第32 卷

    2004 年6 月

    分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第6 期

    719～723

    痕量还原性辅酶I 的抑制荧光法测定

    陈亚红 蔡汝秀

    3

    (武汉大学化学与分子科学学院,武汉430072)

    摘 要 基于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(简称辅酶I ,NADH) 对血红蛋白催化H2O2 氧化L2酪氨酸的反应具有

    强烈的抑制作用,提出了一种新的测定NADH 的荧光分析法。该方法灵敏,简单,其线性范围为5. 0 ×10 - 8～

    2. 0 ×10 - 6 mol/ L ;检出限为2. 0 ×10 - 8 mol/ L 。进一步探讨了NADH 对血红蛋白催化反应的抑制机理,其抑

    制类型属于竞争性抑制。

    关键词 辅酶Ⅰ,抑制荧光法,血红蛋白

    2003207214 收稿;2003212208 接受

    本文系国家自然科学基金资助项目(No. 20275027)

    1 引 言

    烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(简称辅酶Ⅰ,NADH) 广泛存在于一切动物、植物和微生物的活细胞中,是

    目前已知的300 多种脱氢酶的辅酶;同时,它也是许多生物氧化还原电子传递链中的重要物质,对活化

    生物体内多酶系统,促进核酸、蛋白、多糖的合成和代谢,增加物质转运和调控,改善代谢功能有重要作

    用1 。因此,建立准确、灵敏、简单的NADH 测定方法在生物、生命和生理过程研究方面有重要的意义。

    目前测定NADH 大多采用电化学法2 ～4 ,分光光度法5 及化学发光法6 ,7 等。但这些方法有的灵敏度

    较低,有的操作比较繁琐。

    NADH 是一种强荧光物质,其最大激发波长和发射波长分别为340 和460 nm ,而NAD + 则无荧光。

    NADH 的这一特性为其荧光分析法奠定了基础,因而很早就建立了NADH 的荧光测定法8 ,但方法的

    灵敏度较低。间接法则是在吩嗪甲酰硫酸酯或心肌黄酶存在下,NADH 将无荧光的刃天青还原为强荧

    光的试卤灵,再测定后者的荧光9 。该法比利用NADH 自身荧光的直接测定法灵敏度显著提高,能够

    分析2 ×10 - 7～2 ×10 - 5 mol/ L 的NADH。随后Zhou 等10 改进了此测定方法,联用NADH 氧化酶 ......