)。
(四)C02培养箱。Nuaire Nu-2500E，Heraeus—BBl6。
(五)DPBS(Sigma)，HTF培养液(自配，调渗透压284-285mOsm/Kg.H02)。
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(六)胚胎移植导管：K—JET一3205(COOK)，T.D，T，K—SOFT一3011，K—PETS一4031。
二、方法
IVF之前采用PCR检查每例不孕症者支原体、衣原体感染(PCRKit上海复华生物医学工程公司)。用宫腔探针检查于宫腔深度及方位(K—SOFT一3300，COOK)。
(一)控制性超排卵(COH)
121例病人均进行COH治疗。从使用促性腺激素(Gn)治疗周期前的黄体期开始(月经周期第21天)用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)，使用Buserelin(Hoechest)0.9mg/天。对于正常反应者(FSH<3mmo1/m1，E2<296.0pmol/L，子宫内膜厚度小于O.5cm，双侧卵巢卵泡<0.5cm＝，月经第5天起使用FSH(Serono公司，Metrodin)，直至注射hCG时停止。初使用150—2251U/天。在用FSH第5天起连续B超监测双侧卵巢被刺激发育的卵泡数及于宫内膜，同时连续测定血清E2。当主导卵泡直径达18mm以上时，停用Gn。给hCGl0000IU(Profasi，Serono)。36小时后通过阴道超声引导穿刺取卵。
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(二)体外授精培养及移植
选出的卵在显微镜下需对其成熟度做出评估，分为成熟、未成熟、过熟型[2]。
获得的卵母细胞在含10%血清的HTF液中，置5%CO2培养箱37℃培养2—6小时后加精子体外授精。调整精子浓度为50000—100000/卵母细胞。在授精16—20小时后，观察原核及第二极体出现。将授精的胚胎继续培养至72小时(HTF液)。移植胚胎前对胚胎质量进行评估。Ⅰ级胚胎：卵裂球大小相等，没有碎片。Ⅱ级胚胎：卵球大小相等，有小于细胞团1/3的少许碎片。Ⅲ级胚胎：卵裂球大小不均匀，碎片少许或无。Ⅳ级胚胎：碎片多于细胞团1/3，卵裂球大小相同或不匀。Ⅴ级胚胎：大量碎片，无核或1—2个大小不一的卵裂球。
选择Ⅰ—Ⅲ级胚胎2—5个置入含75%血清的培养液中(HTF)，移植入子宫腔中。病人卧床休息1—3小时。移植14天后尿检hCG判断妊娠。其间应用hCG/黄体酮支持黄体治疗。
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二、结果
IVF—ET助孕结果，见表1，表2，表3。
表1 121例不孕症IVE-ET结果
年龄(岁)例数 取卵数 授精卵(数) 卵裂数 妊娠(例)
≤30 57 550 432 367 21
31-35 42 324 241 192 14
36-39 19 72 42 32 3
>40 3 7 4 4 1
表2 39例妊娠结局
年龄(岁) 生化妊娠(例)临床妊娠(例)自然流产(例)异位妊娠(例)
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≤30 21 17 4
31-35 14 9 3 2
36-39 3 2 1
>40 1 1 1
表3 10例IVF-ET生产情况
病历号 孕周 胎儿情况 分娩方式 新生儿体重(g) Apgar评分
1 34 双胎 剖宫产 2100/2300 8/8
2 40 单胎 剖宫产 2800 10
3 39 双胎 剖宫产 2300/2400 10/10
4 36 三胎 剖宫产 1900/1600/1700 8/9/8
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5 34 单胎 剖宫产 3500 10
6 39 单胎 剖宫产 3850 10
7 38 双胎 自然分娩 2400/2500 10/10
8 37 单胎 剖宫产 2750 10
9 39 单胎 剖宫产 3100 10
10 38 单胎 剖宫产 3000 10
三、讨论
多数经验表明，应用IVF一ET治疗不孕症在年龄较小且是第一次者成功率最高。本组资料≤30岁病例中生化妊娠率为36.84%，临床妊娠率为29.82%。31—35岁病例中生化妊娠率为33.33%，临床妊娠率为21.42%。大于36岁病例生化妊娠率为18.18%，临床妊娠率为13.63%。这与年龄增大后卵泡数目减少且卵母细胞质量下降和剩余的卵泡对FSH不敏感有关。因此，Edwards和Steptoe建议，在原发不孕的治疗中应把IVF—ET技术做为首选治疗方案，失败者再用其他方法治疗[3] 。
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COH中应用GnRH一α降调节的目的是有效地防止卵泡过早黄素化，改善卵泡生长发育同步化，增加高质量卵子。在使用GnRH—α垂体降调节后，必须在垂体达到完全降调节的标准后启动FSH。在启用FSH之后，需要经过4—5天才能达到稳定的血浓度。因此，FSH使用5天后，可根据卵泡生长发育及E2水平作适度调整。基于卵泡早期主要是依赖FSH的水平，故FSH起始用量我们主张150—225IU/天，37岁以上不孕者可用300IU一450IU/天。
IVF—ET成功率受多种因素影响。国内因条件限制，通常使用Earle’s液作为IVF的培养液。而Earle’s液不能提供胚胎发育2—4细胞期后所需要的营养。所以国内IVF中胚胎移植时间均在取卵后48小时完成。但在IVF中，50%以上的胚胎4—8细胞可发生阻断现象[4]。由于胚胎在体外培养条件下生长速度侵于体内。而取卵后授精48小时的胚胎为4—6细胞朔，此时移植入子宫腔的胚胎着床率较低。因此我们采用HTF(拟人输卵管液)培养液，对卵母细胞授精后培养至8—16细胞期胚胎再移植回子宫腔。因HTF培养液可以满足8—16细胞期胚胎营养[5]。因此，可以提高IVF的成功率。目前，已有采用其培养系统培养胚胎至囊胚期移植使成功率达到50%左右的报道[6]。所以体外培养液条件是影响IVF—ET成功率的重要因素之一。
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移植胚胎数目，国内趋于4—6个胚胎。我们认为，胚胎质量I级时，可移植2—4个胚胎。若胚胎质量差于I级，可移植5个胚胎。胚胎移植是整个IVF工作中最后和最重要的一个环节，移植液体总量为10—30μl。本文使用含75%血清的HTF液移植，是利用75%血清比重大，使移植入子宫腔内的胚胎迅速沉积在子宫内膜上，可能有助于移植后的胚胎着床。
胚胎移植后应常规支持黄体。虽然用hCG支持黄体可能诱发卵巢过度刺激综合征，但在我们的方案中，对取卵时E2大于7400pmpl/L，卵泡数多于15个的病例才不用hCG，仅用黄体酮支持。对其他病例均用HCG2000IU(Profasi，Serono)每2天1次，共用6000IU，同时加用黄体酮。
IVF—ET成功者的分娩方式中，本文除1例自然分娩外，其余均副宫产。本文资料中均为活胎，但多胎中新生儿体重除一个胎儿2500g外余均低于2500g。所以IVF—ET时对胚胎移植数目应该有所控制。欧州及美国的部份实验室IVF—ET规定放置2—3个胚胎。其结果是降低了多胎的发生率，提高了新生儿质量。, 百拇医药