阻抑速差催化光度法测定痕量色氨酸和酪氨酸
第32 卷
2004 年8 月
分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第8 期
1067～1069
阻抑速差催化光度法测定痕量色氨酸和酪氨酸
孙衍华1 杨景芝
3 2 周 杰1 付 蕾1
(山东农业大学化学与材料科学学院1 ,生命科学学院2 ,泰安271018)
摘 要 研究了色氨酸、酪氨酸在硫酸环境中抑制碘对亚砷酸与硫酸铈氧化还原反应的催化作用及动力学
条件。在0. 001 mol/ L Ce(SO4) 2 ,0. 00125 mol/ L As2O3 ,0. 013 mg/ L KI ,0. 025 g/ L 和0. 25g/ L NaCl 溶液中
测定色氨酸和酪氨酸,其线性范围分别为0. 0～0. 65 mg/ L , 0. 0～4. 0 mg/ L 和0. 0～1. 3 mg/ L , 0. 10～4. 0
mg/ L ,用联立方程分别求出各自含量。用此法对醇溶蛋白质和混合氨基酸溶液中色氨酸和酪氨酸进行测定,混合氨基酸的色氨酸、酪氨酸测量值为0. 8037 g/ L , 3. 591 g/ L ; 蛋白质的色氨酸、酪氨酸测量值为1. 8 g/ kg、3. 43 g/ kg ; 回收率在88 %～109 %;色氨酸和酪氨酸的RSD 分别为4. 8 %和5. 2 % ,结果满意。
关键词 阻抑2催化光度法,蛋白质, 复合氨基酸, 色氨酸, 酪氨酸
2003208210 收稿;2004203222 接受
1 引 言
色氨酸( Trp) 和酪氨酸( Tyr) 是人和动物必需的氨基酸,Trp 又是限制性氨基酸,对其测定具有重要
意义。蛋白质和混合氨基酸中的Trp 和Tyr 的测定方法主要有荧光法1 ～3 ,双波长紫外光度法4 ,液
相色谱法5 ,毛细管电泳法6 等。这些方法中所用仪器较贵,且色氨酸与酪氨酸往往相互干扰。本法
利用Trp 和Tyr 与I2 作用,降低了I2 浓度,使I - 催化As3 +2Ce4 + 反应速率减慢。又利用NaCl 对上述催
化反应的影响,可求得不同浓度NaCl 溶液中的Trp 和Tyr 的吸光系数,用多组分吸光度加合原理,建立
联立方程求得Trp 和Tyr 的含量。研究发现苯丙氨酸、组氨酸和其他氨基酸均不干扰测定。这种利用
催化反应速率、不经分离测定蛋白质和混合氨基酸中Trp 和Tyr 的方法,灵敏度高,所用仪器简单。
2 实验部分
2. 1 仪器和试剂
UNICOUV2000 分光光度计(尤尼柯(上海) 仪器有限公司) ;恒温水浴。试剂皆为分析纯。0. 13
mg/ L KI ,0. 5 g/ L 和5 g/ L NaCl , 5 g/ L 马钱子碱(含3 mL 冰乙酸) ,4. 5 mol/ L H2SO4 ,1 mg/ L 、2 mg/
L Trp ,5 mg/ L 、10 mg/ L Tyr ,0. 025 mol/ L As2O3 ,0. 02 mol/ L Ce (SO4) 2 。
2. 2 实验方法
在若干支25 mL 比色管中,均加入0. 13 mg/ L KI 1. 0 mL , 4. 5 mol/ L H2SO4 0. 5 mL 、0. 025 mol/ L
As2O3 0. 5 mL 、0. 5 g/ L (或5 g/ L) NaCl 0. 5 mL 溶液,加入标准样品(或样品) ,加蒸馏水至9 mL 。同时
作空白实验。30 ℃±0. 2 ℃水浴5 min ,依次加入0. 02 mol/ L Ce (SO4) 2 0. 5 mL ,计时(每管间隔30 s) ,立刻摇匀,放水浴中,至第一支管16 min (或12 min ) 时,依次加入5 g/ L 马钱子碱0. 5 mL ,立刻摇匀,每管间隔30 s ,全部加完后,皆放入沸水浴,煮沸5 min ,取出冷至室温,用520 nm 波长,1 cm 比色皿,以
蒸馏水为参比,测定吸光度A 。
3 结果与讨论
3. 1 酸度条件的选择
测定液中Trp 和Tyr 分别为0. 6 mg/ L 和3. 0 mg/ L ,在0. 1～0. 5 mol/ L H2SO4 范围内测定, 结果
表明:随酸度的改变,阻抑速差变化不大。本法选择4. 5 mol/ L H2SO4 0. 5 mL 。
3. 2 NaCl 用量
Cl - 能加快As3 +2Ce4 + 反应速率,且是本法测定Trp 和Tyr 吸光系数的条件,加入量必须准确无误。
用0. 1～1. 0 mg/ L Trp 和0. 5～10 mg/ L Tyr 在0. 025～1. 3 g/ L NaCl 溶液中测定,结果表明:随NaCl
浓度增大,阻抑速差降低;当NaCl 低于0. 025 g/ L 时,阻抑速差增大,但重现性、稳定性差;NaCl 高于1
g/ L 时,阻抑速差小。本法选用NaCI 为0. 025 g/ L 或0. 25 g/ L 。
3. 3 KI 用量选择
KI 是As3 +2Ce4 + 反应的催化剂,KI 浓度对催化反应速率影响显著。在KI 浓度为0. 013～0. 039
mg/ L 范围内测定Trp 和Tyr ,结果KI 浓度在0. 039 mg/ L 时,阻抑速差几乎为零,以致无法测定Trp
和Tyr 。本法选用KI 浓度为0. 013 mg/ L 。
3. 4 反应温度和反应时间的选择
用NaCI 浓度为0. 025 和0. 25 g/ L ,Trp 、Tyr 分别为0. 0～1. 0 、0. 0～10. 0 mg/ L ,在18 ℃、20 ℃、25 ℃和30 ℃测定,结果随温度的增加阻抑速差增大,灵敏度增加。本法选用30 ℃±0. 2 ℃为宜。反应时
间为16 或12 min ,低于8 min 或高于20 min ,误差明显增大。
3. 5 标准曲线和联立方程的建立
在0. 025 g/ L NaCI 溶液中,测定0. 0～0. 6 mg/ L Trp 和0. 0～6. 5 mg/ L Tyr ,得吸光度A1 ,Trp和A1 ,Tyr ,回归方程分别为: A1 , Trp = 0. 766 C1 + 0. 139 , A1 ,Tyr = 0. 1325 C2 + 0. 1395 , rTrp = 0. 9975 , rTyr = 0. 9994 ,线性
范围分别为0. 0～0. 65 和0. 0～4. 0 mg/ L ; A1 , Trp 、A1 ,Ty r分别减去空白得加合方程为A1 = 0. 766 C1 + 0.
1325 C2 。
在0. 25 g/ L NaCI 溶液中,反应12 min ,其他条件同上,可得A 2 ,Trp = 0. 2889 C1 + 0. 176 , A 2 ,Tyr =
010346 C2 + 0. 0183 , r Trp = 0. 9994 , r Tyr = 0. 9955 ,线性范围分别为0. 0～1. 3 mg/ L 和0. 1～4. 0 mg/ L ,加合方程为A 2 = 0. 2889 C1 + 0. 0346 C2 。联立方程为
A 1 = 0. 766 C1 + 0. 1325 C2
A 2 = 0. 2889 C1 + 0. 0346 C2
将A 1 和A 2 代入方程解之,求得C1 和C2 。
3. 6 方法的精密度和灵敏度
Trp 和Tyr 浓度分别为0. 4 和4. 0 mg/ L 的混合溶液,分别在0. 025 和0. 25 g/ L NaCl 溶液中各做
6 份平行,按联立方程求得C1 和C2 ,经计算得相对标准偏差(RSD) 为2. 3 %和4. 6 % ,摩尔吸光系数在
01025 g/ L NaCl 溶液中,εTrp = 1. 56 ×105 L·mol - 1·cm- 1 、εTyr = 2. 41 ×104 L·mol - 1·cm- 1 ;在0. 25 g/ L
NaCl 溶液中,εTrp = 5. 90 ×104 L·mol - 1·cm- 1 、εTyr = 6. 29 ×103L·mol - 1·cm- 1 ,符合光度法的要求。
3. 7 某些离子和氨基酸的影响
在要求相对误差< ±5 %的情况下,15 倍量的K+ 、Na + 、Mg2 + 、Ca2 + 、Zn2 + ,8 倍量的NH+
4 不干扰
测定,1 mg/ L 的Hg2 + 、Ag + 、Cr3 + 、Pb2 + 有干扰,所分析的样品中无Hg2 + 、Ag + 、Cr3 + 、Pb2 + 存在,不影响
测定;12. 5 倍的亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、蛋氨酸、组氨酸,2 倍的苯丙氨酸不干扰Trp 和Tyr 的测定。
3. 8 试样分析
按文献7 在14 种氨基酸中再加入0. 38 g/ L 酪氨酸,稀释380 倍,取2 mL 按实验方法,在0. 025
和0. 25 g/ L NaCl 溶液中测定。另取玉米的醇溶蛋白0. 1240 g ,加100 g/ L KOH 3. 1 mL ,40 ℃水解24
h ,快速加温至80 ℃,10 min ,速冷至室温,加蒸馏水约为70 mL ,定容至100 mL ,取25. 0 mL ,加4. 5
mol/ L H2SO4 调pH≈7 ,过滤,滤液定容至50 mL ,取3. 0 mL 用于测定,混合氨基酸的Typ 、Try 测量值
分别为018037 g/ L 、31591 g/ L ;醇溶蛋白的Typ 、Try 测量值分别为1. 8 g/ kg、3. 43 g/ kg。并做了标准
加入回收实验,结果见表1 。回收率在88 %～109 % ,Trp 和Tyr 的RSD 分别为4. 8 %和5. 2 %。
8 6 0 1 分析化学第32 卷
表1 样品溶液回收实验结果( n = 6)
Table 1 Recovery results of sample solutions ( n = 6)
样品
Samples
平均值
Mean
(mg/ L)
加入量
Added
(mg/ L)
测得总量
Total found
(mg/ L)
回收率
Recovery
( %)
混合氨基酸液
Mix amino acid
Trp 0. 423
0. 20
0. 30
0. 599 0. 605 0. 640
0. 709 0. 744
88. 0 91. 0 108. 5
95. 3 107. 0
Tyr 1. 89
1. 00
1. 50
2. 820 2. 980
3. 435 3. 495
93. 0 109. 0
103. 0 107. 0
蛋白质
Protein
Trp 0. 337
0. 20
0. 30
0. 496 0. 526
0. 609 0. 644
92. 5 98. 6
95. 6 101. 1
Tyr 0. 634
2. 00
3. 00
2. 677 2. 653
3. 608 3. 621
106. 9 103. 1
96. 0 98. 0
Try : 色氨酸(tryptphan) ; Tyr : 酪氨酸(tyrosine)
References
1 Chen Guozhen (陈国珍) . Fluorescent A nalysis (荧光分析法) . Beijing (北京) , Science Press of China (科学出版社) ,1975 : 258～259
2 Huang Xianzhi (黄贤智) , Xu Jingou(许金钩) . Chinese J . A nal . Chem. (分析化学) , 1987 ,15 (3) : 199～202
3 Nozaki Y. A rch. Biochem. Biophys. , 1990 , 277 (2) : 324～333
4 Zhang Shunmei (张顺妹) , You Shilong(尤时龙) . China Medical Science Indust ry Magaz ine (中国医学工业杂志) ,1990 ,21 (11) : 511～513
5 Ding Yayun (丁雅韵) , Xie Mengxia (谢孟峡) , Kang J uan (康 娟) . Chinese J . A nal . Chem. (分析化学) , 2002 , 30
(4) : 418～421
6 Wang Hui (王 辉) , Dai Zhongpeng (戴忠鹏) , Wang Li (王 利) , Bai Jiling (白吉玲) , Lin Bingcheng (林炳承) .
Chinese J . A nal . Chem. (分析化学) , 2002 , 30 (6) : 665～669
7 Zhang Aizhi (张爱知) ,Lu Jiaming(陆家明) , Jiang Wuhan(蒋武汉) . Practical Pharmaceuticals Handbooks (实用药物手
册) . Shanghai (上海) : Shanghai Science Technology Press(上海科学技术出版社) , 1987 : 540～541
Determination of Trace Tryptophan and Tyrosine by
Catalytic Spectrophotometry
Sun Yanhua1 , Yang Jingzhi
3 2 , Zhou Jie1 , Fu Lei1
( College of Chemist ry and Material Science1 , College of L if e Science2 ,S handong A gricultural University , Tai′an 271018)
Abstract The kinetic conditions for the inhibitory effect of t ryptophan and tyrosine on the catalysis of io2
dide anion on the arsenous acid2cerium ( IV) sulfate reaction in sulfuric acid medium were studied. The u2
nited equation was established for the determination of t ryptophan and tyrosine in 0. 001 mol/ L Ce (SO4) 2 ,0. 00125 mol/ L As2O3 , 01013 mg/ L KI , 0. 225 mol/ L H2SO4 , 0. 025 g/ L and 0. 25 g/ L NaCl solution ,the linear response range are 0. 0～0. 65 mg/ L 、0. 0～4. 0 mg/ L and 0. 0～1. 3 gm/ L , 0. 10～4. 0 mg/ L.
The content s of two analytes were obtained respectively by solving the united equations. The method has
been applied to determine t ryptophan and tyrosine in protein and amino acid mixture with satisfactory re2
sult s. The measured value of Trp and Tyr are 0. 8037 g/ L and 3. 591 g/ L in amino acid mixture are 1. 8 g/
kg and 3. 43 g/ kg in protein. The rate of recovery are 88 %～109 %. The relative standard deviation are 4.
8 % and 5. 2 % of t ryptophan and tyrosine.
Keywords Catalytic spect rophotomet ry , protein , amino acid mixture , t ryptophan , tyrosine
(Received 10 August 2003 ; accepted 22 March 2004)
9 6 0 1 第8 期孙衍华等:阻抑速差催化光度法测定痕量色氨酸和酪氨酸, 百拇医药(孙衍华1 杨景芝2 周 杰1 付 蕾1)
2004 年8 月
分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第8 期
1067～1069
阻抑速差催化光度法测定痕量色氨酸和酪氨酸
孙衍华1 杨景芝
3 2 周 杰1 付 蕾1
(山东农业大学化学与材料科学学院1 ,生命科学学院2 ,泰安271018)
摘 要 研究了色氨酸、酪氨酸在硫酸环境中抑制碘对亚砷酸与硫酸铈氧化还原反应的催化作用及动力学
条件。在0. 001 mol/ L Ce(SO4) 2 ,0. 00125 mol/ L As2O3 ,0. 013 mg/ L KI ,0. 025 g/ L 和0. 25g/ L NaCl 溶液中
测定色氨酸和酪氨酸,其线性范围分别为0. 0～0. 65 mg/ L , 0. 0～4. 0 mg/ L 和0. 0～1. 3 mg/ L , 0. 10～4. 0
mg/ L ,用联立方程分别求出各自含量。用此法对醇溶蛋白质和混合氨基酸溶液中色氨酸和酪氨酸进行测定,混合氨基酸的色氨酸、酪氨酸测量值为0. 8037 g/ L , 3. 591 g/ L ; 蛋白质的色氨酸、酪氨酸测量值为1. 8 g/ kg、3. 43 g/ kg ; 回收率在88 %～109 %;色氨酸和酪氨酸的RSD 分别为4. 8 %和5. 2 % ,结果满意。
关键词 阻抑2催化光度法,蛋白质, 复合氨基酸, 色氨酸, 酪氨酸
2003208210 收稿;2004203222 接受
1 引 言
色氨酸( Trp) 和酪氨酸( Tyr) 是人和动物必需的氨基酸,Trp 又是限制性氨基酸,对其测定具有重要
意义。蛋白质和混合氨基酸中的Trp 和Tyr 的测定方法主要有荧光法1 ～3 ,双波长紫外光度法4 ,液
相色谱法5 ,毛细管电泳法6 等。这些方法中所用仪器较贵,且色氨酸与酪氨酸往往相互干扰。本法
利用Trp 和Tyr 与I2 作用,降低了I2 浓度,使I - 催化As3 +2Ce4 + 反应速率减慢。又利用NaCl 对上述催
化反应的影响,可求得不同浓度NaCl 溶液中的Trp 和Tyr 的吸光系数,用多组分吸光度加合原理,建立
联立方程求得Trp 和Tyr 的含量。研究发现苯丙氨酸、组氨酸和其他氨基酸均不干扰测定。这种利用
催化反应速率、不经分离测定蛋白质和混合氨基酸中Trp 和Tyr 的方法,灵敏度高,所用仪器简单。
2 实验部分
2. 1 仪器和试剂
UNICOUV2000 分光光度计(尤尼柯(上海) 仪器有限公司) ;恒温水浴。试剂皆为分析纯。0. 13
mg/ L KI ,0. 5 g/ L 和5 g/ L NaCl , 5 g/ L 马钱子碱(含3 mL 冰乙酸) ,4. 5 mol/ L H2SO4 ,1 mg/ L 、2 mg/
L Trp ,5 mg/ L 、10 mg/ L Tyr ,0. 025 mol/ L As2O3 ,0. 02 mol/ L Ce (SO4) 2 。
2. 2 实验方法
在若干支25 mL 比色管中,均加入0. 13 mg/ L KI 1. 0 mL , 4. 5 mol/ L H2SO4 0. 5 mL 、0. 025 mol/ L
As2O3 0. 5 mL 、0. 5 g/ L (或5 g/ L) NaCl 0. 5 mL 溶液,加入标准样品(或样品) ,加蒸馏水至9 mL 。同时
作空白实验。30 ℃±0. 2 ℃水浴5 min ,依次加入0. 02 mol/ L Ce (SO4) 2 0. 5 mL ,计时(每管间隔30 s) ,立刻摇匀,放水浴中,至第一支管16 min (或12 min ) 时,依次加入5 g/ L 马钱子碱0. 5 mL ,立刻摇匀,每管间隔30 s ,全部加完后,皆放入沸水浴,煮沸5 min ,取出冷至室温,用520 nm 波长,1 cm 比色皿,以
蒸馏水为参比,测定吸光度A 。
3 结果与讨论
3. 1 酸度条件的选择
测定液中Trp 和Tyr 分别为0. 6 mg/ L 和3. 0 mg/ L ,在0. 1～0. 5 mol/ L H2SO4 范围内测定, 结果
表明:随酸度的改变,阻抑速差变化不大。本法选择4. 5 mol/ L H2SO4 0. 5 mL 。
3. 2 NaCl 用量
Cl - 能加快As3 +2Ce4 + 反应速率,且是本法测定Trp 和Tyr 吸光系数的条件,加入量必须准确无误。
用0. 1～1. 0 mg/ L Trp 和0. 5～10 mg/ L Tyr 在0. 025～1. 3 g/ L NaCl 溶液中测定,结果表明:随NaCl
浓度增大,阻抑速差降低;当NaCl 低于0. 025 g/ L 时,阻抑速差增大,但重现性、稳定性差;NaCl 高于1
g/ L 时,阻抑速差小。本法选用NaCI 为0. 025 g/ L 或0. 25 g/ L 。
3. 3 KI 用量选择
KI 是As3 +2Ce4 + 反应的催化剂,KI 浓度对催化反应速率影响显著。在KI 浓度为0. 013～0. 039
mg/ L 范围内测定Trp 和Tyr ,结果KI 浓度在0. 039 mg/ L 时,阻抑速差几乎为零,以致无法测定Trp
和Tyr 。本法选用KI 浓度为0. 013 mg/ L 。
3. 4 反应温度和反应时间的选择
用NaCI 浓度为0. 025 和0. 25 g/ L ,Trp 、Tyr 分别为0. 0～1. 0 、0. 0～10. 0 mg/ L ,在18 ℃、20 ℃、25 ℃和30 ℃测定,结果随温度的增加阻抑速差增大,灵敏度增加。本法选用30 ℃±0. 2 ℃为宜。反应时
间为16 或12 min ,低于8 min 或高于20 min ,误差明显增大。
3. 5 标准曲线和联立方程的建立
在0. 025 g/ L NaCI 溶液中,测定0. 0～0. 6 mg/ L Trp 和0. 0～6. 5 mg/ L Tyr ,得吸光度A1 ,Trp和A1 ,Tyr ,回归方程分别为: A1 , Trp = 0. 766 C1 + 0. 139 , A1 ,Tyr = 0. 1325 C2 + 0. 1395 , rTrp = 0. 9975 , rTyr = 0. 9994 ,线性
范围分别为0. 0～0. 65 和0. 0～4. 0 mg/ L ; A1 , Trp 、A1 ,Ty r分别减去空白得加合方程为A1 = 0. 766 C1 + 0.
1325 C2 。
在0. 25 g/ L NaCI 溶液中,反应12 min ,其他条件同上,可得A 2 ,Trp = 0. 2889 C1 + 0. 176 , A 2 ,Tyr =
010346 C2 + 0. 0183 , r Trp = 0. 9994 , r Tyr = 0. 9955 ,线性范围分别为0. 0～1. 3 mg/ L 和0. 1～4. 0 mg/ L ,加合方程为A 2 = 0. 2889 C1 + 0. 0346 C2 。联立方程为
A 1 = 0. 766 C1 + 0. 1325 C2
A 2 = 0. 2889 C1 + 0. 0346 C2
将A 1 和A 2 代入方程解之,求得C1 和C2 。
3. 6 方法的精密度和灵敏度
Trp 和Tyr 浓度分别为0. 4 和4. 0 mg/ L 的混合溶液,分别在0. 025 和0. 25 g/ L NaCl 溶液中各做
6 份平行,按联立方程求得C1 和C2 ,经计算得相对标准偏差(RSD) 为2. 3 %和4. 6 % ,摩尔吸光系数在
01025 g/ L NaCl 溶液中,εTrp = 1. 56 ×105 L·mol - 1·cm- 1 、εTyr = 2. 41 ×104 L·mol - 1·cm- 1 ;在0. 25 g/ L
NaCl 溶液中,εTrp = 5. 90 ×104 L·mol - 1·cm- 1 、εTyr = 6. 29 ×103L·mol - 1·cm- 1 ,符合光度法的要求。
3. 7 某些离子和氨基酸的影响
在要求相对误差< ±5 %的情况下,15 倍量的K+ 、Na + 、Mg2 + 、Ca2 + 、Zn2 + ,8 倍量的NH+
4 不干扰
测定,1 mg/ L 的Hg2 + 、Ag + 、Cr3 + 、Pb2 + 有干扰,所分析的样品中无Hg2 + 、Ag + 、Cr3 + 、Pb2 + 存在,不影响
测定;12. 5 倍的亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、蛋氨酸、组氨酸,2 倍的苯丙氨酸不干扰Trp 和Tyr 的测定。
3. 8 试样分析
按文献7 在14 种氨基酸中再加入0. 38 g/ L 酪氨酸,稀释380 倍,取2 mL 按实验方法,在0. 025
和0. 25 g/ L NaCl 溶液中测定。另取玉米的醇溶蛋白0. 1240 g ,加100 g/ L KOH 3. 1 mL ,40 ℃水解24
h ,快速加温至80 ℃,10 min ,速冷至室温,加蒸馏水约为70 mL ,定容至100 mL ,取25. 0 mL ,加4. 5
mol/ L H2SO4 调pH≈7 ,过滤,滤液定容至50 mL ,取3. 0 mL 用于测定,混合氨基酸的Typ 、Try 测量值
分别为018037 g/ L 、31591 g/ L ;醇溶蛋白的Typ 、Try 测量值分别为1. 8 g/ kg、3. 43 g/ kg。并做了标准
加入回收实验,结果见表1 。回收率在88 %～109 % ,Trp 和Tyr 的RSD 分别为4. 8 %和5. 2 %。
8 6 0 1 分析化学第32 卷
表1 样品溶液回收实验结果( n = 6)
Table 1 Recovery results of sample solutions ( n = 6)
样品
Samples
平均值
Mean
(mg/ L)
加入量
Added
(mg/ L)
测得总量
Total found
(mg/ L)
回收率
Recovery
( %)
混合氨基酸液
Mix amino acid
Trp 0. 423
0. 20
0. 30
0. 599 0. 605 0. 640
0. 709 0. 744
88. 0 91. 0 108. 5
95. 3 107. 0
Tyr 1. 89
1. 00
1. 50
2. 820 2. 980
3. 435 3. 495
93. 0 109. 0
103. 0 107. 0
蛋白质
Protein
Trp 0. 337
0. 20
0. 30
0. 496 0. 526
0. 609 0. 644
92. 5 98. 6
95. 6 101. 1
Tyr 0. 634
2. 00
3. 00
2. 677 2. 653
3. 608 3. 621
106. 9 103. 1
96. 0 98. 0
Try : 色氨酸(tryptphan) ; Tyr : 酪氨酸(tyrosine)
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Determination of Trace Tryptophan and Tyrosine by
Catalytic Spectrophotometry
Sun Yanhua1 , Yang Jingzhi
3 2 , Zhou Jie1 , Fu Lei1
( College of Chemist ry and Material Science1 , College of L if e Science2 ,S handong A gricultural University , Tai′an 271018)
Abstract The kinetic conditions for the inhibitory effect of t ryptophan and tyrosine on the catalysis of io2
dide anion on the arsenous acid2cerium ( IV) sulfate reaction in sulfuric acid medium were studied. The u2
nited equation was established for the determination of t ryptophan and tyrosine in 0. 001 mol/ L Ce (SO4) 2 ,0. 00125 mol/ L As2O3 , 01013 mg/ L KI , 0. 225 mol/ L H2SO4 , 0. 025 g/ L and 0. 25 g/ L NaCl solution ,the linear response range are 0. 0～0. 65 mg/ L 、0. 0～4. 0 mg/ L and 0. 0～1. 3 gm/ L , 0. 10～4. 0 mg/ L.
The content s of two analytes were obtained respectively by solving the united equations. The method has
been applied to determine t ryptophan and tyrosine in protein and amino acid mixture with satisfactory re2
sult s. The measured value of Trp and Tyr are 0. 8037 g/ L and 3. 591 g/ L in amino acid mixture are 1. 8 g/
kg and 3. 43 g/ kg in protein. The rate of recovery are 88 %～109 %. The relative standard deviation are 4.
8 % and 5. 2 % of t ryptophan and tyrosine.
Keywords Catalytic spect rophotomet ry , protein , amino acid mixture , t ryptophan , tyrosine
(Received 10 August 2003 ; accepted 22 March 2004)
9 6 0 1 第8 期孙衍华等:阻抑速差催化光度法测定痕量色氨酸和酪氨酸, 百拇医药(孙衍华1 杨景芝2 周 杰1 付 蕾1)